倪立堅(jiān)，嚴(yán)錦賢，鄭笈，劉獻(xiàn)祥

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建福州350003；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122）

透骨消痛膠囊由腫節(jié)風(fēng)、巴戟天、白芍、川芎4味中藥組成，用于治療骨性關(guān)節(jié)炎（OA）。白芍能滋陰養(yǎng)血，柔肝止痛，與川芎配合，兼顧活血、養(yǎng)血，起到疏肝、柔肝并舉的效果。芍藥苷是白芍中最重要的成分，本實(shí)驗(yàn)通過建立高效液相色譜法測(cè)定透骨消痛膠囊中芍藥苷含量的方法，達(dá)到控制其質(zhì)量的目的。

1 儀器與試劑

1.1 儀器1100型安捷倫高效液相色譜儀；超純水器（Mililpore）；超聲波發(fā)生器（奧特寶恩斯儀器有限公司）。

1.2 對(duì)照品及試劑芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物檢定所提供，批號(hào)：110736-200424）；乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：Novapak C18（250 mm×4.6 mm，4 μm）（大連依特利科學(xué)儀器有限公司裝填）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%甲酸（25∶75）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：室溫；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL（自動(dòng)進(jìn)樣）。理論塔板數(shù)：按芍藥苷計(jì)算不得低于2 000。在以上試驗(yàn)條件下試驗(yàn)，采用DAD檢測(cè)器檢測(cè)，結(jié)果表明樣品和對(duì)照品光譜圖完全一致，芍藥苷在波長(zhǎng)230 nm處有最大吸收，同時(shí)參考文獻(xiàn)資料將檢測(cè)波長(zhǎng)定為230 nm。見圖1。

圖1 芍藥苷光譜圖

2.2 提取方法的選擇

2.2.1 提取溶劑的考察取樣品0.8 g，分別精密加入甲醇、稀乙醇溶劑25 mL超聲處理30 min，取續(xù)濾液進(jìn)樣，測(cè)定2種成分的峰質(zhì)比。結(jié)果表明：用稀乙醇提取的2種成分含量較高。見表1。

表1 不同溶劑提取樣品中2種成分的峰質(zhì)比

2.2.2 提取方法的選擇取樣品0.8 g，精密加入稀乙醇溶劑25 mL分別超聲處理30、45、60 min，及加熱回流30、45、60 min，取續(xù)濾液進(jìn)樣，測(cè)定2種成分的峰質(zhì)比。結(jié)果表明：采取回流提取的方法比超聲提取2種成分效果好，回流30 min能將樣品中的2種成分提取完全。見表2。

綜合以上結(jié)果，將提取方法定為用稀乙醇回流30 min。

2.3 溶液制備

2.3.1 對(duì)照品溶液制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液制備按2.2.2項(xiàng)下回流法制得供試品溶液。

2.3.3 陰性樣品溶液制備取除白芍外處方中藥，制作空白樣品，并按供試品溶液的制備制得陰性樣品溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn)分別吸取芍藥苷對(duì)照品溶液、透骨消痛膠囊供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。陰性樣品溶液在與對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間處，無色譜峰出現(xiàn)，見圖2～圖4，表明方中其它各味藥材不干擾芍藥苷的測(cè)定。

表2 不同提取方法和提取時(shí)間測(cè)定樣品中芍藥苷峰質(zhì)比

圖2 芍藥苷對(duì)照品

圖3 供試品色譜圖

圖4 白芍陰性樣品色譜圖

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察配制不同濃度的芍藥苷對(duì)照品溶液，分別精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y＝15.945x－60.947，r＝0.9999。結(jié)果表明：芍藥苷在5.3952～337.2 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液室溫下放置，分別于0、3、7、10 h進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定芍藥苷峰面積，RSD為1.18%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取樣品6份，照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行6次平行測(cè)定，測(cè)得芍藥苷平均含量為4.87 mg/g，RSD為1.27%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.4 回收率試驗(yàn)取已知含量的同一批號(hào)供試品9份，分成3組，采用加樣回收試驗(yàn)，每組分別精密加入3個(gè)不同濃度的芍藥苷對(duì)照品，照供試品溶液制備方法制備9份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果芍藥苷平均回收率為104.3%，RSD為1.68%。表明該方法具有較好的加樣回收率。

3 討論

透骨消痛膠囊是根據(jù)劉獻(xiàn)祥教授用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的臨床經(jīng)驗(yàn)方研制而成的中藥制劑［1-2］。具有補(bǔ)腎柔肝、活血祛風(fēng)的功效，用于肝腎虧虛型OA，療效確切［3］。癥見關(guān)節(jié)隱隱作痛或腫脹，屈伸不利，行走不便，腰部酸軟，舌淡紅苔薄白，脈沉或細(xì)。方由巴戟天、杭白芍、川芎等組成。

透骨消痛膠囊是以“腎主骨”、“肝主筋”等中醫(yī)理論為指導(dǎo)，針對(duì)OA病機(jī)及治療認(rèn)識(shí)基礎(chǔ)上組方。以補(bǔ)腎作為治療OA的根本法則并佐以四要：①補(bǔ)腎要養(yǎng)肝，肝腎同源，肝腎同健痹自殲（白芍養(yǎng)血柔肝以助固本）；②補(bǔ)腎要活血；③補(bǔ)腎要止痛，痛解痹自停（白芍能柔肝止痛）；④補(bǔ)腎要祛邪。此外，川芎和白芍兩者合用，活血、養(yǎng)血兼顧，疏肝、柔肝并舉，使其活血而不傷正，疏肝開郁而不損肝陰。

芍藥苷為白芍中最重要的成分，本文通過建立高效液相色譜法測(cè)定透骨消痛膠囊中芍藥苷的含量來衡量白芍藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，并進(jìn)行科學(xué)方法考察，結(jié)果較為滿意，可以作為透骨消痛膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

［1］ 林木南，劉獻(xiàn)祥.透骨消痛方治療膝骨性關(guān)節(jié)炎30例［J］.福建中醫(yī)藥，2005，36（4）：15-16.

［2］ 吳追樂，許惠鳳，李西海，等.透骨消痛膠囊含藥血清對(duì)軟骨細(xì)胞活性的影響［J］.福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，22（4）：24-27.

［3］ 唐勇，姜杰，孟輝，等.補(bǔ)腎益氣行血方治療膝骨性關(guān)節(jié)炎44例［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16（9）：902-903.