鄭火青陳秀賢周 婷胡福良

（1浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，杭州310058；2中國農(nóng)科院蜜蜂研究所，北京100093）

一場悄無聲息的巨變
——蜜蜂孢子蟲病的變遷與防治

鄭火青1陳秀賢1周 婷2胡福良1

（1浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，杭州310058；2中國農(nóng)科院蜜蜂研究所，北京100093）

蜜蜂孢子蟲病，又稱微粒子病，是由蜜蜂微孢子蟲引起的一種成年蜂常見的消化道傳染病。微孢子蟲是一類專營細胞內(nèi)寄生的原始的真核寄生蟲，分布廣泛，不同種寄生不同動物，對昆蟲、魚類、人類等幾乎所有動物都有影響。微孢子蟲的感染對蜜蜂、家蠶等經(jīng)濟昆蟲構(gòu)成了嚴重威脅，是蠶種檢疫的主要內(nèi)容之一。蜜蜂微孢子蟲在蜜蜂中腸上皮細胞內(nèi)生長、繁殖、破壞腸道正常功能，發(fā)病輕微時癥狀不明顯，加上蜂場不具備確診病原的條件，蜜蜂孢子蟲病常被忽視。

目前發(fā)現(xiàn)并確認的蜜蜂微孢子蟲有兩種，分別是1909年在西方蜜蜂體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的西方蜜蜂微孢子蟲（Nosema apis）與1994年在北京的中華蜜蜂體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的東方蜜蜂微孢子蟲（N.ceranae）。在相當長一段時間內(nèi)，普遍認為自然狀態(tài)下西方蜜蜂感染的僅是西方蜜蜂微孢子蟲。直至2006年和2007年，國際上兩個研究團隊分別報道在西班牙和我國臺灣西方蜜蜂體上發(fā)現(xiàn)東方蜜蜂微孢子蟲的研究結(jié)果。這一研究結(jié)果影響深遠，意味著東方蜜蜂微孢子蟲出現(xiàn)了宿主轉(zhuǎn)移，西方蜜蜂面臨著一個新病原的威脅。而2006年正值美國報道蜂群崩潰綜合癥（CCD），歐洲各國也相繼出現(xiàn)大量蜂群損失，人們自然就將西方蜜蜂的這一新病原和蜂群損失相聯(lián)系，關(guān)于東方蜜蜂微孢子蟲的研究出現(xiàn)井噴式的增長，成為近年來農(nóng)業(yè)研究領(lǐng)域的十大熱點之一。

隨后幾年關(guān)于蜜蜂微孢子蟲的研究表明，東方蜜蜂微孢子蟲已經(jīng)廣泛分布于世界各地，蜂群感染率很高，在很多地方都有取代西方蜜蜂微孢子蟲的趨勢，并成為很多國家（以西班牙為典型）蜂群驟減的主要原因。2008年周婷研究團隊對中國主要養(yǎng)蜂地區(qū)蜜蜂微孢子蟲的種類進行分析，發(fā)現(xiàn)中國西方蜜蜂微孢子蟲病的病原是東方蜜蜂微孢子蟲（N.ceranae），而沒有發(fā)現(xiàn)之前廣泛認定的西方蜜蜂微孢子蟲（N.apis）[1]。

1 兩種微孢子蟲差異明顯

兩種微孢子蟲雖然形態(tài)結(jié)構(gòu)相似（西方蜜蜂微孢子蟲孢子略大），但存在很多的不同之處，甚至東方蜜蜂微孢子蟲與胡蜂微孢子蟲的親緣關(guān)系更近，而非西方蜜蜂微孢子蟲。之前對西方蜜蜂微孢子蟲的認識并不能直接應(yīng)用于東方蜜蜂微孢子蟲。例如，西方蜜蜂微孢子蟲感染存在明顯的季節(jié)性，在春季和秋季會出現(xiàn)高峰，而東方蜜蜂微孢子蟲感染季節(jié)性不明顯，可全年感染，在夏季感染嚴重。這一點可能與兩種微孢子蟲感染的溫度范圍有關(guān)，西方蜜蜂微孢子蟲溫度范圍較窄，而東方蜜蜂微孢子蟲更耐熱。由于東方蜜蜂微孢子蟲侵染西方蜜蜂的歷史較短，對于西方蜜蜂來說，這是一種新的寄生蟲，還沒有經(jīng)過一定時間的協(xié)同進化，對西方蜜蜂造成的危害比與之經(jīng)過了長時間協(xié)同進化的西方蜜蜂微孢子蟲更為嚴重。

