邢冬杰，項(xiàng)東宇，張彩坤

(山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 264199)

桑枝活性成分提取及藥理作用研究進(jìn)展△

邢冬杰*，項(xiàng)東宇，張彩坤

(山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 264199)

現(xiàn)代研究表明桑枝具有抗氧化、抗炎、降脂、降糖、抗癌、降壓等作用。筆者就當(dāng)前桑枝化學(xué)成分、成分提取、藥理作用作一綜述，為桑樹資源進(jìn)一步的研究和開發(fā)提供依據(jù)。

桑枝；藥理作用；研究進(jìn)展

桑枝是?？浦参锷orusalbaL.的干燥嫩枝，性平，味微苦。歸肝經(jīng)。桑枝的藥理作用在我國很早就有醫(yī)書記載，如《本草撮要》記載：“桑枝，功專去風(fēng)濕拘攣”，《本草圖經(jīng)》記載：“桑枝療遍體風(fēng)癢干燥，兼療口干”。目前桑枝在臨床多應(yīng)用于關(guān)節(jié)腫痛、手足麻木等疾病?，F(xiàn)代研究表明桑枝具有抗氧化、抗炎、降脂、降糖等作用[1-2]。筆者就桑枝化學(xué)成分、成分提取、藥理作用作一綜述，為桑樹資源進(jìn)一步的研究和開發(fā)提供參考。

1 桑枝的化學(xué)成分

桑枝所含化學(xué)成分種類較多，主要有黃酮類化合物、多糖類化合物、生物堿和氨基酸，此外還有一些揮發(fā)油、鞣質(zhì)、琥珀酸、腺嘌呤、多種維生素等[3]。黃酮類化合物主要包括桑素、桑色烯、環(huán)桑素、環(huán)桑色烯等；多糖類化合物主要包括鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖[4]；生物堿和氨基酸類包括1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，DNJ)、N-methyl-l-eoxynojirimycin、fago-mine、4-O-β-D-glucop-yranosylfagomine、γ-氨基丁酸和L-天門冬氨酸[5]。

2 桑枝中主要活性成分的提取

2.1 黃酮類化合物

陳建明等[6]以分光光度法測定桑枝總黃酮，正交試驗(yàn)法對桑枝總黃酮超聲提取工藝進(jìn)行研究，確定最佳工藝條件為乙醇濃度80%，料液比1∶ 8，超聲提取3次，每次提取時(shí)間20 min，桑枝總黃酮平均含量為0.719%。而在對桑枝皮的黃酮提取研究中，確定桑枝皮總黃酮提取的最佳工藝條件：提取溫度為80 ℃，原料質(zhì)量濃度為33 g·L-1，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，提取時(shí)間為120 min，在此條件下，桑枝皮總黃酮的提取率可達(dá)1.01%[7]。

2.2 桑枝多糖

王佩香等[4]研究了桑枝多糖的提取，將桑枝烘干，粉碎成末，加10倍的蒸餾水，90 ℃提取3次，合并提取液，減壓濃縮后，加入4倍體積的95%乙醇，靜置過夜，離心、過濾，即得桑枝粗多糖。三氯乙酸法脫蛋白、透析、冷凍干燥，經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析，依次用水、0.02～0.5 mol·L-1的氯化鈉(NaCl)溶液洗脫，分別收集洗脫液，以改良的苯酚-硫酸法跟蹤檢測，根據(jù)洗脫曲線收集尖峰部分，分別取0.06 mol·L-1和0.2 mol·L-1的NaCl溶液洗脫部分，蒸餾水透析2 d，冷凍干燥，再經(jīng)Sephadex G-100柱層析，0.1 mol·L-1的NaCl洗脫，以改良的苯酚-硫酸法跟蹤檢測，根據(jù)洗脫曲線收集尖峰部分，透析，冷凍干燥，得到精制桑枝多糖。

