張義，謝海龍，李龍（長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023）

田夫（長江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市第一人民醫(yī)院普外科，湖北 荊州 434000）

隨著生物技術(shù)的不斷更新，腫瘤除了傳統(tǒng)的手術(shù)、放化療等治療外還出現(xiàn)腫瘤生物治療，它包括了過繼性細(xì)胞免疫治療，而過繼性免疫治療的兩個重要部分如DC-CIK，其中DC是目前已了解的功能最強大的抗原提呈細(xì)胞，其作用為認(rèn)別、攝取、提呈抗原后激發(fā)特異的免疫反應(yīng)；CIK有多種細(xì)胞因子刺激后產(chǎn)生的異質(zhì)細(xì)胞，具有扮演T淋巴細(xì)胞角色作用也發(fā)揮殺傷細(xì)胞的特性。依據(jù)現(xiàn)有的研究可看出，DC-CIK在腫瘤生物治療發(fā)面有著突出表現(xiàn)，兩者聯(lián)合相互促進(jìn)、協(xié)調(diào)并使其抗腫瘤效應(yīng)達(dá)到最佳。本文就DC-CIK的基礎(chǔ)研究及抗消化道腫瘤臨床研究做一綜述。

1 樹突狀細(xì)胞（DC）

1.1 DC生物學(xué)特性

DC是由Steinman等［1］于20世紀(jì)70年代研究發(fā)現(xiàn)，因其奇特的外形而稱之為樹突狀細(xì)胞。在目前已經(jīng)研究的抗原提呈細(xì)胞中功能最強，是T細(xì)胞的專職抗原提呈細(xì)胞，是102～103倍于其他的抗原提呈細(xì)胞［2］。廣泛分布在全身組織中，除角膜、腦外，但含量非常少，在血細(xì)胞中占單核細(xì)胞總數(shù)不到百分之一［3］。CD14＋或CD34＋細(xì)胞是DC的前體細(xì)胞，可在體外用腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子刺激發(fā)育成DC。根據(jù)其來源分為髓系DC和淋巴系DC，這些DC因分布及分化不同有相應(yīng)的名字［4］。在人體內(nèi)絕大多數(shù)DC是不成熟的，高表達(dá)是膜分子如FCRⅡ［5］，主要參與攝取、加工處理抗原；已攝取抗原的不成熟DC從外周組織遷移至淋巴器官并分布在T細(xì)胞區(qū)后通過免疫反應(yīng)漸成為成熟DC，這時的DC具有高表達(dá)分子為MHCⅠ類/Ⅱ類分子、共刺激分子及黏附分子等，可激活初始T細(xì)胞而產(chǎn)生效應(yīng)T細(xì)胞［6］。DC也可分泌IL-12，誘導(dǎo)NK、T細(xì)胞產(chǎn)生穿孔素、顆粒酶及TNF等。另DC可在體外誘導(dǎo)和擴增后用相關(guān)抗原沖擊或基因轉(zhuǎn)染等方法使DC加載抗原［7］，能提高CIK的殺瘤特異性。

DC的異常改變及功能受傷的機制尚不清楚，可能是由于腫瘤對宿主的免疫抑制作用過于強大以及多種細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長因子、VEGF、IL-10等影響有關(guān)［8］。

1.2 DC抗瘤機制

①成熟的DC能使大量效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生，可達(dá)到直接殺傷腫瘤細(xì)胞效果。②DC分泌的細(xì)胞因子如IFN-a、IL-4、IL-10等抑制了腫瘤血管的細(xì)胞增殖［9］，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞生長來達(dá)到間接殺瘤作用，也可分泌趨化性因子如IL-8、MCP-1等可使T細(xì)胞向腫瘤遷移，以便更高密度的T細(xì)胞來殺傷腫瘤細(xì)胞。

