高世勇，王 瓏

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076;2.國家教育部天然抗腫瘤藥物工程研究中心，哈爾濱150076)

冬凌草是唇形科香茶菜屬植物碎米椏的干燥地上部分，半灌木，草質(zhì)部分入藥.由于其冬天全株結(jié)滿薄如蟬翼的銀白色冰凌片，又名冰凌草，主產(chǎn)于河南濟(jì)源太行山一帶.味甘苦，性微寒，具有清熱解毒、消炎止痛、健胃活血和抗腫瘤的功效.用于治療咽喉腫痛、扁桃體炎、蛇蟲咬傷，對(duì)食管癌、賁門癌、原發(fā)性肝癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌，并且對(duì)食管上皮增生有顯著療效.

1 化學(xué)成分

冬凌草的主要化學(xué)成分是萜類化合物，還含有揮發(fā)油、甾體、黃酮、生物堿、氨基酸、有機(jī)酸、單糖.

1.1 二萜類

冬凌草的主要成分，主要骨架構(gòu)包括對(duì)映貝殼杉烷型和螺斷貝殼杉烷型.其中對(duì)映貝殼杉烷型包括:冬凌草甲素［1］、冬凌草乙素、冬凌草丙素、lasiodonin、suimiyainA、eEffusanin E、冬凌草丁素、冬凌草戊素、魯冬凌草甲素、魯山冬凌草乙素、魯山冬凌草丙素、山冬凌草丁素、魯山冬凌草戊素、信陽冬凌草甲、信陽冬凌草乙素［2］、lasiodonin acetonide［3］、16，17 －exoepoxide－oridonin、11，l 5 －O，O －diacetyl－abdotemins D［4］;螺斷貝殼杉烷型包括:盧氏冬凌草甲素、盧氏冬凌草乙素、貴州冬凌草素［2］、二萜二聚體雙冬凌草丁素［5］和二萜形成的糖苷［2］.

1.2 揮發(fā)油

冬凌草中含有大量揮發(fā)油，多為單萜及長鏈烴類［6］.王桂紅等人用水蒸汽蒸餾方法提取冬凌草中的揮發(fā)油成分，用GC－MS方法對(duì)其進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)14個(gè)化合物［7］.袁珂等人利用GC－MS技術(shù)對(duì)冬凌草全草的揮發(fā)油進(jìn)行分析，鑒定得到42個(gè)揮發(fā)油成分，其中六烷酸的含量最高［8］.

1.3 甾體類

劉凈等人從冬凌草的80%乙醇提取物中分離得到木栓酮(friedelin)、β－谷甾醇和胡蘿卜苷［1］，同時(shí)還得到豆甾醇、α－香樹脂醇、熊果酸和齊墩果酸［9－12］.研究發(fā)現(xiàn)熊果酸不僅可以抵抗對(duì)多種致癌和促癌物質(zhì)，還可以抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞的生長［3］.

1.4 黃酮

用70%含水丙酮從冬凌草的地上部分提取分離得到apigenin－6，8－di－C－β－D －glucopyranoside［13］，得到的黃酮還有 5，3'，4'－ 三羥基 － 6，7－二甲氧基黃酮，胡麻素(pedalitin)，槲皮素，5，4'－二羥基 －6，7，8，3'－ 四甲氧基黃酮，sideritoflavone，quercetin －3 － O － rutinoside，kaempferol－3，7－ di－ O － rhamnoside，quercitrin，isorhamnetin，kaempferol－3 －O －rhamnoside，5，8，4'－ 三羥基 －6，7，3 － 三甲氧基黃酮(5，8，4'－ trihydroxy－6，7，3'－trimethoxylflavone)，苜蓿素(tricin)和山柰酚－3，7－O－α－L－二鼠李糖苷(kaempferol－3，7－O－ α －L －dirhamnoside［14］.從盧氏冬凌草中可以分離出 gardenin D，5，3'，4'－ trihydroxy －6，7，8 － trimethoxyflavone，pedalitin 和 quercetin［15］.