2.3 生物堿和氨基酸

周炎等[8]研究了桑枝中脫氧野尻霉素(DNJ)的提取，將桑枝粉碎，80%乙醇作為提取劑，60 ℃提取2 h，提取液通過陽離子交換樹脂，以0.25 mol·L-1的氨水洗脫，流速控制在1～2 mL·min-1，洗脫液經(jīng)正丁醇萃取，濃縮、干燥后得到成品。此為桑枝中DNJ的最佳提取條件，提取率達(dá)0.176%。

陳震等[5]研究了桑枝水提取物化學(xué)成分，將桑枝切片，用去離子水回流提取3次，提取液合并后濃縮，加入等體積乙醇，離心除去沉淀，上清液通過732離子交換樹脂、0.5 mol·L-1氨水洗脫，收集Dragendorff試驗(yàn)陽性部分，濃縮干燥得浸膏。浸膏經(jīng)Am berlite CG-50離子交換樹脂柱分離，水洗脫部分分為4部分，每部分分別選用Dowex 1×2離子交換樹脂、Dow ex 50W-×8離子交換樹脂及CM Sephadex C-25柱層析分離純化，得4種多羥基生物堿及2個(gè)氨基酸。

3 桑枝藥理作用

3.1 抗氧化作用

章丹丹等[9]通過對桑枝總黃酮的直接抗氧化能力測定以及其對2種細(xì)胞炎癥模型抗氧化活性的研究，明確桑枝總黃酮于體外直接測定或干預(yù)細(xì)胞后均顯示出抗氧化活性，其作用機(jī)制側(cè)重于自由基的清除。廖森泰等[10]研究表明桑枝總黃酮含量越高，抗氧化能力越強(qiáng)。張作法等[11]通過液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法鑒定桑枝的主要抗氧化活性物質(zhì)是氧化芪三酚，定量分析顯示桑枝中氧化芪三酚含量豐富。此外，桑枝多糖可顯著升高糖尿病模型小鼠的血清超氧化物歧化酶活性，降低丙二醛含量，具有清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化的能力[12]。由此可見，桑枝具有較強(qiáng)的抗氧化作用，如桑枝的水提醇沉液對糖尿病小鼠腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，即為其抗氧化作用的結(jié)果[13]。

3.2 抗炎、鎮(zhèn)痛作用

章丹丹等[14-15]采用有機(jī)溶劑萃取和大孔吸附樹脂富集的方法，制備桑枝乙醇提取物不同萃取部位Ⅰ～Ⅳ，將各提取部位及不同部位組合分別作用于細(xì)胞后，通過測定細(xì)胞亞硝酸鹽的量、細(xì)胞活力、細(xì)胞抗氧化能力、炎癥介質(zhì)基因的表達(dá)、炎癥介質(zhì)蛋白的表達(dá)等指標(biāo)，對桑枝的抗炎有效部位及其組合的抗炎作用進(jìn)行評價(jià)。確定桑枝提取部位Ⅰ(總黃酮)和Ⅱ(總皂苷)是其抗炎的活性部位，通過下調(diào)致炎系統(tǒng)中誘生型一氧化氮合酶、環(huán)氧合酶-2、炎性介質(zhì)白細(xì)胞介素-1β和白細(xì)胞介素-6的表達(dá)上調(diào)抗炎系統(tǒng)中血紅素加氧酶和過氧化物酶增殖體受體的表達(dá)，使細(xì)胞內(nèi)環(huán)境趨向致炎和抗炎體系的平衡。部位Ⅰ和Ⅱ等比配比組合對炎癥中多個(gè)靶點(diǎn)均有較好的協(xié)同調(diào)控作用，進(jìn)而發(fā)揮更佳抗炎效果。

Guo等[16]研究表明，應(yīng)用桑枝多糖對小鼠進(jìn)行灌胃治療后，腎組織中白細(xì)胞介素-6、干擾素-γ和腫瘤壞死因子-α水平下降，病理切片顯示小鼠腎損傷有效減輕，白細(xì)胞介素-1的蛋白質(zhì)水平和白介素-1受體表達(dá)在腎組織中出現(xiàn)了明顯下降，NF-κB被抑制，認(rèn)為桑枝多糖的腎臟保護(hù)功能與阻斷IL-1/NF-κB通路從而減輕腎內(nèi)炎癥反應(yīng)有關(guān)。

