李 玲，王繼鵬，柳 新

（1.煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)所，山東煙臺(tái)264000；2.煙臺(tái)渤海制藥集團(tuán)有限公司，山東煙臺(tái)264003）

補(bǔ)氣活血膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李 玲1，王繼鵬2，柳 新2

（1.煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)所，山東煙臺(tái)264000；2.煙臺(tái)渤海制藥集團(tuán)有限公司，山東煙臺(tái)264003）

目的建立補(bǔ)氣活血膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對(duì)方中黃芪、赤芍和紅花進(jìn)行了定性鑒別，并用高效液相色譜法對(duì)制劑中芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)果薄層色譜鑒別斑點(diǎn)清晰，高效液相色譜法定量準(zhǔn)確，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論本法簡(jiǎn)便可行、重復(fù)性好，可有效控制該制劑的質(zhì)量。

補(bǔ)氣活血膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別；高效液相色譜法

補(bǔ)氣活血膠囊是由黃芪、當(dāng)歸、赤芍、桃仁、紅花等十一味中藥組成，具有補(bǔ)氣，活血，通絡(luò)之功效。用于治療中風(fēng)恢復(fù)期屬氣虛血瘀證，本文對(duì)方中黃芪、赤芍、紅花進(jìn)行了薄層鑒別。并用高效液相色譜法對(duì)制劑中赤芍所含成分芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

DYQ－II薄層點(diǎn)樣器；KQ3200DE型超聲波處理器；Agilent 1100高效液相色譜儀；優(yōu)普超純水處理器。甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736－201136）；黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110781－200512）；補(bǔ)氣活血膠囊由煙臺(tái)渤海制藥集團(tuán)有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 鑒別試驗(yàn)

2.1.1 黃芪的鑒別

2.1.1.1 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物10 g，研細(xì)，加甲醇50 mL，超聲處理20 min，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL，分次溶解，加乙醚提取2次，每次15 mL，棄去乙醚液，水液用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，加氨試液提取2次，每次20 mL，棄去氨液，將正丁醇水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.1.2 對(duì)照藥材溶液的制備 另取黃芪對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.1.3 對(duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.1.4 陰性樣品溶液的制備 按照處方比例和制法制成缺黃芪藥材的陰性樣品。按照供試品溶液的制備方法制成缺黃芪的陰性樣品溶液。

2.1.1.5 試驗(yàn)方法 吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙酸乙酯－甲醇－水（4∶1∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。薄層色譜斑點(diǎn)分離效果好，重現(xiàn)性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 黃芪的薄層色譜圖

2.1.2 赤芍的鑒別

2.1.2.1 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物10 g，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水20 mL洗滌，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備 另取赤芍對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照處方比例和制法制成缺赤芍的陰性樣品。按照供試品溶液的制備方法制成缺赤芍的陰性樣品溶液。

2.1.2.4 試驗(yàn)方法 取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 赤芍的薄層色譜圖

2.1.3 紅花的鑒別

2.1.3.1 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物5 g，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20 mL，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.3.2 對(duì)照藥材溶液的制備 另取紅花對(duì)照藥材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，趁熱過(guò)濾，濾液濃縮至5mL，加甲醇20 mL，混勻，靜置，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，自“用水飽和的正丁醇振搖提取”起，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.3.3 陰性樣品溶液的制備 按照處方比例和制法制成缺紅花的陰性樣品。按照供試品溶液的制備方法制成缺紅花的陰性樣品溶液。

2.1.3.4 試驗(yàn)方法 吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各1μL、紅花對(duì)照藥材溶液20μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙醚－三氯甲烷（1∶4∶4）為展開(kāi)劑，0～10℃預(yù)平衡15 min，展開(kāi)，取出，晾干，置氨蒸氣中熏20 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱Spherisorb C18，4.6 mm ×250 mm；流動(dòng)相：甲醇－水－冰醋酸（30∶70∶0.5）；進(jìn)樣體積：10μL；流速1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2.2.2 溶液的制備 供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的樣品，研細(xì)，取1.2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）10 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

圖3 紅花的薄層色譜圖

對(duì)照品溶液的制備：取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含64μg的溶液，即得。

陰性樣品溶液的制備：按處方比例制成缺赤芍藥材的陰性樣品，取陰性樣品1.2 g，按照供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液。

2.2.3 專(zhuān)屬性考察 取上述3種溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性樣品溶液色譜圖中在芍藥苷對(duì)照品峰相應(yīng)位置處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，說(shuō)明陰性樣品溶液無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖4～6。

圖4 芍藥苷對(duì)照品的HPLC色譜圖

2.2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品3.24 mg，加甲醇使溶解，定容至25 mL（129.60μg·mL－1），備用。精密量取上述對(duì)照品溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得回歸方程：Y＝1 366X－ 6.834 7（R2＝0.999 8），結(jié)果表明，在此色譜條件下，芍藥苷在0.129 6～1.296 0μg內(nèi)其含量與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖5 供試品溶液的HPLC色譜圖

圖6 陰性樣品溶液的HPLC色譜圖

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取“線(xiàn)性”項(xiàng)下濃度為64.80 μg·mL－1的溶液，按選擇的色譜條件操作，注入液相色譜儀10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果芍藥苷平均峰面積為865.7，RSD為0.82%，結(jié)果表明其精密度良好。

2.2.6 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制供試樣品溶液，室溫下放置，于0、2、4、6、8、10、12、24 h測(cè)定含量，結(jié)果芍藥苷平均峰面積為1 142.85，RSD為0.90%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同批供試品六份，按供試品溶液制備方法制備測(cè)定溶液，進(jìn)樣10μL，結(jié)果測(cè)定溶液中芍藥苷的平均含量為3.48 mg·g－1，RSD為0.98%，結(jié)果表明重復(fù)性試驗(yàn)良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取重復(fù)性試驗(yàn)中的樣品5份，每份約0.6 g，精密稱(chēng)定，分置具塞錐形瓶中，另精密吸取濃度為129.60μg·mL－1的對(duì)照品溶液15 mL，精密加入20%的甲醇45 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理1 h，放冷至室溫，稱(chēng)定重量，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，再用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得。按線(xiàn)性關(guān)系考察項(xiàng)下方法測(cè)定芍藥苷的總量，結(jié)果芍藥苷的平均回收率為99.18%，RSD為0.97%，結(jié)果見(jiàn)表1。

Study on quality standards for Buqi Huoxue Capsules

LILing1，WANG Ji-peng2，LIU Xin2
（1.Yantai Institute for Food and Drug Control，Yantai264000，China；2.Yantai Bohai Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Yantai264003，China）

ObjectiveTo establish the quality standard of Buqi Huoxue Capsules.MethodsRadix Astragali，Radix Paeoniae Rubra and Carthamus tinctoriuswere identified by TLC.An HPLCmethod for the determination of Paeoniflorin was established.ResultsTLC spots developed were fairly clear.The HPLCmethod was accurate and the blank test showed no interference.ConclusionThemethod was simple，accurate and reproducible.The established quality standards can control the qualities of this product effectively.

Buqi Huoxue Capsules；Quality standards；TLC；HPLC

R927.1

：A

2095－5375（2014）03－0142－004

李玲，女，主管藥師，研究方向：藥物分析，E－mail：wangjipeng＠bohaizhiyao.com