1.5 生物堿

馮衛(wèi)生等人利用大孔吸附樹脂色譜對(duì)冬凌草地上部分進(jìn)行分離純化，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu).得到7個(gè)化合物，分別為:冬凌草堿;黃嘌呤;芹菜素－6，8－二－C－β－D－葡萄糖苷;7－羥基 －4(1H)－喹啉酮;1，5－二 －(3，4－羥基苯基)－乙烯醚;3－(3，4－二羥基苯基)－2－異丙氧基－丙酸;鄰苯二甲酸雙－(2－乙基己基)酯.其中冬凌草堿為新化合物，其余化合物均為首次該屬植物中分離得到［16］.

王桂紅等人用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定冬凌草中的氨基酸含量，發(fā)現(xiàn)其含有17種氨基酸，其中谷氨酸含量最高，而胱氨酸含量最少［17］.

1.6 有機(jī)酸

鄭曉珂等人將新鮮冬凌草用70%丙酮水溶液組織破碎提取，用Diaion HP－20，Toyopearl HW－40，MCI Gel，Silica Gel色譜柱分離單體化合物，波譜分析鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)，得到了4個(gè)酚酸類化合物:咖啡酸，水楊酸，迷迭香酸，迷迭香酸甲酯.其中除水楊酸外，其他3個(gè)化合物為首次從其中分離得到［18］.

盧海英等人利用層析手段對(duì)冬凌草進(jìn)行分離純化并通過波譜解析和理化鑒別對(duì)冬凌草進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定得到11個(gè)化合物，分別為:5，4'－二羥基－6，7，8，3'－四甲氧基黃酮，冬凌草乙素，rabdokaurin C，lasiokaurinol，冬凌草甲素，lasiodonin，香草酸，原兒茶醛，阿魏酸，咖啡酸，槲皮素.其中化合物rabdokaurin C和lasiokaurinol為首次從冬凌草中分得［1］.

1.7 糖類

左海軍等人［10］利用硅膠柱色譜對(duì)冬凌草的乙醇冷浸提取物進(jìn)行分離，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)分離并進(jìn)行冬凌草甲素和冬凌草乙素的抗癌活性對(duì)比.分離得到12個(gè)化合物，鑒定所得化合物為α－香樹脂醇、β－谷甾醇、熊果酸、齊墩果酸、水楊酸、sideritoflavone、冬凌草甲素、冬凌草乙素、冬凌草丙素、胡蘿卜苷、enmenol－lα－O－β－D－glucoside、葡萄糖.鄭曉珂等人用70%的丙酮水溶液對(duì)冬凌草的組織破碎物進(jìn)行提取分離得到 α －D － 呋喃果糖［18～19］.

2 藥理作用

冬凌草的主要藥理作用有抗炎、抗菌作用，抗氧化作用，免疫增強(qiáng)作用和抗腫瘤作用，下面重點(diǎn)介紹其抗腫瘤作用:

抗腫瘤作用是冬凌草最重要的藥理作用，冬凌草中的許多二萜類成分對(duì)癌細(xì)胞都有抑制作用，其中最主要抗癌活性成分為冬凌草甲素(ORI)［20］和冬凌草乙素(PON)［21］，此外研究表明一些多糖類物質(zhì)也具有抗腫瘤活性.體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)冬凌草對(duì)20多種腫瘤細(xì)胞均有較強(qiáng)的抑制作用［6］.

2.1 冬凌草甲素的抗腫瘤作用

杜海爽等人運(yùn)用MTT比色法檢測(cè)冬凌草甲素對(duì)人乳腺癌Bcap－37細(xì)胞的增殖抑制作用，相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布，RT－PCR檢測(cè)P21、cdc2和cyclin B1 mRNA表達(dá)來測(cè)定冬凌草甲素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株Bcap－37細(xì)胞的生長抑制作用，發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素對(duì)Bcap－37細(xì)胞有顯著的增殖抑制作用，呈時(shí)間劑量依賴趨勢(shì)(P＜0.01);處理后的Bcap－37細(xì)胞發(fā)生明顯的形態(tài)改變;作用24 h后，Bcap－37細(xì)胞在G2/M期阻滯;冬凌草甲素作用 Bcap－37細(xì)胞后，P21 mRNA水平的表達(dá)增加，而cdc2、cyclin B1 mRNA 的表達(dá)降低(P ＜0.05)［22］.