此外，研究人員從桑枝中分離出一種桑皮苷A，證明了該化合物能抑制細(xì)胞炎癥模型中一氧化氮的產(chǎn)生和誘生型一氧化氮合酶的表達(dá)，同時(shí)對角叉菜膠所致小鼠足浮腫具有顯著的抗炎活性，還能有效地緩解由福爾馬林所引起的小鼠疼痛反應(yīng)，說明桑枝具有很好的抗炎、止痛作用[17]。

3.3 降血脂作用

劉先明等[18]用桑枝皮水醇提取物灌胃治療急性高血脂癥模型小鼠，18 h后小鼠血清中的三酰甘油(Triglycerides，TG)含量水平得到顯著抑制，其中高劑量組(600 mg·kg-1)小鼠血清中的TG含量下降36.6%，膽固醇(Total Cholesterol，TC)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL-C)含量分別下降8.3%、18.3%，高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol，HDL-C)含量升高9.3%，同時(shí)小鼠血清的動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)的值、LDL-C與HDL-C的比值也明顯下降。何雪梅等[19]用桑枝60%乙醇提取物對脂肪乳制備的高脂血癥大鼠干預(yù)治療4周，高、中、低劑量組均能顯著降低高脂血癥大鼠的TC、TG含量，其中高劑量組TC含量與正常對照組差異不顯著，高、中、低劑量組桑枝提取物均能顯著升高HDL-C含量，桑枝提取物高劑量組和中劑量組能顯著降低血清中LDL-C含量。

3.4 降血糖作用

吳志平等[1，20]用鏈脲佐菌素復(fù)制糖尿病小鼠模型，分別用桑葉、桑枝、桑白皮和桑皮的乙醇提取液灌胃治療15 d，發(fā)現(xiàn)桑枝的降血糖作用最為顯著，并且進(jìn)行了桑枝總黃酮類化合物的降血糖藥效學(xué)試驗(yàn)研究，認(rèn)為桑枝總黃酮是桑枝降血糖作用的有效部位。

還有研究顯示[12，21]，桑枝多糖能顯著降低鏈脲佐菌素+高脂高糖喂養(yǎng)制備的糖尿病模型小鼠的血糖濃度，與給藥前相比，給藥4周后桑枝多糖400 mg·kg-1和600 mg·kg-1組血糖濃度分別下降33.3%和29.9%；與模型組相比，桑枝多糖400 mg·kg-1和600 mg·kg-1組血糖濃度分別下降了40.4%和38.8%。其作用機(jī)制可能與其增強(qiáng)機(jī)體清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化能力、調(diào)節(jié)脂類物質(zhì)代謝、增加肝糖原存儲(chǔ)量、改善機(jī)體的胰島素分泌及對胰島素的增敏性等有關(guān)。

此外，桑枝中含有的DNJ可作為α-葡萄糖苷酶抑制劑治療糖尿病，桑枝皮層是桑樹中DNJ含量最高部位之一[22]。DNJ在小腸內(nèi)能與α-葡萄糖苷酶結(jié)合，且親和性明顯比麥芽糖、蔗糖等雙糖高，因而可抑制雙糖的分解，使糖分在腸道內(nèi)的吸收量明顯降低，可抑制餐后血糖升高，達(dá)到預(yù)防和治療糖尿病的目的，其降糖機(jī)制是減緩小腸對多糖的消化及對葡萄糖的吸收[23-24]。

