高 柱 王小玲 余發(fā)新

(江西省重金屬污染生態(tài)修復(fù)工程技術(shù)研究中心(江西省科學(xué)院生物資源研究所)，南昌，330096)

鄭 元 馬煥成 高松金

(國家林業(yè)局西南地區(qū)生物多樣性保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(西南林業(yè)大學(xué))) (江西廣播電視大學(xué))

干熱河谷氣候特點(diǎn)是熱量充足，干濕分明，蒸散量大于降水量，全年氣溫較高，太陽輻射較強(qiáng)，植被覆蓋率低，水土流失嚴(yán)重，是我國西南地區(qū)典型的生態(tài)系統(tǒng)類型，為生態(tài)恢復(fù)重點(diǎn)建設(shè)區(qū)和植被恢復(fù)困難區(qū)［1］。牛角瓜屬蘿藦科(Asclepiadaceae)常綠植物，是干熱河谷植被群落的常見種，對(duì)當(dāng)?shù)貧夂蚓哂泻軓?qiáng)適應(yīng)性。牛角瓜在干熱河谷等脆弱生態(tài)環(huán)境下起到防止水土流失或防風(fēng)固沙作用。其種毛可用于紡紗，乳汁是治癌、風(fēng)濕等藥材原料，是該地區(qū)不可多得的生態(tài)型經(jīng)濟(jì)植物［2－3］。

光合作用是碳循環(huán)和生態(tài)水文循環(huán)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，光合作用效率是植物生產(chǎn)力和作物產(chǎn)量高低的決定因素［4］。植物光合生理對(duì)某一環(huán)境的適應(yīng)性，很大程度上反映了植物在該地區(qū)的生存能力和競(jìng)爭(zhēng)能力［5］。氣候條件直接導(dǎo)致外界環(huán)境變化，影響著植物自身的光合特性［6］。牛角瓜在河谷內(nèi)生長(zhǎng)良好，能夠穩(wěn)定維持種群數(shù)量及群落結(jié)構(gòu)，與其物種本身的光合生理特性存在必然聯(lián)系。

國內(nèi)外對(duì)牛角瓜的研究集中在繁殖技術(shù)［3，7］、化學(xué)成分與藥理活性［8－13］、能源熱值［14－16］、纖維成分與性能［17－18］等方面，有關(guān)牛角瓜光合生理方面的研究尚未見報(bào)道。因此，牛角瓜對(duì)高溫及干旱光合生理特性、光合適應(yīng)機(jī)制、對(duì)光強(qiáng)的敏感性等問題有待解決。通過對(duì)牛角瓜干季和雨季光合生理特性的比較研究，明確牛角瓜野外種群應(yīng)對(duì)干熱河谷的光合生理適應(yīng)對(duì)策，對(duì)干熱河谷地區(qū)植被光合生理研究及光能效率應(yīng)用具有重要意義。

1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)地位于云南省紅河州個(gè)舊市保和鄉(xiāng)冷墩村。地處102°56'48.09″ ～102°57'14.01″E，23°11'19.48″～23°11'59.26″N，海拔319 ～425 m，屬典型干熱河谷氣候。年均氣溫25.12 ℃，極端最高氣溫47.5 ℃，無霜期363 d，日照時(shí)間1 770.2 h，年均降水量低于700 mm，蒸發(fā)量大于降水量，且雨季和干季分明，6—9月份為雨季，降水量占全年降水量85%以上，2—5月份幾乎無雨，嚴(yán)重干旱。土壤為燥紅土，深度0 ～20 cm 土壤的pH 值為7.03，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)14.58 g·kg－1，堿解N 質(zhì)量分?jǐn)?shù)12.4 mg·kg－1，速效K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)51.4 mg·kg－1，速效P質(zhì)量分?jǐn)?shù)少或無。

