蔡韋煒，陳 丹，范世明，連赟芳，鄭 利，曾令軍

(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州350122)

綜述

中藥三葉青化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展*

蔡韋煒，陳 丹，范世明，連赟芳，鄭 利，曾令軍

(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州350122)

中藥三葉青為我國特有的并具有重要藥用價值的植物，具有抗腫瘤、保肝、抗炎等多種藥理作用。在廣泛文獻(xiàn)檢索基礎(chǔ)上，本文對三葉青的化學(xué)成分、藥理作用及毒理研究進(jìn)行了概述，為其今后進(jìn)一步研究開發(fā)提供資料依據(jù)。

三葉青，化學(xué)成分，藥理作用，毒理研究

三葉青是我國特有的珍稀藥用植物，屬于葡萄科崖爬藤屬植物。三葉青即三葉崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，別名蛇附子、石抱子、三葉扁藤、金線吊葫蘆、金絲吊葫蘆、破石珠、三葉對等［1］。三葉青以塊根或全草入藥，在民間已有較長的藥用歷史。關(guān)于其藥用價值的最早記載見于《本草綱目》，稱“三葉崖爬藤，性味苦、辛、涼，清熱涼血、活血祛風(fēng)”［2］。據(jù)醫(yī)書記載，三葉青有清熱解毒、活血止痛、祛風(fēng)化痰等功效，常用于治療高熱驚厥、肺炎、肝炎、風(fēng)濕、瘰疬、癰疔瘡癤、月經(jīng)不調(diào)等［3］。三葉青產(chǎn)量稀少，主要分布在浙江、江西、福建、臺灣、湖北、廣東、廣西、四川、貴州、云南等地，主要生長在蔭蔽度較高的山谷、灌叢、林間等腐殖質(zhì)較高的地方，在陽光直射的地方偶有生長，但生長不良［4］，目前多以野生三葉青藥用。由于三葉青對生長環(huán)境的溫度、濕度要求非?？量?，并且在自然條件下生長緩慢，加上近年來人為無節(jié)制的采挖，野生的三葉青已經(jīng)瀕臨滅絕［2］。近年來，有關(guān)三葉青的化學(xué)成分及其藥理毒理學(xué)研究已有所進(jìn)展，但是不同課題組所研究三葉青產(chǎn)地不盡相同。本文對目前不同產(chǎn)地三葉青在化學(xué)成分及藥理方面的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。

1 化學(xué)成分研究

1.1 三葉青塊根中化學(xué)成分三葉青以塊根入藥，故對塊根化學(xué)成分的研究較多。楊大堅等［5］從重慶市北碚區(qū)縉云山采摘的三葉青根中分離鑒定得6’－O－苯甲酰基胡蘿卜苷、胡蘿卜苷和β－谷甾醇。李瑛琦［6］等從產(chǎn)于廣西的三葉青塊根乙酸乙酯萃取物中分離得到山柰酚、槲皮素和山柰酚－3－O－新橙皮糖苷?；絷浚?］從產(chǎn)于廣西的三葉青塊根乙醚提取物中分離得到21個化合物，并鑒定出18個組分，其中亞油酸、棕櫚酸、油酸、二苯胺、亞麻酸甲酯和硬脂酸等成分含量較高。

1.2 三葉青地上部分化學(xué)成分針對三葉青地上部分的研究也有所進(jìn)展，劉東等［3，8］從采自江西省九嶺山脈的三葉青地上部分中分離出蒲公英萜醇、蒲公英萜酮、β－谷甾醇、麥角甾醇、α－香樹脂醇、三十二酸、水楊酸、丁二酸、胡蘿卜苷、山柰酚－7－O－β－L－吡喃鼠李糖－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷、沒食子酸乙酯、甘露醇、環(huán)四谷氨肽，另外，該課題組從中還鑒定出3種黃酮苷類化合物，分別為芹菜素－6－α－L－吡喃鼠李糖－(1－4)－α－L－吡喃阿拉伯糖苷(崖爬藤苷)、芹菜素－8－α－L－吡喃鼠李糖－(1－4)－α－L－吡喃阿拉伯糖苷(異崖爬藤苷)和芹菜素－6，8－2－C－β－D－吡喃葡萄糖苷［9］。楊大堅［5］等從采自重慶市北碚區(qū)縉云山三葉青葉中鑒定其含有黃酮類、沒食子酸和花青素類化合物。