3.5 抗病毒、抗腫瘤作用

在培養(yǎng)丙型肝炎病毒(Hepatitis c virus，HCV)感染細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入DNJ后，HCV被迅速殺滅，表明DNJ及其衍生物是潛在的用于治療病毒性丙型肝炎的藥物[25]。此外，Wang等[26]以小鼠B-16肺黑色細(xì)胞腫瘤為模型，研究DNJ及其衍生物的抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性，結(jié)果表明DNJ能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的入侵、遷移和黏附，其機(jī)理可能與抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的活性以及增強(qiáng)金屬蛋白酶組織抑制劑-2的核糖核酸表達(dá)有關(guān)。

3.6 免疫調(diào)節(jié)作用

通過二硝基氟苯誘導(dǎo)的遲發(fā)性超敏反應(yīng)研究桑枝多糖對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響，同時(shí)通過溶血素生成試驗(yàn)研究桑枝多糖對小鼠體液免疫功能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，桑枝多糖能顯著抑制遲發(fā)性超敏反應(yīng)小鼠的耳腫脹程度[27]。另有實(shí)驗(yàn)通過給小鼠灌胃治療7 d，觀察桑枝多糖對小鼠免疫器官重量、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、血清溶血素含量、溶血空斑的影響，結(jié)果顯示桑枝多糖可顯著提高小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率與吞噬指數(shù)，顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化以及血清溶血素和溶血空斑的形成[28]。由此說明桑枝多糖具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能和非特異性免疫功能的作用。

3.7 降血壓作用

桑枝或桑根的皮煎劑口服有較好的降壓效果，其降壓成分可能為乙酞膽堿樣物質(zhì)。有研究認(rèn)為[3]，這種降壓成分為kuwanon G、H，sanggenon C、D和桑吠喃C、F、G。

4 小結(jié)

桑枝藥用歷史悠久，近年來對其成分、提取工藝、藥理作用等方面的研究正逐步深入，但天然活性成分中的部分組成和結(jié)構(gòu)還不是十分明確。我國桑枝年產(chǎn)量巨大，但大都被作為廢棄物燒掉，若能將其作為藥材資源進(jìn)行廣泛研究、開發(fā)，對其合理利用具有深遠(yuǎn)意義。

[1] 吳志平，周巧霞，顧振綸，等.桑樹不同藥用部位的降血糖效果比較[J].蠶業(yè)科學(xué)，2005，31(2)：215-217.

[2] Zhang Z F，Jin J，Shi L G.Antioxidant activity of the derivatives of polysaccharide extracted from a Chinese medical herb(Ramulus mori)[J].Food Sci Technol Res，2008，14(2)：160-168.

[3] 姜乃珍，薄銘，吳志平，等.中藥桑枝化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].江蘇蠶業(yè)，2006，27(2)：4-7.

[4] 王佩香，歐陽臻，張磊，等.桑枝多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)初步分析[J].中成藥，2010，32(8)：1382-1385.

[5] 陳震，汪仁蕓，朱麗蓮，等.桑枝水提取物化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2000，31(7)：502-505.

[6] 陳建明，陳彬，陳建真.桑枝總黃酮的超聲提取工藝研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2010，39(5)：105-106.

[7] 周林，徐立，伍春，等.桑枝皮總黃酮提取工藝條件的優(yōu)化試驗(yàn)[J].蠶業(yè)科學(xué)，2010，36(3)：491-495.

[8] 周炎，劉朝良，朱保建，等.桑枝中脫氧野尻霉素的提取及其降血糖效果的研究[J].激光生物學(xué)報(bào)，2009，17(5)：625-629.

[9] 章丹丹，高月紅，Jessica Tao Li，等.桑枝總黃酮的抗氧化活性研究[J].中成藥，2011，33(6)：943-946.

[10] 廖森泰，何雪梅，鄒宇曉，等.廣東桑枝條黃酮含量測定及抗氧化活性研究[J].北方蠶業(yè)，2005，26(3)：37-41.

[11] 張作法，時(shí)連根.在線液相色譜法和液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法檢測桑枝中抗氧化活性成分[J]中國中藥雜志，2012，37(6)：800-802.

[12] 洪德志，時(shí)連根.桑枝多糖對糖尿病模型小鼠的降血糖作用[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2012，26(6)：806-809.

