張愛(ài)華，王小芳，陳桂蘭

(樂(lè)安縣人民醫(yī)院，江西樂(lè)安344300)

溶血對(duì)常見(jiàn)生化指標(biāo)的影響及其校正方法的探討

張愛(ài)華，王小芳，陳桂蘭

(樂(lè)安縣人民醫(yī)院，江西樂(lè)安344300)

溶血；干擾；回歸分析

在日常生化檢驗(yàn)工作中，一些物理或化學(xué)的因素都可能引起樣本的溶血，從而導(dǎo)致某些指標(biāo)出現(xiàn)分析誤差，且不同程度溶血對(duì)這些指標(biāo)的影響往往表現(xiàn)出不一致性。為了便于處理生化檢驗(yàn)中遇見(jiàn)的溶血樣本，我們隨機(jī)選取健康體檢樣本32份，并配制每份樣本Hb濃度分別為1g/L、2g/L、4g/L、6g/L溶血液，平行檢測(cè)每位受檢者的未溶血血清、溶血液中各項(xiàng)生化指標(biāo)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機(jī)選取2013年4月至2013年12月樂(lè)安縣人民醫(yī)院體檢科送檢的健康體檢靜脈血樣本32例，≥5ml/例，樣本無(wú)溶血、乳濁、黃疸。受檢者年齡:20歲至66歲，男性18例，女性14例。

1.2 儀器和試劑日立7180全自動(dòng)生化分析儀，山東3V公司生產(chǎn)生化試劑，AUDICOM-AC9900電解質(zhì)分析儀及配套試劑，Sysmex XS-1000i血細(xì)胞分析儀及配套試劑，朗道質(zhì)控血清(批號(hào)分別為798UN、589UE)。

1.3 方法

1.3.1 樣本處理將血液樣本置37℃水浴30min，3000r/min離心3min，盡量把上清液(即血清，血紅蛋白含量為0g/L)吸取到一干凈的試管中備用；用竹簽攪動(dòng)試管中的剩余血塊，并放到振蕩器上振蕩60s，3000r/min離心3min，用血細(xì)胞分析儀測(cè)定上層溶血液Hb含量，并用上層溶血液與血清配成Hb濃度為1g/L、2g/L、4g/L、6g/L的溶血樣本。

1.3.2 測(cè)試方法將未溶血血清、溶血樣本在全自動(dòng)生化分析儀和電解質(zhì)分析儀進(jìn)行檢測(cè)。TBil、 DBil采用釩酸氧化法，TBA采用循環(huán)酶速率法，AST、ALT、GGT、ADA采用速率法，Urea采用尿素酶-谷氨酸脫氫酶偶聯(lián)速率法，Cr采用苦味酸法，UA采用尿酸酶-過(guò)氧化物酶法，GLU采用葡萄糖氧化酶法，β2-MG采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法，K+、Na+、Cl-、Ca2+采用電極法。

1.3.3 對(duì)溶血干擾顯著指標(biāo)進(jìn)行回歸分析選擇溶血干擾顯著的指標(biāo)，以溶血樣本生化結(jié)果為x軸，以未溶血血清的生化結(jié)果為y軸，求得溶血干擾指標(biāo)不同溶血程度的回歸方程。

1.3.4 對(duì)回歸方程進(jìn)行驗(yàn)證隨機(jī)選取3個(gè)門診病人樣本，要求樣本無(wú)溶血、乳濁、黃疸。先測(cè)試未溶血血清GLU等8項(xiàng)生化指標(biāo)，將測(cè)定結(jié)果定義為理論值。人為溶血后再測(cè)試溶血液中GLU等8項(xiàng)生化指標(biāo)、溶血液血紅蛋白濃度，根據(jù)溶血液的血紅蛋白濃度選擇相應(yīng)的回歸方程，計(jì)算出校正值。校正值與理論值之差＜1/2 CLIA’88 Tea為可接受范圍。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法定量數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，不同程度溶血液之間生化指標(biāo)的比較采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)資料方差分析以及兩兩比較q檢驗(yàn)，回歸系數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程度溶血16項(xiàng)生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果不同溶血程度樣本AST、UA、K+、ADA、Cl-、TBil、DBil、GLU等8個(gè)指標(biāo)不全相等(P＜0.05)，溶血對(duì)AST、UA、K+、ADA、Cl-等5個(gè)指標(biāo)呈正干擾，對(duì)TBil、DBil、GLU等3個(gè)指標(biāo)呈負(fù)干擾。不同溶血程度樣本TBA、ALT、GGT、Urea、Cr、β2-MG、Na+、Ca2+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同程度溶血16項(xiàng)生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果(x±s)

表1 不同程度溶血16項(xiàng)生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果(x±s)(續(xù))

2.2 對(duì)溶血干擾指標(biāo)進(jìn)行回歸分析對(duì)溶血干擾顯著的8個(gè)指標(biāo)進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示DBil回歸系數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，其余7個(gè)指標(biāo)的回歸系數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。2.3對(duì)回歸方程進(jìn)行驗(yàn)證分析對(duì)上述8個(gè)指標(biāo)的回歸方程進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示DBil校正值與理論值之差＞1/2 CLIA’88 TEa，其余7個(gè)指標(biāo)校正值與理論值之差均＜1/2 CLIA’88 TEa。見(jiàn)表3。

