李詩言，姜 濤＊，曲仁偉

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長春130033；2.柳河縣醫(yī)院普外二科）

肥胖大鼠血清及肝臟中脂聯(lián)素水平的研究

李詩言1，姜 濤1＊，曲仁偉2

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長春130033；2.柳河縣醫(yī)院普外二科）

肥胖是2型糖尿病、心血管疾病、肝脂肪變性和非酒精性脂肪性肝炎（NASH）常見的危險因素。脂聯(lián)素是一種近年來發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，主要在白色脂肪組織中表達(dá)和分泌，具有增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗，抗炎及抗動脈粥樣硬化的作用，對于血脂和血糖的調(diào)節(jié)也起到重要的作用。流行病學(xué)的研究表明，低脂聯(lián)素水平與NASH有關(guān)，并且脂聯(lián)素保護(hù)肝臟的作用已經(jīng)在動物研究或體外的肝細(xì)胞中被證實。脂聯(lián)素水平升高對肝臟疾病會有所幫助，近年來的文章總結(jié)了它對肝脂肪變性和NASH的保護(hù)作用［1］。本研究旨在探討肥胖大鼠血清及肝臟中脂聯(lián)素水平的變化及其原因和脂聯(lián)素對肥胖相關(guān)的肝臟疾病的影響。

1 材料與方法

1.1 材料和實驗動物分組

正常成年雄性Wistar大鼠30只，體重180－220克，清潔級，由吉林大學(xué)動物實驗中心提供［動物合格證號：SCXK（京）2007—0001］。將實驗大鼠隨機分為對照組20只、肥胖組20只。大鼠血清及組織脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購于南京建成生物工程研究所，BCA蛋白濃度測定試劑盒購于碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2 動物模型制備

實驗大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水，定量給食，對照組大鼠給予普通飼料，實驗組大鼠參照李鴻雁［2］的飼料配方配制高脂飼料，各組大鼠喂養(yǎng)8周。與對照組比較，體重超過20%作為肥胖標(biāo)準(zhǔn)，模型成功率約為80%。

1.3 標(biāo)本采集及處理

成模后處死各組大鼠，每只采血約1ml，靜置30min后2 000轉(zhuǎn)／min離心10min，分離血清，－80℃冰箱保存，用ELISA方法統(tǒng)一檢測血清脂聯(lián)素含量。提取新鮮肝組織，在4℃生理鹽水中勻漿后2 500轉(zhuǎn)／min離心15min，分離上清，－80℃冰箱保存，用ELISA方法統(tǒng)一檢測肝臟內(nèi)蛋白濃度及單位蛋白濃度內(nèi)的脂聯(lián)素含量。

1.4 統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示。均數(shù)間的兩兩比較采用LSD檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。全部統(tǒng)計在SPSS18.0軟件上進(jìn)行。

2 結(jié)果

與對照組比較，成模后肥胖組大鼠體重顯著升高，大鼠血清脂聯(lián)素水平顯著降低，肝臟脂聯(lián)素水平顯著升高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

肥胖時脂肪細(xì)胞體積增大和（或）數(shù)量增加，可引起一系列代謝紊亂，主要表現(xiàn)為甘油三酯（TG）、游離脂肪酸（FFA）和血糖的升高及高密度脂蛋白（HDL）的降低。脂聯(lián)素與體重指數(shù)（BMI）成反比。在高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖嚙齒類動物和ob／ob小鼠，血漿中脂聯(lián)素水平降低，清除率顯著延長，提示脂聯(lián)素的合成在肥胖時明顯受損［3］。內(nèi)臟脂肪堆積與低脂聯(lián)素水平相關(guān)，并且已經(jīng)確定內(nèi)臟脂肪與全身脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān)［4］。本研究中，肥胖大鼠隨著體重的顯著增加，肥胖程度越來越嚴(yán)重，血清脂聯(lián)素隨之明顯降低。