2 材料與方法

供試材料為紅河河谷內(nèi)2年生牛角瓜上收集的當(dāng)年生種子，栽培密度為1 m×1 m，常規(guī)水肥管理。

光合氣體交換日變化測(cè)量:于2011年8月中旬晴天07:00—19:00，采用Li－6400 便攜式光合測(cè)定儀測(cè)定光合氣體交換日變化進(jìn)程。選取供試植株第3 或第4 節(jié)上完全展開的成熟健康葉片，擦除葉片背面絨毛，每個(gè)葉片重復(fù)讀取3 個(gè)數(shù)據(jù)，隨機(jī)選取3株為3 個(gè)重復(fù)，每隔2 h 測(cè)定1 次，結(jié)果取平均值。

記錄凈光合速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)、蒸騰速率(Tr)、胞間CO2摩爾分?jǐn)?shù)(Ci)、水分氣壓虧缺(VP，D)，計(jì)算水分利用效率(WU，E)=Pn/Tr，光能利用率(LU，E)=(Pn/PA，R)×100%，氣孔限制值(Ls)=1－Ci/Ca。

光合響應(yīng)曲線測(cè)量:隨機(jī)選擇1 株牛角瓜，于09:00—11:00 測(cè)定葉片凈光合速率(Pn)對(duì)光合有效輻射(PA，R)的響應(yīng)，旱季在2月中旬進(jìn)行。人工光源為L(zhǎng)i－6400－02B 紅藍(lán)光源，設(shè)置光合有效輻射梯度為2 000、1 800、1 500、1 400、1 200、1 000、800、600、400、200、150、100、50、20、0 μmol·m－2·s－1，啟動(dòng)光響應(yīng)自動(dòng)測(cè)定程序。

光合響應(yīng)曲線參數(shù)估計(jì):采用非直角雙曲線方程，擬合牛角瓜葉片的光合響應(yīng)曲線方程:

式中:Pn為凈光合速率;α 為表觀量子效率;Pmax為最大凈光合速率;Rd為暗呼吸速率;θ 為光響應(yīng)曲線曲角。利用公式對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得出系列特征參數(shù)［19］。在低光強(qiáng)下，對(duì)凈光合速率和光強(qiáng)進(jìn)行直線回歸，與非直角雙曲線模擬計(jì)算出的Pmax值與X 軸相交，X 軸交點(diǎn)數(shù)值即為光合補(bǔ)償點(diǎn)(LC，P)，與Pmax的交點(diǎn)在X 軸上的數(shù)值則為光飽和點(diǎn)(LS，P)。

統(tǒng)計(jì)分析:所有數(shù)據(jù)處理在Microsoft Excel 2007 和SPSS 16.0 軟件下完成，并對(duì)相關(guān)系數(shù)進(jìn)行曲線擬合，圖在Sigmaplot 10.0 軟件下完成。

3 結(jié)果與分析

3.1 牛角瓜光合響應(yīng)曲線旱季與雨季的差異

由圖1可以看出，采用非直角雙曲線模型對(duì)2年生牛角瓜葉片的凈光合速率和光強(qiáng)之間進(jìn)行光響應(yīng)曲線擬合，擬合效果較好。旱季和雨季牛角瓜的Pn對(duì)PA，R的響應(yīng)趨勢(shì)一致，表觀量子效率相同說明利用弱光是同一種植物固有的本性;雨季最大光合速率、呼吸速率、光飽和點(diǎn)、光補(bǔ)償點(diǎn)均高于旱季(表1)，說明雨季牛角瓜光合生理作用強(qiáng)于旱季，在相同的光強(qiáng)下，水分對(duì)牛角瓜光合生理影響較大。在試驗(yàn)光強(qiáng)下，牛角瓜幾乎無光飽和點(diǎn)。

圖1 旱季與雨季牛角瓜光合響應(yīng)曲線

表1 旱季與雨季牛角瓜光合響應(yīng)曲線參數(shù)