[13] 韓蕾，黃衛(wèi)，于瀅，等.桑枝對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(9)：1945-1947.

[14] 章丹丹，凌霜，張洪平，等.桑枝總黃酮體外抗炎活性及機(jī)制研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21(11)：2787-2790.

[15] 章丹丹，唐寧，華曉東，等.桑枝提取部位及其組合對巨噬細(xì)胞炎癥介質(zhì)的影響[J].中草藥，2013，44(2)：186-192.

[16] Guo C，Liang T，He Q，et al.Renoprotective effect of ramulus mori polysa-ccharides on renal injury in STZ-diabetic mice[J].Int J Biol Macromol，2013，62(11)：720-725.

[17] Zhang Z，Shi L.Anti-inflammatory and analgesic properties of cis-mulberroside A from Ramulus mori[J].Fitoterapia，2010，81(3)：214-218.

[18] 劉先明，李琳，王元凈，等.桑枝皮提取物對急性高血脂癥小鼠血脂水平的影響[J].蠶業(yè)科學(xué)，2011，37(4)：771-774.

[19] 何雪梅，廖森泰，鄒宇曉，等.桑枝提取物對高脂血癥大鼠的降血脂及抗氧化作用研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19(2)：462-464.

[20] 吳志平，顧振綸，談建中，等.桑枝總黃酮的降血糖作用[J].中草藥，2005，(增刊)：239-241.

[21] Guo C，Li R，Zheng N，et al.Anti-diabetic effect of ramulus mori polysaccharides，isolated from Morus alba L，on STZ-diabetic mice through blocking inflammatory response and attenuating oxidative stress[J].Int Immunopharmacol，2013，16(1)：93-99.

[22] 劉衛(wèi)旗，朱祥瑞.桑樹不同部位DNJ的含量分析[J].蠶桑通報(bào)，2006，37(4)：31-34.

[23] Li Y G，Ji D F，Zhong S，et al.1-deoxynojirimycin inhibits glucose absorption and accelerates glucose metabolism in streptozotocin-induced diabetic mice[J].Sci Rep，2013，20(3)：1377.

[24] 王曉梅，鄭濤，魏莉方.桑枝提取物對α-葡萄糖苷酶的作用[J].世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2012，14(2)：1464-1467.

[25] Timokhova A V，Bakinovskiǐ L V，Zinin A I，et al.Affect of deoxynojirimycin derivatives on hepatitis C virus morphogenesis[J].Mol Biol(Mosk)，2012，46(4)：644-653.

[26] Wang R J，Yang C H，Hu M L.1-Deoxynojirimycin inhibits metastasis of B16F10 melanoma cells by attenuating the activity and expression of matrix metalloproteinases-2 and-9 and altering cell surface glycosylation[J].J Agric Food Chem，2010，58(16)：8988-8993.

[27] 游元元，萬德光，楊文宇，等.四種桑類藥材對小鼠免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2008，24(3)：83-84.

[28] 洪德志，陳亞潔，蔣學(xué)，等.桑枝水提物對正常小鼠免疫功能的影響[J].蠶桑通報(bào)，2012，43(3)：22-25.

AReviewoftheRamulusmorionItsChemicalandPharmacologicalStudies

XING Dongjie*，XIANG Dongyu，ZHANG Caikun

(ShandongcollegeofTraditionalChinesemedicine，Yantai264199，China)

Studies on pharmacological effects ofRamulusmoriconcluded that the herbals or the extracts of R.mori have effects on antioxidant and anti-inflammatory，lipid-lowering，hypoglycemic，anti-cancer and anti-hypertensive.In this paper，we review the chemical composition，and pharmacological ofMorusalba.And it will be meaningful for the further study ofMorusalba.

Ramulus mori；Pharmacological effects；Research progress

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.11.019

2014-02-19)

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2009-271)

*

邢冬杰，講師，研究方向：糖尿病及其并發(fā)癥的治療；Tel：(0535)2765121，E-mail：sddjdyx@163.com