肥胖者血中胰島素水平升高，血中胰島素水平與肥胖程度呈正相關(guān)。肥胖還可導(dǎo)致脂肪組織分泌的脂肪因子發(fā)生變化，脂聯(lián)素分泌的減少是內(nèi)臟脂肪增多后胰島素敏感性發(fā)生改變的機制之一。血漿脂聯(lián)素水平在胰島素敏感性增加和體重減輕等情況下升高，在肥胖、胰島素抵抗時降低。提示外周脂聯(lián)素水平的降低與胰島素抵抗伴隨發(fā)生。而肥胖恰恰是胰島素抵抗的主要因素之一。有研究顯示，體重的增加或減輕，胰島素敏感性會相應(yīng)地減低或提高，肥胖和胰島素抵抗呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。胰島素抵抗時機體對胰島素的敏感性降低，出現(xiàn)高胰島素血癥，而胰島素能顯著下調(diào)脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)［5］，進(jìn)而導(dǎo)致脂聯(lián)素生成得更少。于是血清脂聯(lián)素降低與肥胖導(dǎo)致的胰島素抵抗之間形成一個正反饋的“惡性循環(huán)”。此外，肥胖被認(rèn)為是一種慢性炎癥狀態(tài)，減少肥胖，降低那些抑制脂聯(lián)素合成和分泌的促炎癥細(xì)胞因子，如TNF－α和IL－6，可有助于減重后循環(huán)脂聯(lián)素的增加。因此在肥胖組大鼠，這些抑制脂聯(lián)素合成和分泌的促炎因子大量產(chǎn)生，亦可導(dǎo)致血清脂聯(lián)素的下降。

肝臟是糖、脂代謝的重要器官，也是表達(dá)脂聯(lián)素受體2（AdipoR2）的主要器官。脂聯(lián)素受體是介導(dǎo)脂聯(lián)素生物學(xué)功能的重要蛋白。AdipoR2在肝臟中的表達(dá)增加了β氧化旁路和（或）氧化磷酸化過程中相關(guān)酶的表達(dá)，從而使肝臟中的游離脂肪酸快速氧化，進(jìn)而改善脂質(zhì)代謝。在我們的研究中，肥胖組大鼠肝臟內(nèi)脂聯(lián)素水平顯著升高，可能是對低脂聯(lián)素血癥的一種代償性反應(yīng)，以更多地與AdipoR2結(jié)合，發(fā)揮其緩解肥胖的作用。此外，這種肝臟脂聯(lián)素的代償性高水平與肥胖引起的肝臟損傷和脂代謝異常密切相關(guān)。脂聯(lián)素可抑制參與糖異生的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和葡萄糖－6－磷酸酶的活性，增強胰島素對肝細(xì)胞內(nèi)糖異生和肝糖輸出的抑制作用。隨著肥胖的進(jìn)展，機體承擔(dān)的負(fù)荷和肝臟受到的損傷逐漸增多，肝臟作為人體代謝的主要器官，其內(nèi)脂聯(lián)素呈現(xiàn)代償性升高，以起到更好的保護(hù)和調(diào)節(jié)作用。

近年來的研究發(fā)現(xiàn)非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）與肥胖及其引發(fā)的血脂異常密切相關(guān)。NAFLD主要包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪型肝炎（NASH）和肝硬化。以往的研究提示脂聯(lián)素在NAFLD的發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用。在本研究中，隨著肥胖的加劇，大鼠肝臟會受到進(jìn)行性的損傷，其內(nèi)脂聯(lián)素的增高對于NAFLD的防治作用主要體現(xiàn)在以下幾個方面：一、抗脂肪變性［6，7］。二、抗炎和抗細(xì)胞凋亡［8－12］。三：抗纖維化作用［13，14］。NAFLD會隨著肥胖的日益流行而增多，對其病理生理學(xué)的認(rèn)識是發(fā)展非侵入性診斷方法和建立有效治療方案的前提條件。脂聯(lián)素已成為肥胖相關(guān)肝臟疾病的保護(hù)性脂肪因子。然而，脂聯(lián)素受體信號通路和NASH中潛在的肝臟脂聯(lián)素抵抗，到目前為止研究得還不是很明確。AdipoR1／2下游分子的識別和提高脂聯(lián)素受體活性的策略對治療NAFLD是有前景的途徑。脂聯(lián)素有望成為治療肥胖，及其相關(guān)肝臟疾病的切入點。