3.2 旱季與雨季牛角瓜對(duì)水分和光能利用效率

從圖2可知，隨著光照強(qiáng)度的增加，牛角瓜葉片光合利用率旱季和雨季均呈“升高—下降”趨勢(shì)，旱季峰值低于且出現(xiàn)早于雨季，分別出現(xiàn)在光強(qiáng)為100、150 μmol·m－2·s－1時(shí)，最大光能利用率分別為3.18%和3.81%;在光照強(qiáng)度高于600 μmol·m－2·s－1后，光能利用率下降趨勢(shì)減緩并趨于穩(wěn)定。水分利用率隨光照強(qiáng)度增強(qiáng)，呈先升后略有下降，并逐漸趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)，旱季在光強(qiáng)為0 ～150 μmol·m－2·s－1、雨季在光強(qiáng)為0 ～400 μmol·m－2·s－1時(shí)，WU，E值增加最快，之后值開始下降，此過程與光強(qiáng)促進(jìn)氣孔張開、蒸騰速率增加，但光合碳同化能力速率卻沒有成比例增加，引起WU，E的下降有關(guān);旱季水分利用率高于雨季，但光合碳同化能力則相反。

圖2 不同光強(qiáng)下光能利用率和水分利用率

3.3 牛角瓜光合日變化

3.3.1 環(huán)境因子日變化

環(huán)境因子互相聯(lián)系、互相制約并綜合影響植物光合作用。牛角瓜雨季環(huán)境日變化中(表2)，光合有效輻射和大氣溫度呈單峰曲線變化，PA，R變化范圍為28.06 ～1 123.55 μmol·m－2·s－1，最低值出現(xiàn)在19:00，峰值出現(xiàn)在11:00，高光強(qiáng)輻射段為11:00—13:00;Ta變 化 范 圍 為31.43 ～44.26℃，07:00 最低，峰值出現(xiàn)在15:00，峰值較PA，R滯后4 h。RH、Ca日變化與PA，R、Ta相反，RH最高值出現(xiàn)在07:00，RH最低值為6.26%，出現(xiàn)在15:00;Ca最低值為314.07 μmol·mol－1，出現(xiàn)在13:00，RH和Ca值在11:00—13:00 有個(gè)緩慢減低的過程。

表2 牛角瓜雨季生長(zhǎng)環(huán)境日變化

3.3.2 生態(tài)因子與凈光合速率相關(guān)性

牛角瓜生長(zhǎng)環(huán)境因子與凈光合速率相關(guān)性顯示(圖3)，光照強(qiáng)度、空氣相對(duì)濕度、大氣溫度、空氣CO2摩爾分?jǐn)?shù)與凈光合速率均存在一定的關(guān)系，其中Ta、PA，R與Pn呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.397、0.949;RH、Ca與Pn呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為－0.197、－0.428，僅PA，R與Pn相關(guān)性極顯著，說明雨季時(shí)光照強(qiáng)度對(duì)牛角瓜Pn影響最大。以凈光合速率為因變量建立的多元線性回歸方程為Pn=100.804－0.722RH－1.618Ta+0.017PA，R－0.094Ca，F(xiàn) =58.324，P=0.017 ＜0.05，方程可靠(R2=0.992)，環(huán)境因子對(duì)牛角瓜光合的影響具有交互性。

3.3.3 光合特征日變化

凈光合速率的高低直接決定植物總生長(zhǎng)力，并在一定程度上影響植物凈生產(chǎn)力狀況，各種生理、生態(tài)因子不斷變化，形成光合作用的復(fù)雜變化規(guī)律。蒸騰速率大小在一定程度上反映了植物調(diào)節(jié)水分損失能力及環(huán)境適應(yīng)能力;胞間CO2摩爾分?jǐn)?shù)是葉片內(nèi)部光合作用和呼吸作用形成的驅(qū)動(dòng)力和阻力對(duì)CO2氣體進(jìn)入葉肉細(xì)胞最終平衡的結(jié)果，受氣孔導(dǎo)度、葉肉細(xì)胞及RuBP 羧化酶在羧化位點(diǎn)處同化CO2的速率等因素影響。