2 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的自然殺傷細(xì)胞（CIK）

2.1 CIK的生物學(xué)特性

CIK經(jīng)典誘導(dǎo)途徑是由Schimidt-wolf等［10］在20世紀(jì)90年代第一次提出，是單核細(xì)胞在體外經(jīng)不同種細(xì)胞因子刺激產(chǎn)生的一群的異質(zhì)細(xì)胞，高表達(dá)CD3＋和CD56＋［11］，具有NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤特點，還兼有T細(xì)胞強大抗瘤活性［12］。故CIK可殺傷大多數(shù)腫瘤細(xì)胞，但由于不具有特異的識別和殺傷腫瘤細(xì)胞［13］，因此其殺傷效應(yīng)仍達(dá)不到最佳。

2.2 CIK抗瘤機制如下

①CIK受到DC分泌的IL-12刺激后產(chǎn)生穿孔素及顆粒酶等可以使腫瘤細(xì)胞膜裂解，達(dá)到直接殺傷腫瘤細(xì)胞［14］。②CIK分泌大量細(xì)胞因子如IFN－γ、TNF-B淋巴細(xì)胞素等間接殺傷腫瘤細(xì)胞［15］。CIK表面的Ⅱ型跨膜糖蛋白與腫瘤細(xì)胞膜Ⅰ型跨膜糖蛋白相結(jié)合，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［16］。

3 DC-CIK

3.1 DC和CIK聯(lián)合

將DC和CIK聯(lián)合培養(yǎng)可以獲得兼有兩者特性的效應(yīng)細(xì)胞也即為DC-CIK，可以相互協(xié)調(diào)使CD3＋、CD8＋ 和CD3＋、CD56＋ 雙陽性效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量大量增加［17］，同時還具有特異的殺傷腫瘤細(xì)胞及更強抗瘤活性，這樣彌補了CIK的不足。DC-CIK的生物學(xué)特性及抗瘤效果大大強于單一的CIK，故DC-CIK在抗腫瘤方面將可達(dá)到最大效應(yīng)。另用抗原負(fù)載的DC與CIK一起培養(yǎng)出來的效應(yīng)細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞更具有特異識別和殺傷力［18］。

3.2 DC-CIK抗瘤機制如下

①DC和CIK共培養(yǎng)時，DC分泌IL-2、IL-12、IFN-γ等細(xì)胞因子，可促進(jìn)CIK增殖的速度加快［19］，同時DC表面的CD40和CIK表面的CD40配體相互結(jié)合，對腫瘤細(xì)胞的增殖可產(chǎn)生負(fù)面影響［20］。②DC和CIK共培養(yǎng)后，可彼此激發(fā)兩者成熟［21］，DC表面的MHC－Ⅱ類分子、共刺激分子等表達(dá)的更顯著，CIK表面的CD56表達(dá)也會明顯增加。

4 DC-CIK抗消化道腫瘤的臨床研究

目前DC-CIK細(xì)胞免疫治療的廣譜殺瘤效應(yīng)對多種惡性腫瘤均有很好的臨床療效，特別在治療消化道惡性腫瘤如胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌等取得了一定成果，下面就分別有無抗原負(fù)載的DCCIK進(jìn)行敘述。

4.1 無抗原負(fù)載的DC-CIK細(xì)胞

鞏新建等［22］將110位胃癌術(shù)后患者，依據(jù)TNM分期處于T2～T3期，術(shù)后病人隨機分為兩組，一組52名患者給予DC-CIK治療；其他患者為二組，給予全部采用CF＋5-FU＋ADM＋DDP方案的化療。結(jié)果為：患者5年生存率一組比二組明顯增高，一組治療后能較好的改善患者生活質(zhì)量。

李莎等［23］將40位結(jié)腸癌患者隨機分兩組，奧沙利鉑＋CF＋5-FU方案的化療組，另一組DC-CIK＋同種方案化療聯(lián)合組。結(jié)果顯示：聯(lián)合組治療后CD4＋/CD8＋比值明顯升高，提高病人機體免疫功能，局部復(fù)發(fā)率低于化療組，1到2年生存率高于化療組。