雖然蜜蜂微孢子蟲的毒力可能因為不同的基因型而不同，不同的蜜蜂也有不同的抗性，但綜合而言，其影響不容忽視。作為一種細胞內(nèi)寄生蟲，它的寄生、繁殖會消耗蜜蜂體內(nèi)的營養(yǎng)，破壞中腸上皮細胞的正常結(jié)構(gòu)，影響消化吸收能力，導(dǎo)致體質(zhì)變差，給其他病原菌的侵襲提供更多的機會。有研究表明，東方蜜蜂微孢子蟲會導(dǎo)致西方蜜蜂免疫受到抑制，而西方蜜蜂微孢子蟲則會引發(fā)蜜蜂的免疫應(yīng)答[2]。另外，微孢子蟲的感染會導(dǎo)致工蜂提早發(fā)育成采集蜂，壽命縮短；也會導(dǎo)致采集力和泌漿能力下降；對蜜蜂的行為、生理和信息素都會產(chǎn)生影響。

2 蜂花粉對微孢子蟲感染的多面影響

蜂花粉是蜜蜂蛋白質(zhì)飼料的主要來源，對蜜蜂健康和發(fā)展非常重要，但它對蜜蜂微孢子蟲感染卻有著多面的影響。其一，蜂花粉是孢子蟲傳播的重要媒介。有研究證實，染病群采集的蜂花粉極有可能攜帶有感染力的孢子[3]。隨著帶孢子的蜂花粉被其他蜜蜂食用，微孢子蟲進一步傳播。其二，蜂花粉本身會促進受微孢子蟲感染蜜蜂體內(nèi)孢子的繁殖。在實驗條件下，給所有蜜蜂接種等量的孢子，分組后分別飼喂糖水或糖水和蜂花粉（經(jīng)紫外燈照射及飼喂實驗確認不攜帶有活力的孢子），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼喂蜂花粉的蜜蜂體內(nèi)孢子的繁殖速度是只飼喂糖水的蜜蜂的3～5倍。這一現(xiàn)象可能是微孢子蟲周年流行規(guī)律的重要影響因素之一。其三，蜂花粉對感染孢子蟲病的蜜蜂起到了保護作用。盡管食用蜂花粉促進了受微孢子蟲感染蜜蜂體內(nèi)孢子的繁殖，但食用蜂花粉的染病蜜蜂仍然比沒有食用花粉的染病蜜蜂壽命長，說明在染病情況下給蜜蜂提供花粉仍然是有利的[4]。

蜂花粉的這些多面影響在養(yǎng)蜂生產(chǎn)上有應(yīng)用意義。第一，給蜂群提供充足的營養(yǎng)能提高染病蜂群抵抗力；第二，在給蜂群飼喂蜂花粉時要杜絕由蜂花粉媒介的孢子傳播，特別是從市場上購買蜂花粉用來飼喂時要更加注意；第三，蜜蜂食用蜂花粉會加速孢子的繁殖，為其進一步侵染提供更多的機會。因此，在蜂群染病時，一方面要加強營養(yǎng)，另一方面還要加強治療。

3 微孢子蟲感染的診斷

癥狀診斷：西方蜜蜂微孢子蟲感染嚴重的蜂群會有下痢的典型癥狀，箱壁上可見蜜蜂排便的污漬。但感染東方蜜蜂微孢子蟲卻少有這一典型癥狀。孢子蟲病主要作用在蜜蜂的消化系統(tǒng)，中腸病理變化引起的癥狀比較明顯。如有可疑蜂群患孢子蟲病時，可以取新鮮病蜂數(shù)只，剪去頭部，用鑷子或手夾住蜜蜂尾部末節(jié)拖拽取出蜜蜂中腸。健康蜜蜂的中腸呈赤褐色，環(huán)紋明顯，并具有彈性和光澤。如果中腸膨大，呈灰白色，環(huán)紋不清，失去彈性，可懷疑是孢子蟲病。但這一方法可靠性不高，一方面有病癥的中腸外觀可能會由其他病原引起，另一方面花粉顏色和食用量也會影響中腸外觀。也有人指出，蜜蜂在染病后食欲和饑餓水平提升，會出現(xiàn)不取食糖漿卻大量溺死在飼喂器的現(xiàn)象，這也可作為判斷感染東方蜜蜂微孢子蟲的典型標志。

鏡檢：鏡檢是比較準確的鑒定方法。在巢門口抓取30只采集蜂，取腹部研磨，加30 ml水制成懸濁液，取10 μl或1滴置于血球計數(shù)板或載玻片上，蓋上蓋玻片在400倍光學(xué)顯微鏡下觀察，若發(fā)現(xiàn)有橢圓形，帶有折光性的大米粒狀孢子，即可確診為孢子蟲病。可根據(jù)特定的計數(shù)方式或視野下的孢子數(shù)判斷蜂群感染程度。鏡檢結(jié)果可靠，但靈敏性有一定限制。為了增加靈敏性，取樣時要抓取采集蜂進行檢測。因內(nèi)勤蜂可能雖然有感染，但孢子數(shù)量不多，不足以在顯微鏡下看到。