宋芳等人采用MTY法檢測(cè)冬凌草甲素對(duì)人胰腺癌SWl990細(xì)胞增殖抑制作用、Hoechst33258染色法及透射電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡率、RT－PCR法檢測(cè)Survivin、P2l mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素對(duì)SWl990細(xì)胞具有明顯的生長抑制作用，熒光顯微鏡和透射電鏡下均見到典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變，流式分析出現(xiàn)亞G1峰并顯示G2/M期周期阻滯.RT－PCR分析結(jié)果顯示P21 mRNA表達(dá)增加，而survivin mRNA表達(dá)減少.冬凌草甲素通過誘導(dǎo)凋亡和G2/M期周期阻滯來抑制SWl990細(xì)胞生長［23］.

2.2 冬凌草乙素的抗腫瘤作用

劉曉丹［24］等人以不同濃度的冬凌草乙素(10～50μmol/L)作用于體外培養(yǎng)的人早幼粒白血病HL－60細(xì)胞24、48、72 h，應(yīng)用 MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長抑制率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，免疫印跡法檢測(cè)caspase－3及其裂解底物多聚(ADP－核糖)聚合酶(PARP)表達(dá)水平的變化，并對(duì)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P21、P16的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)冬凌草乙素可顯著抑制細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，呈現(xiàn)出明顯的量－效與時(shí)－效關(guān)系.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明細(xì)胞主要被阻滯在G0/G1期，50μmol/L的冬凌草乙素作用48 h后可以出現(xiàn)典型的亞G1期峰(細(xì)胞凋亡峰).免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示Mr32000的caspse－3酶被活化出現(xiàn)Mr20000亞單位片段，同時(shí)caspse－3的底物PARP被裂解出現(xiàn)Mr89000的亞單位片段，免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果還顯示50μmol/L的冬凌草乙素作用不同時(shí)間后，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P21及P16的表達(dá)水平逐漸升高.冬凌草乙素在體外對(duì)HL－60細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞周期阻滯作用，并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，通過上調(diào)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P21及P16的表達(dá)水平及激活caspse－3可能是冬凌草乙素引起HL－60細(xì)胞G0/G1阻滯及誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡的重要作用機(jī)制之一.

2.3 多糖成分的抗腫瘤作用

王一飛等人從冬凌草全草中分離得到冬凌草多糖，采用體、內(nèi)外抑制實(shí)驗(yàn)對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行研究，采用四甲基偶氮唑鹽MTT比色法觀察了其對(duì)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的影響.發(fā)現(xiàn)冬凌草多糖對(duì)艾氏腹水癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用與多糖濃度正相關(guān)，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中其對(duì)小鼠腫瘤的抑制率為35%(P＜0.05).并且發(fā)現(xiàn)其對(duì)刀豆素誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖以及脂多糖誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖均有促進(jìn)作用.可以看出冬凌草多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抑制作用，其抑瘤活性可能與其免疫增強(qiáng)作用有關(guān)［25］.

3 抗腫瘤作用機(jī)制

冬凌草甲素是中草藥冬凌草抗腫瘤的主要活性成分.研究發(fā)現(xiàn)，冬凌草甲素體外抗腫瘤的分子機(jī)制可能包括:阻遏細(xì)胞周期、下調(diào)端粒酶活性、抑制細(xì)胞膜鈉泵活性、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、逆轉(zhuǎn)多藥耐藥等，其中誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑方面的研究較多［26］.同時(shí)其對(duì)一種腫瘤細(xì)胞的抑制作用，可能是由一種或多種機(jī)制共同作用的結(jié)果［6］.

3.1 阻遏細(xì)胞周期

冬凌草甲素對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響因細(xì)胞株的不同而分別阻滯在不同的周期.

李瑞芳等人用免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定K562細(xì)胞中hTERT和C－myc蛋白的表達(dá);TRAP－PCR－ELISA法檢測(cè)了端粒酶活性變化;流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期各時(shí)相百分比來研究冬凌草甲素對(duì)K562細(xì)胞端粒酶活性及其細(xì)胞周期的影響，發(fā)現(xiàn)用3.43μmol/L ORI作用于 K562細(xì)胞48 h后，hTERT和C－myc蛋白的表達(dá)降低;在一定的濃度范圍內(nèi)，ORI可下調(diào)K562細(xì)胞端粒酶活性.同時(shí)細(xì)胞周期各時(shí)相分布發(fā)生變化，G0/G1期或G2/M期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，可見ORI下調(diào)K562細(xì)胞的端粒酶活性，可能與其細(xì)胞周期阻滯作用及抑制hTERT和 C －myc蛋白表達(dá)有關(guān)［27］.

