趙庭周，王卜瓊，馬 青，樊啟龍

(云南白藥集團(tuán) 中藥材優(yōu)質(zhì)種源繁育有限責(zé)任公司，云南 武定651600)

重樓以地下根莖入藥，性微寒、味苦，歸肝經(jīng)，具有清熱解毒、消腫止痛、平喘止咳、涼肝定驚之功效[1]，是宮血寧、熱毒清、季德勝蛇藥等多種著名中成藥的原料。

由于重樓極高的藥用價值和旺盛的市場需求，藥材價格連續(xù)10年持續(xù)上漲，目前每千克價格已接近400元。巨大的市場需求加速了重樓資源的迅速減少，也激發(fā)了人們的種植熱情，也推動了重樓的馴化栽培技術(shù)研究[2-4]。但多數(shù)研究集中在重樓的繁殖生物學(xué)及資源評價方面，鮮見有關(guān)重樓藥材生產(chǎn)周期方面的詳細(xì)研究報道[5-7]。一方面，重樓的馴化栽培時間比較短，短期內(nèi)還沒有形成有效的栽培模式；另一方面，重樓的種苗繁育困難，時間較長，種苗獲得不易。

每月采集滇重樓地下根莖，按2010版《中華人民共和國藥典》一部標(biāo)準(zhǔn)，分析皂苷含量，尋求皂苷含量較高的月份。以滇重樓種子為繁育材料，連續(xù)跟蹤滇重樓種子幼苗的生長情況、皂苷含量，綜合分析滇重樓藥用部位的生物積累量和皂苷成分含量，分析滇重樓種植的經(jīng)濟(jì)效益，提出滇重樓藥材合理的采收周期，促進(jìn)滇重樓種植產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

重樓種子采自公司2002年建設(shè)的資源圃，經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所紀(jì)運(yùn)恒鑒定為滇重樓Parispolyphyllavar.yunnanensis(Fr.) Hand.-Mazz.。

滇重樓地下根莖采自公司2007年種植的重樓，已生長6年。

1.2 儀器與試藥

WATERS高效液相色譜儀，包括510泵，717自動進(jìn)樣器，996二極管陣列檢測器，Millennium2010色譜管理系統(tǒng)。對照用重樓甾體皂苷I、II、Ⅵ、Ⅶ、H和PA購自中國科學(xué)院昆明植物研究所，采用HPLC法測定純度均在99%以上。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 滇重樓地下根莖樣品的采集

每月15日，隨機(jī)采挖20株滇重樓，洗凈，從地下根莖莖痕(每年地上莖枯萎脫落后，在地下根莖上形成的疤痕，一般一年形成一個莖痕。)處切段，晾干，分別稱取各段的重量，記錄鮮重。然后，放入烘箱，60 ℃烘干，記錄干重。

1.3.2 滇重樓種子幼苗地下根莖生物生長量的測定

12月份，滇重樓種子幼苗地上莖枯萎后，按生長年限(1～8年)分開，每個苗齡隨機(jī)采挖20株，洗凈，晾干，稱取重量，記錄鮮重。然后，放入烘箱，60 ℃烘干，記錄干重。

1.3.3 重樓皂苷的測定

按照藥典標(biāo)準(zhǔn)，測定地下根莖中甾體皂苷I、II、Ⅵ、Ⅶ、H和PA的含量。取粉碎混勻后的樣品粉末 (過三號篩) 約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)40 min，自然冷卻，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為試驗樣品。

色譜柱：Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μL) ；以乙腈—水(19∶81)為流動相；檢測波長203 nm；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 滇重樓地下根莖的生長發(fā)育規(guī)律

滇重樓以地下根莖入藥，采收地下根莖是滇重樓人工種植獲得收入的主要途徑。多年生地下根莖的生長主要是靠頂芽的生長發(fā)育來完成的。頂芽的形成按年度循環(huán)發(fā)生，一般情況下，由頂芽發(fā)育而成的地上莖一年生長一次，枯萎一次，地上莖枯萎脫落后在地下根莖上留下一個疤痕，稱莖痕。生物量的積累主要反映頂芽發(fā)育好，當(dāng)年地下根莖的生長量就大；頂芽損壞后，地下根莖當(dāng)年就停止生長。分段取樣后，通過比較頂芽占地下根莖的重量比率，了解頂芽的生長發(fā)育規(guī)律，從而得到滇重樓地下根莖生物量的月度變化規(guī)律。

從圖1得知，滇重樓地下根莖的生長旺盛期從6月份開始，到10月份達(dá)到頂峰。然后，10月至翌年2月份為地下根莖的潛伏期，生長緩慢。2月份以后，由于分化形成第二年的地上莖，消耗了部分地下根莖積累的營養(yǎng)物質(zhì)，地下根莖的生長量下降。