此外，付金娥等［10］采用電感耦合等離子體－發(fā)射光譜法(ICP－OES)分別測定產(chǎn)于浙江和廣西的三葉青藥材中微量元素，以Mg、Fe、Mn、Zn、Ba等含量較高，而Cd、Pb和As含量極低或未檢出［10］。

2 藥理作用研究

現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)三葉青具有抗腫瘤、保肝、抗病毒、抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛以及免疫調(diào)節(jié)等多方面的藥理作用。

2.1 抗腫瘤作用三葉青提取物已被多方證明能抑制多種癌癥細(xì)胞增殖，如對肝癌細(xì)胞H22［11，12］(藥材購自杭州市中醫(yī)院中藥房)、HepG－2［13］(藥材采自云南，由華東醫(yī)藥公司中藥分公司提供)、SMMC－7721［14］(藥材由寧夏明德飲片廠提供)、VX2瘤株［15］(藥材由華東醫(yī)藥公司中藥分公司提供)，Lewis肺癌細(xì)胞株［16，17］(藥材由華東醫(yī)藥公司中藥分公司提供)及肺癌細(xì)胞A549［18，19］(藥材采自云南，由華東醫(yī)藥公司中藥分公司提供)、白血病細(xì)胞HL60［20］(藥材產(chǎn)地未注明)、K562［21］(藥材產(chǎn)地未注明)、黑色素瘤細(xì)胞A375［22，23］(藥材產(chǎn)自云南，購自寧波鄞州醫(yī)藥藥材公司)、胃癌細(xì)胞SGC－7901［24］(藥材購自浙江省中醫(yī)院藥房)、結(jié)腸癌細(xì)胞系RKO細(xì)胞［25］(藥材產(chǎn)地未注明)等的抑制作用。其中乙酸乙酯提取物的抗腫瘤效果較為明顯。

三葉青提取物的抗腫瘤作用機(jī)制目前認(rèn)為有以下三種［26］:①通過細(xì)胞凋亡達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖。其凋亡途徑可能與線粒體受損有關(guān)，如三葉青提取物能促進(jìn)H22細(xì)胞凋亡相關(guān)基因細(xì)胞色素C(CytC)和Casp－3的mRNA表達(dá)量增加［11］;明顯上調(diào)K562細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞凋亡調(diào)劑因子P53基因mRNA表達(dá)相對量，同時也能明顯下調(diào)癌基因C－myc的mRNA表達(dá)相對量［21］;通過下調(diào)線粒體膜蛋白(Bcl－XL)、上調(diào)促凋亡因子(Bid)，最終可能導(dǎo)致導(dǎo)致線粒體釋放細(xì)胞色素C，級聯(lián)激活Caspase家族成員。②通過提高免疫能力達(dá)到抗腫瘤作用。三葉青能增強(qiáng)單核－巨噬細(xì)胞吞噬能力，增加防止腫瘤形成新生血管、抑制腫瘤細(xì)胞生長相關(guān)的TIMP－2基因表達(dá)量［11］。③通過抗氧化作用達(dá)到抗腫瘤作用。

2.2 抗病毒作用楊學(xué)樓等［27］發(fā)現(xiàn)從三葉青(藥材產(chǎn)地未注明)中提取的含氮堿A和含酮物F對流感PR 3及仙臺病毒有較強(qiáng)的抗病毒作用。此外，三葉青的脂溶性成分亦見報道在抗出血熱及抗病毒方面具有顯著效果［5］。

購于寧波醫(yī)藥股份有限公司三葉青藥材總提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位對乙肝病毒分泌的HbsAg、HbeAg均有抑制作用，并且其乙酸乙酯部位能顯著降低HBV的DNA復(fù)制水平，對乙肝病毒具有較強(qiáng)的活性［28］。