曾蓉［28］等人利用 MTT比色法檢測(cè)冬凌草甲素對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響;碘化丙啶PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期;TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Westernblot技術(shù)檢測(cè)P65核蛋白水平.發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素能明顯抑制人骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞增殖，其抑制作用呈時(shí)間、劑量依賴性;能同時(shí)引起細(xì)胞G2/M細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡和p65核蛋白水平下降;吡咯烷二硫代氨甲酸鹽PDTC抑制核因子Kb(NF－kB)活性后進(jìn)一步促進(jìn)了冬凌草甲素所致的細(xì)胞G2/M細(xì)胞周期阻滯和凋亡.

3.2 抑制細(xì)胞膜鈉泵活性

張俊峰等人［21］將不同濃度的冬凌草甲素作用于體外培養(yǎng)的人肝癌BEL－7402細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長抑制率，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，Hoechst 33258熒光染色法和DNA凝膠電泳觀察細(xì)胞凋亡時(shí)的形態(tài)學(xué)變化，Western blotting觀察caspase－3、Bcl－2、Bax蛋白表達(dá)變化.結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素可顯著地抑制BEL－7402細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，并呈現(xiàn)出明顯的量－效與時(shí)－效關(guān)系.冬凌草甲素作用60 h后，在Hoechst 33258熒光染色圖片上可見核濃縮及核碎裂等典型的細(xì)胞凋亡特征，同時(shí) Westernblotting顯示32000的caspase－3酶原蛋白的激活，出現(xiàn)20 000的亞單位，凋亡過程中伴有Bcl－2蛋白表達(dá)的降低和Bax蛋白上調(diào).可見冬凌草甲素能通過降低Bcl－2蛋白表達(dá)和上調(diào)Bax蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，抑制BEL－7402細(xì)胞的生長.

魏鳳香等人［29］采用MTT法觀察不同濃度冬凌草甲素對(duì)人胰腺癌SWl900細(xì)胞增殖的抑制作用;流式細(xì)胞儀檢測(cè)冬凌草甲素作用于SWl900細(xì)胞后的凋亡情況;Western blot觀察Bcl－2和Bax表達(dá)變化.發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素對(duì)人胰腺癌SWl900細(xì)胞具有生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，同時(shí)抗凋亡蛋白Bcl－2表達(dá)的降低和促凋亡蛋白Bax上調(diào)是冬凌草甲素體外誘導(dǎo)胰腺癌SWl900細(xì)胞發(fā)生凋亡的重要作用機(jī)制之一.

劉琦等人［30］將不同濃度的 Ori(2.5、5、10、20、40μmol/L)作用于急性淋巴細(xì)胞白血病Molt－4細(xì)胞.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，電子顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡超微結(jié)構(gòu)的變化，Western blot方法分析凋亡相關(guān)蛋白及caspase－3表達(dá)的變化.發(fā)現(xiàn)Ori可抑制Molt－4細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)凋亡，并有時(shí)間－劑量依賴性，Ori可下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl－2的表達(dá)，上調(diào)促凋亡蛋白Bax和Bim表達(dá)以及活化caspase－3.結(jié)果表明Ori可誘導(dǎo)Molt－4細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)Bcl－2家族蛋白及活化caspase－3有關(guān).

3.3 抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

其作用機(jī)制可能是通過作用于凋亡調(diào)控因素，如降低Bc1－2的表達(dá)水平，激活 caspase途徑等誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡.

劉軍樓［31］等人以不同濃度的冬凌草甲素作用于體外培養(yǎng)的胰腺癌SWl990細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長抑制率，光學(xué)顯微鏡下觀察藥物對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響.發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素對(duì)SWl990細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，熒光顯微鏡見到典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變.冬凌草甲素給藥組早期細(xì)胞凋亡的百分率顯著高于未給藥組，晚期細(xì)胞凋亡和壞死細(xì)胞的百分率也顯著高于未給藥組.冬凌草甲素給藥組端粒酶hTERT mRNA的表達(dá)水平顯著高于未給藥組，可見冬凌草甲素可抑制SWl990細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能與藥物引起端粒酶hTERT mRNA的表達(dá)水平均降低有關(guān).