表2 溶血干擾顯著指標(biāo)的回歸分析結(jié)果

表3 回歸方程驗(yàn)證分析結(jié)果

3 討論

溶血干擾檢驗(yàn)結(jié)果的機(jī)理有以下三種[1]：一是血細(xì)胞中高濃度組分逸出，使測(cè)定結(jié)果增高，或者某些物質(zhì)的血細(xì)胞內(nèi)濃度低于血清濃度時(shí)，則溶血相當(dāng)于血清被稀釋，因而使這些血清成分特別是發(fā)生重度溶血時(shí)檢測(cè)值降低。二是血細(xì)胞成分進(jìn)入血清后因化學(xué)反應(yīng)而引起其他物質(zhì)的濃度改變。三是血紅蛋白本身顏色對(duì)檢測(cè)的光學(xué)干擾。

我們?cè)?012年做過(guò)一次關(guān)于溶血對(duì)部分生化指標(biāo)結(jié)果的影響的研究，顯示溶血對(duì)AST等9個(gè)指標(biāo)有顯著影響[2]，但只研究了一個(gè)溶血水平的影響，也沒(méi)有探討校正方法，不利于臨床實(shí)際操作。本試驗(yàn)研究了1g/L、2g/L、4g/L、6g/L等程度的溶血對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，并對(duì)有顯著差異的指標(biāo)作線性回歸分析，用于計(jì)算其在未溶血時(shí)的校正值。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：溶血后AST、UA、K+、ADA、Cl-等指標(biāo)顯著升高，TBil、DBil、GLU等顯著降低，這與毛小君報(bào)道基本相符[3]；Urea、Cre、ALT、GGT、TBA、β2-MG、Na+、Ca2+等指標(biāo)溶血前后變化不顯著。用Excel軟件計(jì)算出AST、UA、K+、ADA、Cl-、TBil、GLU、DBil等8個(gè)指標(biāo)的回歸方程，經(jīng)過(guò)對(duì)回歸系數(shù)的假設(shè)檢驗(yàn)，前7項(xiàng)生化指標(biāo)的溶血因素與未溶血因素之間存在線性回歸關(guān)系(t檢驗(yàn)，P＜0.05)，并經(jīng)回歸方程的驗(yàn)證表明，它們的回歸方程可用于計(jì)算溶血樣本的校正值。DBil在1g/L、2g/L、4g/L、6g/L等程度的溶血時(shí)其回歸方程的回歸系數(shù)分別為-1.53、0.54、0.41、0.34，經(jīng)回歸系數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)(t檢驗(yàn)，P＞0.05)，說(shuō)明其溶血因素與未溶血因素之間不存在線性回歸關(guān)系，且回歸方程的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其校正值與理論值之差＞1/2 CLIA’88 Tea，表明DBil回歸方程不適用于計(jì)算溶血樣本的校正值。DBil和TBil都是采用釩酸氧化法，膽紅素被氧化成膽綠素，同時(shí)膽紅素特有黃色消失，通過(guò)比色測(cè)定氧化前后吸光度的差值計(jì)算出膽紅素的濃度[4]；然而溶血后血紅蛋白的顏色干擾了比色，血清中DBil含量較低，被釩酸氧化后呈現(xiàn)的綠色較淺，被血紅蛋白的顏色掩蓋了，使結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值；且對(duì)含量較低的DBil而言，血紅蛋白的顏色過(guò)濃，其溶血因素與未溶血因素之間不存在線性回歸關(guān)系的原因可能就在此。

在臨床實(shí)際工作中樣本溶血是在所難免，且溶血程度也各有不同，不同程度的溶血對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響也不盡相同。我們研究不同溶血程度對(duì)常見(jiàn)生化指標(biāo)的影響，并計(jì)算出其回歸方程，便于我們估算出溶血樣本常見(jiàn)生化指標(biāo)的真實(shí)濃度。龍躍兵等[5]也報(bào)道回歸方程對(duì)溶血標(biāo)本的部分檢驗(yàn)項(xiàng)目有一定的校正作用，具有一定的臨床價(jià)值。但是本研究也存在一些局限性,首先樣本量較小,難免發(fā)生機(jī)遇偏倚和誤差增加的情況;其次由于采用單中心研究,納入樣本均為本院體檢樣本,可能存在選擇性偏倚。據(jù)此做出的回歸方程對(duì)于判斷可能有一定的差異。仍需多中心、大樣本的隨機(jī)對(duì)照研究進(jìn)一步加以驗(yàn)證。

[1]陳秀,彭海林.溶血對(duì)常規(guī)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,27(6):693-694.

[2]張愛(ài)華,肖中華,王小芳.紅細(xì)胞溶解液部分生化指標(biāo)結(jié)果及其影響[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(4):396-397.

[3]毛小君.淺談臨床血清標(biāo)本溶血對(duì)自動(dòng)生化儀檢驗(yàn)結(jié)果的影響[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(1):93.

[4]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:456-457.

[5]龍躍兵,朱偉斌,章美燕.溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響及校正方法的探討[J].廣東醫(yī)學(xué),2011,32(12):1562.

R446.11+2

B

1674-1129(2014)04-0491-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.054

2014-04-08；

2014-05-22)

撫州市指導(dǎo)性科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：20130243)