2.3 抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛作用資古明等［29］給小鼠腹腔注射不同劑量的三葉青塊根提取物(藥材未注明產(chǎn)地)后，在苯醌法及熱板法致痛模型上均有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用;小鼠的腹腔毛細(xì)血管通透性明顯減低;高劑量能明顯抑制二甲苯引起小鼠耳腫脹現(xiàn)象;連續(xù)低劑量注射可以有效抑制棉球肉芽腫。

黃真等［30］以購自浙江省中醫(yī)院藥房三葉青水提液給小鼠灌胃，能明顯抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性變化、耳腫脹和大鼠足跖腫脹;減少扭體模型小鼠的扭體次數(shù)，提高熱板模型的痛閾值;對干酵母和2，4－二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型有較強(qiáng)的解熱作用。

另有研究表明，三葉青(藥材未注明產(chǎn)地)口服給藥后，能抑制CIA小鼠的足爪腫脹，明顯延緩疾病起始時間，降低關(guān)節(jié)炎發(fā)生率和關(guān)節(jié)評分;病理切片顯示給藥后關(guān)節(jié)炎癥得到有效改善，滑膜增生減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少，維持了正常的關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu);且起效的同時又不影響小鼠的體質(zhì)量，對其免疫器官無毒性［31］。

呂江明等［32］通過實(shí)驗(yàn)證明，采自湖南吉首市郊三葉青水提物對小鼠在體和離體痛經(jīng)模型上都有良好的作用，高劑量組的效應(yīng)與常用鎮(zhèn)痛藥作用相當(dāng)，提示其痛經(jīng)抑制作用可能與鎮(zhèn)痛相關(guān)。

2.4 保肝作用

2.4.1 抗急性肝損傷伍昭龍等［33］對采自湖南吉首市郊三葉青研究中發(fā)現(xiàn)，其水煎液可以明顯抑制CCl4所致大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALP)等指標(biāo)升高，提高肝臟的解毒能力，從而減輕CCl4導(dǎo)致的肝損傷。鐘曉明等［34］也發(fā)現(xiàn)，購于浙江省中醫(yī)院中藥房三葉青的水提液能夠明顯降低CCl4致小鼠肝ALT和AST增高，減輕肝細(xì)胞炎癥浸潤、變性、壞死等病變，降低肝中丙二醛的生成量，增強(qiáng)超氧化物歧化酶(SOD)的活性，對CCl4所致急性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。購自浙江省中醫(yī)院藥房三葉青的總氨基酸和產(chǎn)地為廣西，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片生產(chǎn)的三葉青總多糖也都被證明能對由CCl4致急性肝損傷小鼠的肝臟有保護(hù)作用［35，36］。

三葉青抗CCl4致急性肝損傷機(jī)理可能與提高肝細(xì)胞抗氧化能力有關(guān)，通過對抗由CCl4引起的膜脂質(zhì)過氧化，從而提高肝損傷動物的抗氧化能力，保護(hù)肝細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)及其功能完整，以達(dá)到拮抗CCl4損害肝細(xì)胞膜的作用［35］。有效成分及機(jī)理探討還需更進(jìn)一步深入的研究。

2.4.2 抗慢性肝損傷張同遠(yuǎn)等［37］研究表明，服用三葉青(藥材產(chǎn)地未注明)可使慢性肝損傷大鼠血清中ALT、AST、HA(透明質(zhì)酸)、LN(粘連蛋白)及TBili(總膽紅素)水平下降，抑制血清TP(總蛋白)、ALB (白蛋白)水平及A/G(白蛋白/球蛋白比例)下降，提高大鼠存活率，提示三葉青具有良好的保肝降酶作用。同時發(fā)現(xiàn)，服用三葉青可以有效抑制HA、LN的異常增高，提示三葉青可能具有一定的抗肝纖維化的作用。