其他檢測方法：免疫反應(yīng)法和分子生物學(xué)法。這兩種方法相對復(fù)雜，但優(yōu)點是靈敏度高，且能夠區(qū)分兩種微孢子蟲的種類。

4 防治方法

煙曲霉素對防治孢子蟲病有效，是目前北美合法登記的防治蜜蜂微孢子蟲病的藥劑。但它是由煙曲霉菌產(chǎn)生的抗生素，歐盟法規(guī)禁止在防治蜂病上使用抗生素，日本對進口蜂產(chǎn)品中抗生素殘留也有嚴格限量。煙曲霉素在蜂群和蜂產(chǎn)品中的降解規(guī)律還不清楚，所以不適合在國內(nèi)推廣使用。

黃文誠老師2009年總結(jié)了一些防治蜜蜂微孢子蟲病的藥劑，包括金維他飼料、蜜蜂草藥、諾茲維特、普羅托非、百里酚等。這些藥劑都是在歐洲已有應(yīng)用的植物提取物，值得借鑒。還有人嘗試用用漂白粉防治孢子蟲病[5]，他們用10%次氯酸鈉100 ml混合入250 ml高果糖漿，再加100 ml蒸餾水，在每個蜂路中滴注5 ml，每周滴注2次，據(jù)報道效果不錯。

利用蜜蜂微孢子蟲在酸性環(huán)境下不利于孢子萌發(fā)的特點，大量飼喂添加了檸檬酸或米醋的酸飼料（1 kg糖水中加入檸檬酸1 g或米醋50 ml），是常用的一種防治方法。但也有人指出這一方法效果不理想。

對于該病，目前主要以預(yù)防和切斷傳染源為主，以下幾點供參考：

（1）增強蜜蜂抵抗力：加強飼養(yǎng)管理，提高蜂群抗病能力來降低發(fā)病率。其他減輕蜂群壓力的措施都有助于增加抵抗力。

（2）切斷飼料傳染：由感染群生產(chǎn)的蜂產(chǎn)品很有可能受到孢子污染，會成為新的感染源。飼喂蜂群時要對飼料進行消毒，尤其是購進的飼料用花粉，應(yīng)采用高溫蒸汽消毒（不少于10分鐘）。

（3）切斷蜂具傳染：對蜂箱、巢脾、蜂具等定期清洗消毒，特別是對有孢子蟲病史的蜂場或與染病蜂群接觸的蜂具等要加強消毒，明顯污漬的巢脾要及時淘汰。

（4）杜絕引種帶入病原：微孢子蟲會感染蜂王，如果種蜂場蜂群有患孢子蟲病，新培育的蜂王很有可能攜帶病原，引種后會通過垂直傳播導(dǎo)致蜂群感染。因此種蜂場要特別注意防治孢子蟲病。

（5）利用孢子蟲的弱項：東方蜜蜂微孢子蟲孢子抗寒能力差，孢子冷凍數(shù)天就大量失活，可以利用這一特性，在冬季把用過的蜂箱、巢脾等放在室外存放。另外研究表明紫外線照射5分鐘能殺滅約50%的孢子[4]，太陽光含有紫外線，可在對蜂具等清洗后，放在陽光下暴曬殺滅孢子。

[1]劉鋒,王強,代平禮,等.蜜蜂微孢子蟲在中國的自然種系構(gòu)成初探.昆蟲知識.2008,45(6):963-966.

[2]Antúnez K,Martín-Hernández R,Prieto L,et al.Immune suppression in the honey bee (Apis mellifera)following infection by Nosema ceranae(Microsporidia).Environmental Microbiology,2009, 11(9):2284-2290.

[3]Higes M,Martín-Hernández R,Garrido-Bailón E,et al.Detection of infective Nosema ceranae(Microsporidia)spores in corbicular pollen of forager honeybees.J Invertebr Pathol,2008,97,76-8.

[4]鄭火青,藺哲廣,黃少康,等.花粉對東方蜜蜂微孢子蟲感染的影響.第十屆海峽兩岸蜜蜂與蜂產(chǎn)品學(xué)術(shù)研討會.2013.

[5]Oliver R．The"Nosema Twins"Part V— Alternative Treatments and Preventions.American Bee Journal,2008,148(5):349-354.