鄭 力

（沈陽市第一人民醫(yī)院，遼寧 沈陽 110041）

產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌和克雷伯菌的檢測和耐藥性監(jiān)測

鄭 力

（沈陽市第一人民醫(yī)院，遼寧 沈陽 110041）

目的監(jiān)測大腸埃希菌、克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）情況及耐藥狀況。方法對(duì)我院2010年1月至2011年6月送檢的尿、痰、分泌物標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，采用紙片協(xié)同法確證試驗(yàn)檢測產(chǎn)ESBLs菌株，然后以紙片擴(kuò)散法測定分離菌株對(duì)抗菌藥物的敏感性。結(jié)果大腸埃希菌236株，確證試驗(yàn)檢出產(chǎn)ESBLs菌66株，檢出率27.9%，肺炎克雷伯菌和產(chǎn)酸克雷伯菌58株，確證試驗(yàn)檢出產(chǎn)ESBLs菌22株，檢出率37.9%。產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和克雷伯菌對(duì)頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、環(huán)丙沙星等明顯耐藥，耐藥率達(dá)70%以上。結(jié)論大腸埃希菌和克雷伯菌ESBLs的檢出率高并呈多重耐藥性，臨床應(yīng)加強(qiáng)抗菌藥物的合理使用及管理。

產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；三代頭孢菌素；耐藥性

近年來，隨著超廣譜β-內(nèi)酰胺酶類抗生素特別是第3、4代頭孢菌素的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致革蘭陰性菌對(duì)其耐藥性增加，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）菌株的檢出率逐年上升[1-2]，其中最主要是大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。為更好地了解本院產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和克雷伯桿菌的檢出率和耐藥情況，控制產(chǎn)ESBLs菌株的傳播和流行，監(jiān)測我院2010年1月至2011年6月臨床標(biāo)本中分離的大腸埃希菌、克雷伯菌產(chǎn)ESBLs情況及耐藥狀況。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源：294株菌株為2010年1月至2011年6月沈陽市第一人民醫(yī)院住院部送檢的尿、痰、分泌物等標(biāo)本中分離鑒定的革蘭陰性桿菌，其中大腸埃希菌236株、肺炎克雷伯菌46株、產(chǎn)酸克雷伯菌12株。標(biāo)本的留取和保存按操作規(guī)程要求。

1.1.2 質(zhì)控菌株：使用標(biāo)準(zhǔn)株大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷菌ATCC700603進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)：使用杭州天和微生物有限公司生產(chǎn)的細(xì)菌鑒定管，及北京天壇生產(chǎn)的藥敏紙片進(jìn)行ESBLs菌的初步篩選試驗(yàn)。

1.2.2 ESBLs的確證試驗(yàn)：按NCCLS紙片法做確證試驗(yàn)，經(jīng)初步篩選后，可疑菌株用頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸做紙片法藥敏試驗(yàn)，35 ℃溫育16～18 h，藥物紙片中任何一個(gè)在加克拉維酸后，抑菌圈直徑增大值≥5 mm時(shí)，判定為產(chǎn)ESBLs菌株。結(jié)果判定按照NCCLS1999年的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 ESBLs菌株的檢出率

①294株菌株，經(jīng)初篩試驗(yàn)選出可疑產(chǎn)ESBLs菌株155株，其中大腸埃希菌117株，肺炎克雷伯菌及產(chǎn)酸克雷伯菌38株。質(zhì)控均在合格范圍內(nèi)。②294株菌株，經(jīng)確證試驗(yàn)檢出產(chǎn)ESBLs菌株共88株，占待檢菌的29.9%（88/294），占初篩陽性菌的56.8%（88/155）。其中大腸埃希菌66株，占待檢菌27.9%（66/236），占初篩陽性菌56.4%（66/117）；肺炎克雷伯菌及產(chǎn)酸克雷伯菌22株，占待檢菌的37.9%（22/58），占初篩陽性菌的57.9%（22/38），見表1。

表1 大腸埃希菌、克雷伯菌產(chǎn)ESBLs表型確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果

2.2 產(chǎn)ESBLs菌對(duì)頭孢菌素等抗菌藥物的耐藥率

產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和克雷伯桿菌對(duì)頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、環(huán)丙沙星耐藥率在70.0%以上，見表2、表3。

表2 產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)頭孢菌素等抗菌藥物的耐藥率（%）

表3 產(chǎn)ESBLs克雷伯菌對(duì)頭孢菌素等抗菌藥物的耐藥率（%）

3 討 論

近年隨著大量廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌耐藥性問題日益突出，其耐藥機(jī)制較為復(fù)雜，如耐藥酶的產(chǎn)生、細(xì)菌膜通透性的改變及胞質(zhì)內(nèi)藥物的泵出機(jī)制等，而質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLs是主要耐藥機(jī)制之一，是造成醫(yī)院感染和院外耐藥菌株傳播的主要原因[3-5]。某些革蘭陰性菌，尤其是大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌，它們通過獲得的ESBLs裂解青霉素和頭孢菌素類抗菌藥物的基本結(jié)構(gòu)——β內(nèi)酰胺環(huán)，使其喪失抗菌活性，導(dǎo)致臨床治療失敗。范愛民等[6]篩查大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情況，分析其與耐藥的關(guān)系，72株大腸埃希菌中，14株產(chǎn)AmpC酶，23株產(chǎn)ESBL，3株膜孔蛋白基因缺失；57株肺炎克雷伯菌中，13株產(chǎn)AmpC酶，19株產(chǎn)ESBL，5株膜孔蛋白缺失，膜孔蛋白缺失株4代頭孢均出現(xiàn)耐藥。結(jié)果說明大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對(duì)頭孢類抗生素的耐藥機(jī)制主要是產(chǎn)AmpC酶和ESBLs，同時(shí)膜孔蛋白基因的缺失會(huì)造成耐藥程度增高。