張春玲等人研究發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素能明顯誘導(dǎo)人黑色素瘤A375－S2細(xì)胞發(fā)生凋亡，其作用呈明顯的量效關(guān)系和時(shí)間依賴性.通過形態(tài)學(xué)觀察可看到凋亡小體，瓊脂糖凝膠電泳可看到凋亡典型的DNA梯帶;caspase－3的抑制劑能阻止caspase－3的活力升高;免疫印跡結(jié)果顯示冬凌草甲素作用A375－S2細(xì)胞12 h改變 Bax與 Bcl－xL蛋白的表達(dá)且發(fā)現(xiàn)caspase－3的底物PARP蛋白在12 h時(shí)被降解.結(jié)果表明冬凌草甲素誘導(dǎo)A375－S2細(xì)胞凋亡的作用是通過改變了Bax/Bcl－xL的表達(dá)比率和激活caspase－3而實(shí)現(xiàn)的［32］.

薛宏偉等人用不同濃度的冬凌草甲素處理膽囊癌GBC－SD細(xì)胞，MTT法檢測(cè)冬凌草甲素對(duì)GBC－SD細(xì)胞生長的抑制作用，通過倒置顯微鏡、掃描電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、熒光分光光度法觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡及半胱天冬酶caspase－3的活性，免疫組化法檢測(cè)核磷蛋白 P53、Bcl－2蛋白、Fas/Apo－l和 C－myc蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RuA能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，呈濃度依賴性，藥物作用24 h后，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中Bcl－2蛋白、P53、Fas/Apo－l和 C－myc蛋白的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，結(jié)果表明冬凌草甲素誘導(dǎo)GBC－SD細(xì)胞凋亡與Bcl－2蛋白、P53、Fas/Apo－l和 C－myc蛋白的表達(dá)有關(guān)［33］.

3.4 抗突變作用

盧笑叢等人通過大鼠肺及肝原代細(xì)胞非程序DNA合成(UDS)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素可顯著的抑制誘變的UDS水平，尤其是對(duì)鹽酸氮芥誘導(dǎo)肝原代細(xì)胞UDS的抑制作用更為明顯(P＜0.01)，抑制率可達(dá)73.8%，說明冬凌草甲素具有明顯的抗DNA突變作用.P450可激活多種物與核酸等大分子物質(zhì)結(jié)合而引起癌變，而冬凌草甲素可降低大鼠肝微粒體中細(xì)胞色素P450含量，而且其生成減少，并可抑制苯巴比妥及強(qiáng)致癌物質(zhì)的P450誘導(dǎo)作用，可見冬凌草甲素的抗突變機(jī)制可能是其在細(xì)胞外滅活了誘變劑的誘變活性，或者是其在細(xì)胞內(nèi)阻斷誘變劑對(duì)靶分子的作用，抑或是其增強(qiáng)DNA損傷后的修復(fù)功能［34］.

3.5 增強(qiáng)其他抗腫瘤藥物的療效

冬凌草甲素與化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用具有相互協(xié)調(diào)和互相促進(jìn)的作用，既能增強(qiáng)化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，又能降低其對(duì)正常細(xì)胞的損傷.

張松等人［35］用質(zhì)量濃度 0.75 g/L的刺五加皂苷與不同濃度的冬凌草甲素處理人食管癌Eca－109細(xì)胞，MTT法檢測(cè)生長抑制率，觀察細(xì)胞生長狀態(tài)的變化，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布及凋亡率.發(fā)現(xiàn)兩藥聯(lián)用時(shí)可明顯的抑制Eca－109細(xì)胞的生長，流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組S期細(xì)胞百分率明顯升高，G0～G1期細(xì)胞百分比明顯下降，細(xì)胞被阻滯于S期，細(xì)胞凋亡率升高.

張曉芬等人［36］研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)冬凌草甲素聯(lián)合化療藥物柔紅霉素時(shí)對(duì)人白血病jurkat細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用，提示冬凌草甲素本身可作為一種新型抗腫瘤藥物在抑制白血病細(xì)胞生長、誘導(dǎo)其凋亡的同時(shí)，還可以作為化療藥物的輔助用藥，增強(qiáng)化療藥物對(duì)白血病細(xì)胞的敏感性、降低用藥量及其副作用.