［1］Wang Y，Zhou M，Lam K S L，et al.Protective roles of adiponectin in obesity－related fatty liver diseases：mechanisms and therapeutic implications［J］.Arquivos Brasileiros de Endocrinologia ＆Metabologia，2009，53（2）：201.

［2］李鴻雁.鋅誘導(dǎo)金屬硫蛋白在高脂血癥及糖尿病發(fā)生過程中的作用及機制研究［D］.吉林大學(xué)，2008.

［3］Halberg N，Schraw T D，Wang Z V，et al.Systemic fate of the adipocyte－derived factor adiponectin［J］.Diabetes，2009，58（9）：1961.

［4］Nakamura Y，Sekikawa A，Kadowaki T，et al.Visceral and Subcutaneous Adiposity and Adiponectin in Middle‐aged Japanese Men：The ERA JUMP Study［J］.Obesity，2009，17（6）：1269.

［5］Fasshauer M，Klein J，Neumann S，et al.Hormonal regulation of adiponectin gene expression in 3T3－L1adipocytes［J］.Biochemical and biophysical research communications，2002，290（3）：1084.

［6］Fruebis J，Tsao T S，Javorschi S，et al.Proteolytic cleavage product of 30－kDa adipocyte complement－related protein increases fatty acid oxidation in muscle and causes weight loss in mice［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences，2001，98（4）：2005.

［7］Awazawa M，Ueki K，Inabe K，et al.Adiponectin suppresses hepatic SREBP1cexpression in an AdipoR1／LKB1／AMPK dependent pathway［J］.Biochemical and biophysical research communications，2009，382（1）：51.

［8］Miele L，Valenza V，La Torre G，et al.Increased intestinal permeability and tight junction alterations in nonalcoholic fatty liver disease［J］.Hepatology，2009，49（6）：1877.

［9］Argo CK，Northup PG，Al－Osaimi A，et al.Systematic review of risk factors for fibrosis progression in non－alcoholic steatohepatitis［J］.Journal of Hepatology，2009，51（2）：371.

［10］Wanninger J，Neumeier M，Weigert J，et al.Adiponectin－stimulated CXCL8release in primary human hepatocytes is regulated by ERK1／ERK2，p38MAPK，NF－κB，and STAT3signaling pathways［J］.American Journal of Physiology－Gastrointestinal and Liver Physiology，2009，297（3）：G611.

［11］Jung T W，Lee Y J，Lee M W，et al.Full－length adiponectin protects hepatocytes from palmitate－induced apoptosis via inhibition of c－Jun NH2terminal kinase［J］.FEBS Journal，2009，276（8）：2278.

［12］Wedemeyer I，Bechmann LP，Odenthal M，Jochum C，Marquitan G，Drebber U，Gerken G，Gieseler RK，Dienes HP，Canbay A.Adiponectin inhibits steatotic CD95／Fas upregulation by hepatocytes：therapeutic implications for hepatitis C［J］.J Hepatol，2009，50：140.

［13］Handy J A，Saxena N K，F(xiàn)u P，et al.Adiponectin activation of

AMPK disrupts leptin－mediated hepatic fibrosis via suppressorsof cytokine signaling（SOCS－3）［J］.Journal of Cellular Biochemistry，2010，110（5）：1195.

［14］JardéT，Caldefie－Chézet F，Goncalves－Mendes N，et al.Involvement of adiponectin and leptin in breast cancer：clinical and in vitro studies［J］.Endocrine－related Cancer，2009，16（4）：1197.

2014－01－14）

1007－4287（2014）10－1597－03

＊通訊作者