李 軍 ，李常挺，許力干，陳澤祥，胡 帥 ，李常春，彭 昊 ，潘 艷 ，楊 威

（1.廣西獸醫(yī)研究所，廣西 南寧 530001；2.廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點實驗室，廣西 南寧 530001；3.廣西隆安縣動物疫病預(yù)防控制中心，廣西 隆 安 532700；4.廣西靖西縣動物疫病預(yù)防控制中心，廣西 靖西 533800）

豬布魯菌病是一種由布魯菌感染引起的人獸共患傳染病，帶菌豬是本病的傳染源，病菌主要侵害生殖系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)，可隨精液傳播給母豬，導(dǎo)致母豬懷孕流產(chǎn)，并可隨流產(chǎn)胎兒、胎衣、胎水、尿、陰道分泌物大量排出，污染產(chǎn)房、豬圈和其他物品，給人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來嚴重危害[1]。

廣西曾經(jīng)是我國豬布魯菌病主要疫區(qū)，1952年廣西從香港引進布魯菌陽性豬后，該病即在廣西流行和傳播。1981年廣西首次對布魯菌病疫情進行普查，1985年基本查清了疫區(qū)分布、人畜感染和發(fā)病情況、流行菌株的種型等流行病學(xué)特征，在此基礎(chǔ)上開展了20多年布魯菌病的防制工作，至2007年廣西家畜布魯菌病防治效果達到了國家農(nóng)業(yè)部頒布的穩(wěn)定控制標(biāo)準并通過驗收，所有家畜不再進行疫苗免疫[2-4]。

由于廣西部分布魯菌病老疫區(qū)存在著家畜的盲目引種和無序流動，防疫條件差，疫源可能未徹底清除等導(dǎo)致豬布魯菌病疫情反彈的風(fēng)險，我們于2009-2012年在廣西14個市開展種豬布魯菌病的流行監(jiān)測，以便及時掌握疫情動態(tài)，防止豬布魯菌病的重新發(fā)生和傳播，保護人畜健康。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢血清 根據(jù)歷年廣西豬布魯菌病流行情況，選定南寧、柳州、桂林、梧州等14個市曾經(jīng)發(fā)生過豬布魯菌病的縣（區(qū)），對曾經(jīng)檢出布魯菌病陽性豬的村（場）開展豬布魯菌病血清學(xué)監(jiān)測，每年在固定監(jiān)測點和非固定監(jiān)測點至少采集種豬血清200頭份和100頭份，4年共采集公豬血清4 548份和母豬血清17 579份。

1.1.2 待檢病料 在 固定監(jiān)測點采集胎衣1 612份，陰道分泌物458份，流產(chǎn)胎兒34份，布魯菌病抗體陽性豬的睪丸1份，肺2份，脾2份，腎2份進行布魯菌的分離。

1.1.3 主要試劑和儀器 布 魯菌虎紅凝集抗原和凝集試管抗原，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；胰蛋白示，購自英國Oxoid公司；馬血清，購自美國Thermo公司；細菌基因組DNA提取試劑盒，購自天根生化科技（北京）有限公司；2×PCR Taq MasterMix、DNA Marker 2，購自廣東東盛生物科技有限公司；PCR儀，購自日本TaKaRa公司；凝膠成像系統(tǒng)，購自美國Alpha Inotech公司；CO2培養(yǎng)箱，購自美國Thermo公司。

1.2 方法

1.2.1 待檢血清的檢測 按 照《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/T18646-2002》進行。應(yīng)用虎紅平板凝集試驗初篩待檢血清；再用試管凝集試驗對陽性和可疑的血清進行確認。

1.2.2 布魯菌的分離 在 無菌條件下，將采集的胎衣、陰道分泌物、流產(chǎn)胎兒、睪丸、肺、脾、腎接種在含5%馬血清的胰蛋白示瓊脂培養(yǎng)基，置5%CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)7 d。按陳澤祥等的方法對分離細菌進行布魯菌的PCR鑒定[6]。

2 結(jié)果

2.1 血清檢測結(jié)果 根據(jù)監(jiān)測方案要求，結(jié)合廣西豬布魯菌病歷史疫區(qū)的分布情況，2009-2012年對廣西14個市69個縣（區(qū)）的4 548份公豬血清和17 579份母豬血清進行布魯菌病抗體檢測。

在2009年監(jiān)測中，南寧市隆安縣某農(nóng)村養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的1頭公豬和1頭母豬的血清經(jīng)虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗證實為布魯菌病抗體陽性。公豬年齡為3歲，已經(jīng)配種使用2年，主要在本村使用；母豬為該養(yǎng)殖戶自養(yǎng)。對該養(yǎng)殖戶同村及周邊村飼養(yǎng)的公豬和母豬進行布魯菌病抗體檢測，但是未檢出陽性豬。

