銀歡，陳魁敏，馬積昊，吳敏范

（1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，沈陽(yáng)110034；2.遼寧何氏醫(yī)學(xué)院2011級(jí)，沈陽(yáng)110163）

GR82334對(duì)電刺激大鼠隱神經(jīng)增加扣帶回前部多巴胺含量的影響

銀歡1，陳魁敏1，馬積昊2，吳敏范1

（1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，沈陽(yáng)110034；2.遼寧何氏醫(yī)學(xué)院2011級(jí)，沈陽(yáng)110163）

目的研究尾靜脈、蛛網(wǎng)膜下腔注射N(xiāo)K-1受體拮抗劑GR82334對(duì)強(qiáng)電流刺激大鼠隱神經(jīng)（SN）增加扣帶回前部（ACG）多巴胺含量的影響。方法將雄性Wistar大鼠42只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假刺激對(duì)照組、SN刺激組、GR82334（ith）組、NS（ith）組、GR82334（iv）組及NS（iv）組。將各組大鼠斷頭后，取出右側(cè)ACG，稱(chēng)質(zhì)量，加入適量冰冷的0.1 mol/L高氯酸溶液，勻漿，4℃、10 000 r/min離心20 min。取上清液20 μL，應(yīng)用高效液相色譜—電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)ACG多巴胺含量。結(jié)果強(qiáng)電流刺激SN引起ACG多巴胺含量顯著增高；尾靜脈或蛛網(wǎng)膜下腔注射GR82334拮抗了強(qiáng)電流刺激SN引起的ACG多巴胺含量的顯著增高。蛛網(wǎng)膜下腔注射GR82334未能完全阻斷強(qiáng)電流刺激SN引起的ACG多巴胺含量的顯著增高。結(jié)論外周NK-1受體和中樞NK-1受體參與SN傳入信息引起的ACG多巴胺含量顯著增高的過(guò)程；還存在其它遞質(zhì)和受體參與的中樞通路引起ACG多巴胺含量的顯著增高。

GR82334；多巴胺；NK-1受體；扣帶回前部；高效液相色譜

研究發(fā)現(xiàn)，扣帶回前部（anterior cingulate gyrus，ACG）參與痛覺(jué)相關(guān)情緒的產(chǎn)生過(guò)程，是痛覺(jué)的重要中樞，在痛覺(jué)的感受與調(diào)制中起重要作用［1～3］。速激肽NK-l受體的激活可以引起疼痛反應(yīng)，NK-l受體拮抗劑可阻斷或減弱痛覺(jué)過(guò)敏現(xiàn)象［4］。隱神經(jīng)（saphenous nerve，SN）是下肢痛覺(jué)的主要傳入神經(jīng)。有文獻(xiàn)報(bào)道，多巴胺（dopamine，DA）參與痛覺(jué)的感受及調(diào)制［5］，ACG是DA能神經(jīng)元通路投射的主要部位之一［6］。本研究組發(fā)現(xiàn)AMPA/Kainate受體與痛覺(jué)有關(guān)，參與了傷害性電刺激大鼠SN引起的ACG DA含量顯著增高的過(guò)程［7］，但是，速激肽NK-1受體是否參與大鼠SN傷害性傳入信息引起的ACG DA能神經(jīng)系統(tǒng)的激活過(guò)程尚不清楚。因此，本研究擬應(yīng)用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）-電化學(xué)檢測(cè)（electrochemical detection，ECD）技術(shù)研究速激肽NK-1受體拮抗劑GR82334對(duì)傷害性電刺激大鼠SN引起的ACG DA含量顯著增高的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

雄性Wistar大鼠42只，體質(zhì)量（235±35）g，由沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2010-0001］。將大鼠隨機(jī)分組：（1）空白對(duì)照組：麻醉大鼠后30 min斷頭；（2）假刺激對(duì)照組：將刺激電極置于左后肢SN向中端，但不給SN電刺激，30 min后斷頭；（3）SN刺激組：電刺激SN后30 min斷頭；（4）GR82334（ith）組：蛛網(wǎng)膜下腔注射GR82334（10 μg/10 μL生理鹽水）后10 min電刺激SN，30 min后斷頭；（5）NS（ith）組：蛛網(wǎng)膜下腔注射同體積生理鹽水后10 min電刺激SN，30 min后斷頭；（6）GR82334（iv）組：尾靜脈注射GR82334 1 mg/kg后10 min電刺激SN，30 min后斷頭；（7）NS（iv）組：尾靜脈注射同體積生理鹽水后10 min電刺激SN，30 min后斷頭。電刺激SN參數(shù)為：強(qiáng)度1.0 mA、波寬0.5 ms的單脈沖方波。