馬洪波等［24］將67例原發(fā)性肝癌患者隨機分為34例行肝癌切除術(shù)＋術(shù)后DC-CIK治療組和33例僅手術(shù)治療組。結(jié)果是：DC-CIK＋手術(shù)治療原發(fā)性肝癌一般不會出現(xiàn)嚴(yán)重副作用，不僅可以提高患者的免疫功能及治療效果，還能能很好的改善生活質(zhì)量。

劉愛華［25］等將50例胰腺癌患者依據(jù)治療方式分為25例化療＋DC-CIK治療作為聯(lián)合組，另25例單純化療組。結(jié)果聯(lián)合組患者治療后外周血CD4＋/CD8＋比值上調(diào)上升，能提高胰腺癌患者的機體免疫功能及抗腫瘤免疫效應(yīng)。

4.2 抗原負(fù)載的DC-CIK細(xì)胞

唐家平［26］分4種不同組的效應(yīng)細(xì)胞對胃癌細(xì)胞殺傷作用進(jìn)行研究探討，分析得出：用流式細(xì)胞儀檢測比較結(jié)果是抗原負(fù)載組的DC表面CD83及CD86表達(dá)顯著增加，用MTT檢測顯示抗原負(fù)載組對胃癌細(xì)胞殺傷效果增強。另張成磊等［27］等對熱休克胃癌MKN-28細(xì)胞負(fù)載DC-CIK細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞活性的研究中，當(dāng)效靶細(xì)胞比值為20時，Ag-DC-CIK組對癌細(xì)胞殺傷作用強于其他組。

應(yīng)敏剛等［28］將確診為結(jié)直腸癌患者共102例分兩組，一組為結(jié)直腸癌根治術(shù)＋放化療的患者，另一組在前組基礎(chǔ)上還加用抗原負(fù)載的DC-CIK治療患者。比較分析結(jié)果是：Ag-DC-CIK治療組與其他組相比病人5年生存率明顯提高。

鐘國成等［29］對24例原發(fā)性肝癌患者研究，接受負(fù)載自身肝癌裂解物的D C與CI K治療肝癌患者后，患者在免疫功能和臨床治療效果有所提高，可見接受抗原負(fù)載D C-CIK治療肝癌給臨床應(yīng)用提供了一定參考意義。

Maten等［30］用CA199負(fù)載DC-CIK對胰腺癌細(xì)胞殺傷活性研究，經(jīng)過分析對比結(jié)果是：有CA199抗原負(fù)載的DC-CIK的殺傷活性比DC-CIK要高，比單一的CIK要明顯更高。可見DC-CIK為治療胰腺癌提供依據(jù)。

5 DC-CIK目前面臨的問題及展望

DC-CIK細(xì)胞經(jīng)過多年不斷的發(fā)展，不斷的完善，其理論研究及臨床應(yīng)用結(jié)果都顯示抗腫瘤效果顯著增強，在改善患者預(yù)后、生存期及生活質(zhì)量等有良好效果。但現(xiàn)在DC-CIK細(xì)胞免疫治療還沒大規(guī)模應(yīng)用，臨床病例數(shù)目不夠大，故評價DC-CIK在臨床上的療效和長期的安全性有待進(jìn)一步觀察。DC與CIK多少比值培養(yǎng)可以發(fā)揮最大效應(yīng)及盡可能降低的副反應(yīng)，效靶細(xì)胞是多少比值可以最理想治療效果及效應(yīng)細(xì)胞回輸?shù)膫€體化方案仍需要進(jìn)一步探討。但毫無疑問，DC-CIK細(xì)胞免疫治療作為一種有望根治腫瘤的治療方式，隨著新技術(shù)的發(fā)展和臨床研究的深入，將會與腫瘤傳統(tǒng)治療有機結(jié)合，給腫瘤患者帶來新的曙光。

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［編輯］ 何勇