從表3可以看出，牛角瓜葉片凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率值隨日進(jìn)程均呈先升高后降低的趨勢(shì)。Pn、Gs最大值出現(xiàn)在11:00，Tr最大值出現(xiàn)在13:00。Pn變化于1.21 ～13.67 μmol·m－2·s－1，Gs變化于0.010 ～0.134 mol·m－2·s－1，Tr變化于0.55 ～8.26 mmol·m－2·s－1，說明牛角瓜不存在光合午休現(xiàn)象。胞間CO2摩爾分?jǐn)?shù)隨日進(jìn)程呈先降后升的趨勢(shì)，早、晚值較高，分別為241.72、535.39 μmol·mol－1，在光照不足時(shí)，牛角瓜葉片主要以呼吸作用為主。

氣孔限制值反映了植物葉片對(duì)大氣CO2相對(duì)利用率的大小，牛角瓜葉片Ls值隨日進(jìn)程呈現(xiàn)出3個(gè)升高值(表3)，升高值分別出現(xiàn)在09:00、13:00、17:00，09:00 時(shí)CO2利用率最高，達(dá)0.78，早晚利用率較低。VP，D隨日進(jìn)程呈升高后降低趨勢(shì)(表3)，自清晨開始，VP，D一直升高，直至15:00 時(shí)達(dá)到最高，為6.74 kPa，之后開始下降，直至最低。

圖3 環(huán)境因子與凈光合速率相關(guān)性

表3 雨季牛角瓜光合特征日變化

4 結(jié)論與討論

植物的光飽和點(diǎn)越高，最大凈光合速率越快，光補(bǔ)償點(diǎn)越低，水分利用率越高，表明該植物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力越強(qiáng)［20］，生產(chǎn)潛力高，光飽和點(diǎn)和光補(bǔ)償點(diǎn)反映了植物對(duì)光照條件的要求，是判斷植物耐陰性的重要指標(biāo)。牛角瓜光響應(yīng)曲線模擬結(jié)果認(rèn)為，雨季光合能力明顯高于旱季，環(huán)境因子嚴(yán)重影響著植物的光合能力，從光飽和點(diǎn)上仍可以認(rèn)為牛角瓜為典型的陽性植物(光飽和點(diǎn)高于800 μmol·m－2·s－1)［21］。在土壤水分含量高的情況下，牛角瓜光能利用率較高，而土壤水分含量低的情況下水分利用率更高。逆境下植物通過調(diào)節(jié)氣孔大小而不是通過調(diào)控氣孔密度適應(yīng)氣候環(huán)境，因此，低密度植物較高密度植物適用性更好［22］。牛角瓜在適應(yīng)環(huán)境時(shí)，體現(xiàn)在蒸騰速率、氣孔導(dǎo)度日進(jìn)程呈先升后降的趨勢(shì)上。干旱時(shí)相對(duì)含水量(RW，C)降低，對(duì)光能吸收轉(zhuǎn)換、水光解、電子傳遞、葉綠素中還原型輔酶Ⅱ(NADPH)和ATP含量、1，5－二磷酸核酮糖(RuBP)含量和核酮糖－1，5－二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性存在影響［23－25］;高溫影響類囊體膜、電子傳遞和Rubisco 活性［26－27］，光合與水分生理特性的異同對(duì)樹種生態(tài)適應(yīng)性意義巨大［28］。

植物葉片捕獲的激發(fā)能高于植物自身的碳同化能力時(shí)，常造成過多的光能被消耗，最終引起光合速率的下降［29］。植物遺傳特性在一定程度上決定了該樹種的光合能力，適宜的環(huán)境生態(tài)條件是光合潛能發(fā)揮的必要條件［30］。本試驗(yàn)研究認(rèn)為，牛角瓜Pn呈先升高后降低趨勢(shì)，不存在午休現(xiàn)象。大氣溫度與凈光合速率的相關(guān)性是一種假象［31－33］，氣溫不是直接限制凈光合速率的因素之一。本研究也同樣發(fā)現(xiàn)氣溫和凈光合速率相關(guān)性不顯著，凈光合速率與光合有效輻射相關(guān)性極顯著，說明牛角瓜對(duì)光的耐性較強(qiáng)，與光響應(yīng)曲線擬合結(jié)論一致。單一的環(huán)境因子對(duì)植物光合能力的影響效果不同，體現(xiàn)在物種不同、生育期不同、其他環(huán)境因子不同，其效果均不同。環(huán)境因子模擬方程可靠性高，說明光合能力是由環(huán)境因子綜合影響的。