1.2 ACG DA含量測(cè)定

1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠。分離左后肢SN，結(jié)扎其離中端，在SN的向中端放置1個(gè)雙極銀絲保護(hù)刺激電極。在電刺激SN后30 min迅速斷頭，根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜在冰臺(tái)上取出各組大鼠右側(cè)ACG，置于-80℃待測(cè)。取出待測(cè)ACG并稱(chēng)質(zhì)量，加入適量冰冷的0.1 mol/L高氯酸溶液，勻漿，4℃、10 000 r/min離心20 min。取上清液20 μL，注入HPLC-ECD系統(tǒng)行ACG DA含量檢測(cè)，根據(jù)記錄的峰面積及DA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量［7］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 尾靜脈注射GR82334對(duì)電刺激SN誘發(fā)的ACG DA含量變化的影響

如表1所示：與空白對(duì)照組及假刺激對(duì)照組相比，電刺激SN后30 min，ACG DA含量顯著增加（P＜0.01）；尾靜脈注射N(xiāo)K-1受體拮抗劑GR82334 10 min后電刺激SN，30 min后，ACG DA含量輕度增高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而同體積的生理鹽水尾靜脈注射10 min后電刺激SN，30 min后引起ACG DA含量顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 尾靜脈注射GR82334對(duì)電刺激SN誘發(fā)的ACG DA含量變化的影響Tab.1 Effect of GR82334（iv）on the change of DA content in rat ACG induced by electrical stimulation of SN

表1 尾靜脈注射GR82334對(duì)電刺激SN誘發(fā)的ACG DA含量變化的影響Tab.1 Effect of GR82334（iv）on the change of DA content in rat ACG induced by electrical stimulation of SN

1）P＜0.01 vs blank control and sham stimulation control groups；2）P＜0.01 vs SN stimulation group and normal saline（iv）group.

?

2.2 蛛網(wǎng)膜下腔注射GR82334對(duì)電刺激SN誘發(fā)的ACG DA含量變化的影響

如表2所示：與空白對(duì)照組及假刺激對(duì)照組相比，電刺激SN后30 min，ACG DA含量顯著增加（P＜0.01）；蛛網(wǎng)膜下腔注射N(xiāo)K-1受體拮抗劑GR82334 10 min后電刺激SN，30 min后ACG DA含量也顯著增高（P＜0.01），但ACG DA含量增高的幅度明顯低于單純電刺激SN后30 min引起的DA含量增高的幅度（P＜0.01），也低于蛛網(wǎng)膜下腔注射同體積生理鹽水10 min后電刺激SN后30 min引起的DA含量增高的幅度（P＜0.01）。

3 討論

SN是傳入下肢痛覺(jué)信息的主要神經(jīng)，其傳入通路投射到ACG［8］。研究顯示，DA與痛覺(jué)有關(guān)，能夠抑制傷害性信息的傳遞，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用［5］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，電刺激大鼠SN能夠明顯增高ACG DA含量（P＜0.01），證明由SN傳入的傷害性痛覺(jué)信息能夠到達(dá)ACG。提示SN的傳入纖維可能與DA能神經(jīng)系統(tǒng)存在某種結(jié)構(gòu)與功能聯(lián)系，SN傳入的傷害性信息增強(qiáng)DA能神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)，使ACG DA含量增高，參與痛覺(jué)及其相關(guān)的活動(dòng)。

表2 GR82334蛛網(wǎng)膜下腔注射對(duì)電刺激SN誘發(fā)的ACG DA含量變化的影響Tab.2 Influence of GR82334（ith）to the change of DA content in rat ACG caused by electrically stimulating SN

表2 GR82334蛛網(wǎng)膜下腔注射對(duì)電刺激SN誘發(fā)的ACG DA含量變化的影響Tab.2 Influence of GR82334（ith）to the change of DA content in rat ACG caused by electrically stimulating SN

1）P＜0.01 vs blank control and sham stimulation control groups；2）P＜0.01 vs SN stimulation group and normal saline（ith）group.