2.4.3 抗免疫性肝損傷三葉青提取物(藥材產(chǎn)地未注明)對由注射微量的卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷具有良好的防護(hù)作用，不同劑量的三葉青提取物均可使小鼠血清AST、ALT和LDH(乳酸脫氫酶)的水平降低，不同程度上減輕肝損傷［38］。

2.5 免疫調(diào)節(jié)作用口服三葉青脂溶性提取物(藥材產(chǎn)地未注明)，可以使小鼠體內(nèi)TNF－α(腫瘤壞死因子－α)和IFN－γ(干擾素－γ)含量增高，增強(qiáng)單核－巨噬細(xì)胞吞噬功能［39］。對購自浙江省中醫(yī)院藥房的三葉青水提物研究表明，其能拮抗?fàn)C傷致大鼠血清IgA含量降低、回腸黏液中S－IgA含量降低及腸黏膜中MDA含量升高，能拮抗?fàn)C傷致大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力下降、NK細(xì)胞活性降低及燙傷引起的血清IL－6 (白介素－6)水平增加作用，對燙傷引起的腸道局部和全身免疫紊亂有糾正作用［40］。

不同劑量的三葉青提取物對小鼠的胸腺、脾臟以及NK細(xì)胞活性皆無明顯的增強(qiáng)或抑制作用，但均能提高刀豆蛋白(ConA)誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力和綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠左后足跖部DTH(腫脹)的厚度差24 h測量值，提高小鼠細(xì)胞免疫功能。購自浙江醫(yī)藥公司三葉青的提取物以不同劑量給藥后均能提高小鼠吞噬碳末的吞噬指數(shù)，中、低劑量組可使小鼠溶血空斑數(shù)升高，而高劑量則能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬指數(shù)，表明三葉青提取物具有增強(qiáng)單核－巨噬細(xì)胞吞噬的功能［41，42］。

3 毒理學(xué)研究

江月仙等［43］按2003年版《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》中對“食品安全性毒理學(xué)評價試驗(yàn)”的要求進(jìn)行試驗(yàn)，大鼠、小鼠經(jīng)口急性毒性半數(shù)致死量(LD50)依急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)判定為實(shí)際無毒;Ames試驗(yàn)呈陰性，小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果皆為陰性，說明三葉青未顯示有致突變性。由杭州天惠醫(yī)藥科技有限公司提供的三葉青喂養(yǎng)大鼠30 d中，均未出現(xiàn)中毒癥狀，大體解剖和組織學(xué)觀察也未見異常病理變化，大鼠的體重、進(jìn)食量、食物利用率、血生化及血象皆無明顯影響，故長期服用三葉青是安全無毒的［44］。

4 總結(jié)與展望

近年來，有報道臨床應(yīng)用于抗癌、抗艾滋病毒、治療血液病及心腦血管疾病、肝炎、肺炎等感染性疾病以及小兒外感高熱［45］等。當(dāng)前對三葉青的研究主要是塊根部分，由于其藥源稀缺，未來市場需求必將逐步增大，人工種植栽培也將面臨品質(zhì)評價和質(zhì)量控制等問題，長期被忽略的三葉青地上部分是否有相同的藥理作用，也應(yīng)當(dāng)是未來研究的另一個重點(diǎn)。

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Research review on chemical components and pharmacological effects of tetrastigmatis hemsleyanum

Cai Weiwei，Chen Dan，F(xiàn)an Shiming，Lian Yunfang，Zheng Li，Zeng Lingjun
(Department of Pharmacy，F(xiàn)ujian University of TCM，F(xiàn)uzhou 350122)

Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg is one of Chinese characteristics plants which has important medical value.It has been proved that this medicine has some pharmacological effects like anti－tumor，protect liver，anti－inflammatory and so on.Based on extensive literature search，it provides a summarizing of Tetrastigma hemsleyanum on chemical components，pharmacological effects and toxicology research that can offer scientific references for further research.

Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg，chemical components，pharmacological effects，toxicology research

R285.5

A

1006-5687(2014)01-0038-04

2013-12-02

福建省科技計劃項(xiàng)目(No.2010Y2004)，福建省中青年教師教育科研項(xiàng)目(No.JA13154)