植物通過蒸騰作用調(diào)節(jié)水分損失能力以適應(yīng)干旱條件環(huán)境。牛角瓜在11:00 氣孔導(dǎo)度最大，此時(shí)，氣孔阻力最小，體現(xiàn)在PA，R、Ta迅速升高，同時(shí)Tr也較強(qiáng)。之后PA，R開始下降，Ta仍在升高直到15:00開始下降，牛角瓜葉片Gs、Tr下降，以減少水分散失，說明干熱河谷地區(qū)即使是陽性植物牛角瓜，對(duì)高溫、高光照只是反映出對(duì)不良環(huán)境的耐性，而不能充分的利用熱能和光能。植物在高光強(qiáng)下，葉片光合作用最大化時(shí)，葉具有較高的N 含量和較佳的供水，在低光強(qiáng)下則相反;當(dāng)供水和K 最優(yōu)分布時(shí)，植物冠層N 最適分布與光強(qiáng)成正比［34］，因此，對(duì)于干熱河谷牛角瓜人工種植時(shí)，早期葉片覆蓋度及高能吸收品種的選育對(duì)光能利用率具有重要意義，同時(shí)光合能力與水肥管理存在一定關(guān)系。

［1］ 鄭艷玲，馬煥成，Scheller R，等.環(huán)境因子對(duì)木棉種子萌發(fā)的影響［J］.生態(tài)學(xué)報(bào)，2013，33(2):382－388.

［2］ 高柱，王小玲.牛角瓜開發(fā)價(jià)值及栽培技術(shù)研究［J］.北方園藝，2011(18):202－206.

［3］ 高柱，王小玲，馬煥成，等.干熱河谷牛角瓜育苗技術(shù)及幼苗生長(zhǎng)節(jié)律［J］.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，27(4):503－507，555.

［4］ Tuittila E S，Vasander H，Laine J.Sensitivity of c sequestration in reintroduced sphagnum to water-level variation in a cutaway peatland［J］.Restoration Ecology，2004，12(4):483－493.

［5］ 云建英，楊甲定，趙哈林.干旱和高溫對(duì)植物光合作用的影響機(jī)制研究進(jìn)展［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2006，26(3):641－648.

［6］ 鄭元，趙忠，周慧，等.晴天和陰天對(duì)刺槐光合生理特性的影響［J］.林業(yè)科學(xué)，2011，47(5):60－66.

［7］ 李克烈，羅聯(lián)忠，陳偉，等.牛角瓜的組織培養(yǎng)［J］.廣東農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2007，26(3):247－249.

［8］ Lhinhatrakool T，Sutthivaiyakit S.19-Nor-and 18，20-Epoxy-cardenolides from the leaves of Calotropis gigantea［J］.Journal of Nature Products，2006，69(8):1249－1251.

［9］ 戴好富，王茂媛，梅文莉，等.牛角瓜屬植物化學(xué)成分與藥理活性研究進(jìn)展［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2009，28(1):1－7.

［10］ Kumar V L，Shivkar Y M.In vivo and in vitro effect of latex of Calotropis procera on gastrointestinal smooth muscles［J］.Journal of Ethnopharmacology，2004，93(2/3):377－379.

［11］ Pathak A K，Argal A.Analgesic activity of Calotropis gigantean flower［J］.Fitoterapia，2007，78(1):40－42.

［12］ Kumar S，Dewan S，Sangraula H，et al.Anti-diarrhoeal activity of the latex of Calotropis procera［J］.Journal of Ethnopharmacology，2001，76(1):115－118.

［13］ Umsalama A M，Nabil H H，施祖華.牛角瓜(Calotropis procera Ait.)提取物對(duì)非洲瓢蟲(Henosepilachna elaterii Rossi)的殺蟲潛能［J］.浙江大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2006，32(3):292－299.

［14］ Behera B K，Arora M，Sharma D K.Studies on biotransformation of Calotropis procera latex，a renewable source of petroleum，value-added chemicals，and products［J］.Energy Sources，2000，22(9):781－807.