4 臨床應(yīng)用

臨床實(shí)驗(yàn)證明冬凌草對(duì)食管癌、賁門癌、肝癌、乳腺癌有一定療效，對(duì)化膿性扁桃體炎、急慢性咽喉炎及慢性氣管炎也有顯著的療效.

徐培元［37］采用前瞻性非隨機(jī)同期對(duì)照試驗(yàn)，比較中藥冬凌草液熱療和多次絲裂霉素膀胱內(nèi)灌注預(yù)防淺表性膀胱移行細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)的作用，將123例患者分為A、B兩，A組術(shù)后1～2個(gè)月開始給藥，冬凌草液熱療，每3個(gè)月1次，共1年;B組術(shù)后2周開始給藥，絲裂霉素膀胱內(nèi)多次灌注，每周1次，共6次，然后每個(gè)月1次，共1年.觀察術(shù)后復(fù)發(fā)率、無瘤間期和不良反應(yīng)發(fā)生的情況.隨訪10～45個(gè)月，平均(28.6±5.8)個(gè)月，A 組復(fù)發(fā)率5.0%，B組復(fù)發(fā)率14.3%，兩組復(fù)發(fā)率和Kaplan-Meier生存曲線比較，差異均有顯著性(P＜0.05).治療后發(fā)生膀胱炎、血尿、膀胱攣縮、尿道狹窄的概率，A 組分別為 28.3%、5.0%、1.7%、1.7%，B 組分別為25.4%、4.8%、0%、0%，兩組比較差異無顯著性(P＞0.05).所以說冬凌草液熱療對(duì)預(yù)防淺表性膀胱移行細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)的效果可靠.

車新平［38］用特制的熱療管及AQR 1A熱療儀探討一種治療腺性膀胱炎的新方法，以2∶1的冬凌草提取液對(duì)膀胱進(jìn)行灌注，期間使膀胱內(nèi)溫度保持在43～48℃，持續(xù)4～6 h，每月1次，第4次開始改為每3個(gè)月1次，共6次，92例中治愈71例，占77.1% ，好轉(zhuǎn)21例，占22.9，可見腺性膀胱炎是一種癌前病變，冬凌草液腔內(nèi)熱灌注是治療腺性膀胱炎較為有效的方法.

管建云［39］用冬凌草液和氟尿嘧啶進(jìn)行膀胱腔內(nèi)熱療，探討冬凌草膀胱腔內(nèi)熱療預(yù)防膀胱腫瘤復(fù)發(fā).膀胱內(nèi)溫度43～48℃持續(xù)6 h，每月1次，連續(xù)3次，之后改為3個(gè)月1次繼續(xù)做3次，1年后改為半年1次再做2次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬凌草液膀胱腔內(nèi)熱療能有效地預(yù)防膀胱腫瘤復(fù)發(fā)，且副作用少，具有高效低毒的特點(diǎn)，是很好的抗腫瘤藥.

5 結(jié)語

冬凌草對(duì)多種腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)較高的抑瘤作用，對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用具有選擇性且毒性低，臨床實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)白血病、食道癌，賁門癌、結(jié)腸癌、肝癌等多種癌癥均有一定的效果，與常用聯(lián)合化療藥物，PN(平陽霉素+消瘤芥)、順鉑，等聯(lián)合使用還可增強(qiáng)其作用.另外，冬凌草對(duì)急性化膿性扁挑體炎，急、慢性咽喉炎及慢性氣管炎等也具有良好的效果.冬凌草含有冬凌草甲素、冬凌草乙素和迷迭香酸3種主要活性成分，含量高達(dá)5‰，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他藥用植物活性成分的含量.冬凌草的抗菌作用主要與迷迭香酸有關(guān)，而抗腫瘤作用則主要與冬凌草甲素和冬凌草乙素有關(guān).由于冬凌草甲素的水溶性差，生物利用度低，制成普通制劑后其活性在不同程度上受到破壞，刺激性大，病人難以忍受，導(dǎo)致其新藥研發(fā)和臨床應(yīng)用受到極大的限制，因此，對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，提高水溶性，增強(qiáng)藥理活性，改善生物利用度，進(jìn)而開發(fā)新的劑型和制劑，是對(duì)冬凌草進(jìn)行進(jìn)一步開發(fā)研究的主要方向.

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