速激肽NK-1受體參與熱痛過(guò)敏、神經(jīng)損傷及甲醛在頜面部引起的持續(xù)性疼痛［9］。但NK-1受體是否參與大鼠SN傳入的傷害性信息增高ACG DA含量的過(guò)程尚不清楚。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，電刺激大鼠SN引起的ACG DA含量顯著增加可被尾靜脈注射N(xiāo)K-1受體拮抗劑GR82334拮抗，說(shuō)明外周NK-1受體參與了SN傷害性傳入信息誘導(dǎo)的ACG DA含量的顯著增高過(guò)程。

GR82334不易通過(guò)血腦屏障，因此，本研究還探討了GR82334蛛網(wǎng)膜下腔注射對(duì)電刺激大鼠SN誘導(dǎo)的ACG DA含量的顯著增高過(guò)程的影響。研究結(jié)果顯示，傷害性刺激大鼠SN誘導(dǎo)的ACG DA含量的顯著增加可被蛛網(wǎng)膜下腔注射N(xiāo)K-1受體拮抗劑GR82334拮抗。表明中樞神經(jīng)系統(tǒng)NK-1受體也參與大鼠SN傷害性傳入信息誘導(dǎo)的ACG DA含量顯著增加的過(guò)程。但是，NK-1受體拮抗劑GR82334蛛網(wǎng)膜下腔注射并未完全阻斷ACG DA含量的顯著增加，說(shuō)明可能存在其他遞質(zhì)與受體參與的大鼠SN傷害信息傳入的其它中樞通路引起ACG DA含量的顯著增加。

總之，本研究結(jié)果為進(jìn)一步研究痛覺(jué)及鎮(zhèn)痛治療提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（編輯 王又冬）

EffectofGR82334 on the Electric Stimulation-induced Increase ofDopamine Contentin Anterior Cingulate Gyrusin Rats

YINHuan1，CHENKui-min1，MAJi-hao2，WUMin-fan1
（1.DepartmentofPhysiology，Shenyang MedicalCollege，Shenyang 110034，China；2.Grade 2011，He University，Shenyang 110163，China）

ObjectiveTo investigate the effects of GR82334 caudal veins injection（iv）or intrathecal injection（ith）on the increase of dopamine（DA）contentin ratsanteriorcingulate gyrus（ACG）induced by heavy currentstimulation ofsaphenous nerve（SN）.MethodsTotally 42 male Wistar rats were randomly divided into six groups，including control group，sham stimulation group，SN stimulation group，GR82334（ith）group，NS（ith）group，GR82334（iv）group，and NS（iv）group.At the end of the study，rats of different groups were sacrificed，then the right side ACG were collected and weighted.ACG samples were then homogenized with 0.1 mol/L perchloric acid solution.After spinning at 10 000 r/min（4℃）for 20 min，20 μL of the supernatant were harvest from each sample.High performance liquid chromatography electrochemical detection was used to measure DA content.ResultsHeavy current stimulation of SN caused obvious increase of the DA content in ACG.GR82334（iv or ith）antagonized the significant increase of DA content in ACG induced by the stimulating SN.However，GR82334（ith）did not completely antagonized the increase of DA content in ACG induced by electric stimulating SN.ConclusionThe results indicated that there is connection between SN and the dopaminergic nervous system in ACG，and SN afferentnociceptive signalscan activate ACGdopaminergic neurons to release DA.Peripheraland centralNK -1 receptors are involved in the process of significant increase of DA content in ACG induced by SN afferent signals.However，there are other central paths ofSNinformation inputto ACGto induce obvious increases ofDA content，in which otherneurotransmitters and receptors may be involved.

GR82334；dopamine；NK-1receptor；anterior cingulate gyrus；high performance liquid chromatography

R338；Q432

A

0258-4646（2014）05-0426-03

遼寧省教育廳高校科研計(jì)劃（L2012376，2009A698）；教育部留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金（教外司留［2008］101號(hào)）；沈陽(yáng)市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃（1063317-1-00，F(xiàn)10-205-1-42，F(xiàn)13-301-1-00）

銀歡（1981-），女，講師，碩士.

吳敏范，E-mail：minfanwu0594@sina.com.cn

2014-03-07

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