［15］ Sharma D K，Tiwari M，Arora M，et al.Microbial transformation and biodegradation of Calotropis procera latex towards obtaining value added chemicals，pharmaceuticals and fuels［J］.Petroleum Science Technology，1997，15(1/2):137－169.

［16］ 李瑞，曾建立，王曉東，等.耐鹽堿植物牛角瓜產(chǎn)能成分分析［J］.過程工程學(xué)報(bào)，2007，7(6):1217－1220.

［17］ 高靜，趙濤，陳建波.牛角瓜、木棉和棉纖維的成分、結(jié)構(gòu)和性能分析［J］.東華大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2012，38(2):151－155.

［18］ 費(fèi)魏鶴，胡惠民，李璇，等.牛角瓜纖維的結(jié)構(gòu)與性能研究［J］.中國纖檢，2011(7):80－83.

［19］ Richardson A D，Berlyn G.Spectral reflectance and photosynthetic properties of Betula papyrifera (Betulaceae)leaves along an elevational gradient on Mt.Mansfied，Vermout，USA［J］.American Journal of Botany，2002，89(1):88－94.

［20］ 冷平生，楊曉紅，胡悅，等.5 種園林樹木的光合和蒸騰特性的研究［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，15(4):13－18.

［21］ Larcher W.植物生理生態(tài)學(xué)［M］.李博等，譯.北京:科學(xué)出版社，1980:45－49.

［22］ Doheny-Adams T，Hunt L，F(xiàn)ranks P J，et al.Genetic manipulation of stomatal density influences stomatal size，plant growth and tolerance to restricted water supply across a growth carbon dioxide gradient［J］.Philosophical Transactions of the Royal Society B:Biological Sciences，2012，367:547－555.

［23］ Lawlor D W，Cornic G.Photosynthetic carbon assimilation and associated metabolism in relation to water deficits in higher plants［J］.Plant Cell ＆ Environrment，2002，25(2):275－294.

［24］ Cornic G.Drought stress inhibits photosynthesis by decreasing stomatal aperture-not by affecting ATP synthesis［J］.Trends in Plant Sciences，2000，5(5):187－188.

［25］ Parry M A J，Andralojc P J，Khan S，et al.Rubisco activity:effects of drought stress［J］.Annals of Botany Collections，2002，89(7):833－839.

［26］ Murakami Y，Tsuyama M，Kobayashi Y，et al.Trienoic fatty acids and plant tolerance of high temperature［J］.Science，2000，287:476－479.

［27］ Spreitzer R J，Salvucci M E.Rubisco:structure，regulatory interactions，and possibilities for a better enzyme［J］.Annual Review of Plant Biology，2002，53:449－475.

［28］ 段愛國，張建國，何彩云，等.金沙江干熱河谷重要造林樹種干季光合與蒸騰作用區(qū)域效應(yīng)分析［J］.干旱區(qū)資源與環(huán)境，2013，27(7):149－154.

［29］ Müller P，Li X P，Niyogi K K.Non-photochemical quenching.A response to excess light energy［J］.Plant Physiology，2001，125(4):1558－1566.

［30］ 黃振英，董學(xué)軍，蔣高明，等.沙棘光合作用和蒸騰作用日動(dòng)態(tài)變化的初步研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2002，22(4):817－823.

［31］ 張文標(biāo)，金則新，柯世省，等.木荷光合特性日變化及其與環(huán)境因子相關(guān)性分析［J］.廣西植物，2006，26(6):492－498.

［32］ 柯世省，陳模舜.紫荊光合日變化及其與環(huán)境因子的關(guān)系［J］.天津師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2004，24(3):30－33.

［33］ 宗建偉，楊雨華，楊風(fēng)嶺，等.4 個(gè)核桃品種光合特性的日變化［J］.草業(yè)科學(xué)，2013，30(3):397－401.

［34］ Peltoniemi M S，Duursma R A，Medlyn B E.Co-optimal distribution of leaf nitrogen and hydraulic conductance in plant canopies［J］.Tree physiology，2012，32(5):510－519.