圖1 滇重樓地下根莖的生長發(fā)育規(guī)律

2.2 滇重樓地下根莖皂苷含量的月度變化規(guī)律

滇重樓地下根莖的皂苷含量，7月份最高，6月份最低。具有地上莖葉的月份(7月、8月、9月、10月、11月)比沒有地上莖葉的月份(12月、翌年1月、翌年2月、翌年3月、翌年4月)高。9月份以后，重樓皂苷含量下降明顯；11月至翌年3月，重樓皂苷含量有細(xì)小的變化；3月至6月份，重樓皂苷的含量逐月下降，6月份降到最低。除6月份外，其他月份重樓皂苷的含量都超過了2010年版《中華人民共和國藥典》第一部規(guī)定的含量標(biāo)準(zhǔn)0.6%。

圖2 滇重樓地下根莖皂苷含量月度變化規(guī)律

圖3 滇重樓種子幼苗地下根莖的年生長量

2.3 滇重樓種子幼苗地下根莖的年生長變化規(guī)律

滇重樓種子幼苗地下根莖前三年生長緩慢，第四年后進(jìn)入快速生長期。到第八年，生長快速的根莖質(zhì)量可達(dá)100 g以上，每公頃產(chǎn)鮮品藥材30 t左右；而生長緩慢的重樓，根莖質(zhì)量僅有50多克，每公頃產(chǎn)鮮品藥材15 t多。

2.4 滇重樓種子幼苗地下根莖皂苷的積累規(guī)律

分析滇重樓種子(0年苗)及各苗齡的地下根莖重樓皂苷的含量，結(jié)果見表1。隨著栽培年限的增加，重樓皂苷的含量逐年增多。到第七年，重樓進(jìn)入生殖生長，開花后，重樓皂苷的含量達(dá)到最高。按照2010版《中華人民共和國藥典》第一部的標(biāo)準(zhǔn)，重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量達(dá)到0.6%，即達(dá)到藥材標(biāo)準(zhǔn)。滇重樓種子幼苗經(jīng)過4年的生長，就能符合要求。

表1 滇重樓不同苗齡幼苗地下根莖的皂苷含量

2.5 滇重樓種植的最佳采收期

滇重樓地下根莖的生長發(fā)育表明，6月至10月是根莖的快速生長期，10月份達(dá)到頂點，10月至翌年2月份是根莖生長的潛伏期，根莖的重量幾乎不增加。因此，從地下根莖生物量的積累規(guī)律看，滇重樓的最佳采收時間應(yīng)以10月至翌年2月為宜。

重樓皂苷分析結(jié)果表明，滇重樓地下根莖的皂苷含量7月份最高，其次是9月份。9月份以后，皂苷含量明顯下降。11月至翌年3月，皂苷含量變化不大。因此，僅僅以皂苷含量為標(biāo)準(zhǔn)，滇重樓的最佳采收時間以7月至9月為宜。

綜合滇重樓地下根莖的生長量和含量因素，結(jié)合滇重樓生長緩慢的特性，滇重樓種植的最佳采收期為10月份。滇重樓種子幼苗根莖發(fā)育及含量分析表明，以種子苗生產(chǎn)重樓藥材，第七年采收藥材比較好。

3 討 論

重樓是云南的道地藥材，雖然有10多年的種植歷史，但產(chǎn)出的藥材很少，主要是因為多數(shù)的滇重樓種植以生產(chǎn)種源(種子)為主。為了正確和規(guī)范引導(dǎo)滇重樓的人工種植產(chǎn)業(yè)，需要對重樓藥材的生產(chǎn)周期做系統(tǒng)的研究。

藥材的最佳采收期應(yīng)該是藥用部位生物量最大，含量最高的月份。滇重樓地下根莖生物量的積累，到10月份達(dá)到最大。地下根莖的皂苷含量最高卻在7月份。這是和滇重樓的生長發(fā)育特性是相關(guān)的。滇重樓一般在5月～6月出苗，6月至7月是授粉期，7月至9月是果實發(fā)育期，9月份至11月份是裂果期(果實成熟期)，11月份以后，地上植株開始枯萎，進(jìn)入倒苗期。在這個過程中，生殖生長的不同階段消耗的養(yǎng)分是不同的，授粉期間消耗的養(yǎng)分是最少的，隨著種子的發(fā)育，果實的膨大，養(yǎng)分的消耗逐步加大，地下根莖皂苷的含量也逐步下降。地下根莖皂苷的月度變化規(guī)律，正好反映了重樓果實的發(fā)育歷程。也間接說明，在滇重樓的種植過程中，如果摘除子房，將有利于重樓皂苷的積累，也能促進(jìn)地下根莖的增重。

盡管數(shù)據(jù)表明，滇重樓種植的最佳采收期為10月份。然而，由于滇重樓的種源價格較貴(鮮種子每千克2 000元)，銷售種子是種植利潤的主要來源。因此，在實際的操作規(guī)程中，以重樓種子采收完成后的11月份為采收期更切合實際。以商品種苗(滇重樓3年生種子苗，單株質(zhì)量5克以上)生產(chǎn)商品重樓，種植5年采挖比較合適。

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