在2011年監(jiān)測中，南寧市賓陽縣某農(nóng)村養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的6頭母豬血清呈虎紅平板凝集試驗陽性，經(jīng)試管凝集試驗確診，2份可疑，4份陰性。3周后，對血清可疑的母豬重新進行采血檢測，試管凝集試驗仍然為可疑反應(yīng)。對其陰道分泌物進行布魯菌分離，未分離出布魯菌；使用PCR方法對陰道分泌物進行檢測也呈陰性。該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的其他豬也沒有出現(xiàn)布魯菌病臨床癥狀，根據(jù)《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2002）的判定標(biāo)準，綜合判定為陰性。

2010年和2012年監(jiān)測的血清樣品經(jīng)虎紅平板凝集試驗檢測均為陰性。

2.2 布魯菌的分離和鑒定 對2009-2012年采集的1 612份胎衣，458份陰道分泌物，34份流產(chǎn)胎兒，布魯菌病抗體陽性豬睪丸、肺、脾、腎無菌接種進行布魯菌的分離，對分離細菌進行PCR鑒定，但是未分離到布魯菌。

雖然未能從布魯菌病抗體陽性豬的病料中未分離出布魯菌，但是按照《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2002）的判定標(biāo)準，將這2頭豬判定為布魯菌病陽性，按《畜禽病害肉尸及其產(chǎn)品無害化處理規(guī)程GB 16548-1996》進行無害化處理。

3 討論

2009-2012年廣西種豬布魯菌病的監(jiān)測結(jié)果顯示，近四年廣西種豬布魯菌病試管凝集試驗陽性率均在2%以下，依然在穩(wěn)定控制標(biāo)準要求以內(nèi)，說明廣西在2007年取得的布魯菌病防治成果得到了鞏固，這主要得益于各級畜牧獸醫(yī)主管部門將布魯菌病防治納入工作重點，做到專人負責(zé)，強化防控，對老疫點常年實時監(jiān)測，監(jiān)測經(jīng)費也年年得到落實。

在監(jiān)測工作中，我們也發(fā)現(xiàn)存在一些問題，如大部分農(nóng)村養(yǎng)殖戶缺乏動物疫病防控知識和自我保護意識，在采樣時不愿意配合，誤以為保定和采血對豬的生長有影響，即使補貼也不愿給予采血。在動物流產(chǎn)時，無安全防護即徒手接觸流產(chǎn)胎兒、分泌物等；其次，前幾年國內(nèi)畜產(chǎn)品價格的上漲，導(dǎo)致異地引種引畜和境外家畜走私現(xiàn)象日益增多，引種業(yè)主的防疫報檢意識淡薄，加上行政許可制度約束力度差，導(dǎo)致家畜引進管理不到位，存在著嚴重的疫情隱患。2011年和2012年發(fā)生的羊種布魯菌病疫情就是通過無序引種而發(fā)生[6]。第三，布魯菌病的防控是一項專業(yè)性強、涉及面廣、工作量大的持久性工程，需要大量的人力、物力和財力作保障，但目前各級政府對布魯菌病防控經(jīng)費投入較少，一些縣區(qū)級甚至沒有投入。同時，一些村級防疫員在防控工作中存在應(yīng)付現(xiàn)象，沒有按時并如實匯報家畜養(yǎng)殖和疫病信息。

針對在監(jiān)測工作中存在的問題，今后繼續(xù)作好布魯菌病疫情的監(jiān)測和檢疫，增加經(jīng)費投入和加強對家畜引進的管理，嚴格引種審批程序，全程跟蹤，引進后隔離檢疫方能混養(yǎng)。根據(jù)當(dāng)前豬布魯菌病傳染源主要是農(nóng)村散養(yǎng)豬的情況，加強對農(nóng)村散養(yǎng)豬只的抗體檢測，發(fā)現(xiàn)陽性豬只堅決予以撲殺；同時在農(nóng)村推廣人工授精技術(shù)，切斷其傳播途徑。定期在布魯菌病老疫區(qū)舉辦布魯菌病防控知識講座，普及布魯菌病防控知識，提高基層獸醫(yī)人員和農(nóng)村養(yǎng)殖戶的防治水平。對村級防治員實行責(zé)任制，強化工作責(zé)任心，以便及時準確地掌握疫情動態(tài)。

[1]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：135-141.

[2]梁江明，曾竣，秦石英，等.廣西布魯氏菌病的歷史、現(xiàn)狀、問題及防治對策 [J].地方病通報，2006，21（1）：50-53.

[3]陳澤祥，吳禮潔，許力干，等.廣西家畜布魯氏菌病現(xiàn)狀及防治對策 [J].廣西畜牧獸醫(yī)，2005，21（3）:106-107.

[4]廣西科技信息網(wǎng).廣西家畜布魯氏菌病綜合防治研究及應(yīng)用2008.http://www.gxsti.net.cn/gxsat/kjcg/cgdj/170786.shtml.

[5]陳澤祥，許力干，禤雄標(biāo)，等.布魯氏菌病病原快速檢測方法的建立 [J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，40（7）:915-918.

[6]李常挺，李軍，覃俊江，等.廣西黑山羊羊種布魯氏菌的分離和鑒定 [J].中國動物檢疫，2012，29（8）:46-47.