研究表明產(chǎn)ESBLs菌株不斷增多，耐藥菌株有逐年上升的趨勢，各地方產(chǎn)ESBLs菌株流行情況存在一定程度的差異。毛炎輝等[7]檢測720株大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌株，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶陽性率為37.9%；其中大腸埃希菌陽性率為42.1%；肺炎克雷伯菌陽性率為32.6%。汪秀紅[8]在兒科病房共收集痰和咽拭子標(biāo)本共1830份，分離出致病菌624份，檢出率為34.09%，其中肺炎克雷伯菌158株，大腸埃希菌178株，兩菌總共占致病菌總數(shù)的53.85%。本資料顯示出我院分離得到的大腸埃希菌和克雷伯菌的檢出率分別為27.9%（66/236）和37.9%（22/58），大腸埃希菌和克雷伯菌導(dǎo)致的醫(yī)院感染以泌尿道和呼吸道為主，臨床應(yīng)引起高度的重視。

近年來隨著抗生素的大量應(yīng)用及對(duì)抗菌藥物耐藥率的比較可以看出，多種抗菌藥物的耐藥率不斷上升，裴碧娜[9]研究驗(yàn)證了以上觀點(diǎn)，產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌對(duì)頭孢唑林、頭孢孟多、頭孢噻肟、哌拉西林耐藥率在90.0%以上，其中二者均對(duì)頭孢噻肟耐藥最為嚴(yán)重，耐藥率分別為97.3%、96.9%；對(duì)頭孢曲松、頭孢哌酮耐藥率在80.0%以上。本文調(diào)查通過比較產(chǎn)ESBLs菌株和非產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)常用抗菌藥物的耐藥率發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)ESBLs菌對(duì)頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、環(huán)丙沙星耐藥率在70.0%以上，對(duì)頭孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率較低；非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)頭孢噻吩、環(huán)丙沙星耐藥率較高。結(jié)果還可見克雷伯菌對(duì)阿米卡星的耐藥率達(dá)68.2%，而大腸埃希菌對(duì)阿米卡星有較高敏感度。在使用抗菌藥抗感染過程中必須同時(shí)進(jìn)行ESBLs的常規(guī)監(jiān)測，用以預(yù)防ESBLs的產(chǎn)生和播散[10]。

總之，本院大腸埃希菌和克雷伯菌ESBLs的檢出率高并呈多重耐藥性，應(yīng)及時(shí)掌握它們的臨床分布及耐藥特點(diǎn)，加強(qiáng)抗菌藥物的合理使用及管理，對(duì)有效控制產(chǎn)ESBLs菌株傳播和流行起到至關(guān)重要的作用。

[1] 崔巖,沈定霞,周貴民.產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶產(chǎn)酸克雷伯菌的醫(yī)院感染流行分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2002,25(5):277-280.

[2] 許宏濤,宣天芝,陶鳳榮,等.3種非發(fā)酵革蘭陰性桿菌5年的分離率及耐藥趨勢回顧[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2004,20(3):219-221.

[3] 沈定霞,羅燕萍,曹敬榮,等.肺炎克雷伯菌質(zhì)粒編碼的AmpC酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的表型和基因型分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2007,17(6):639-642.

[4] 馮福英,張亞彬,蘇麗萍,等.革蘭陰性桿菌菌種分布及耐藥性和分子流行病學(xué)研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2006,22(24):2915-2917.

[5] 胡云建,俞云松,張秀珍,等.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌的分子流行病學(xué)研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2004,14(3):241-244.

[6] 范愛民,田秀紅.大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制檢測[J].山西醫(yī)藥雜志,2011,40(9):877-879.

[7] 毛炎輝,陳慶煜.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌臨床分析及耐藥性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8(4):409-410.

[8] 汪秀紅.兒科住院病房336株肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌耐藥性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(1):71-72.

[9] 裴碧娜.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌的檢測和耐藥性分析[J].中國醫(yī)師進(jìn)修雜志,2013,36(6):43-44.

[10] 毛敏芝.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性監(jiān)測[J].吉林醫(yī)學(xué),2012,33(7):1411-1412.

Production Testing and Monitoring of Drug Resistance of Extended-spectrum β-lactamase Producing Escherichia Coli and Klebsiella

ZHENG Li
(The First People’s Hospital of Shenyang, Shenyang 110041, China)

ObjectiveMonitoring Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) cases and drug resistance..MethodsOur hospital from January 2010 to June 2011 inspection of urine, sputum, secretion specimens were routinely cultured using disc synergy confirmatory test to detect ESBLs producing strains, and then isolates the disk diffusion assay for antibacterial drugs sensitivity.ResultE.coli are 236 strains,117 of them may be produce ESBLs bacteria, 66 of them are definite , out-examining rate is 27.9%; Klebsiella pneumonia are 46 strains, acid-producing Klebsiella are 12 strains, 38 of them may be produce ESBLs, 22 of them are definite , out-examining ratte is 37.9%.ConcLusionEscherichia coli and Klebsiella ESBLs detection rate and showed multi-drug resistance, clinical management should be strengthened and the rational use of antimicrobial drugs.

Ρroducing ESBLs; 3rd generation cephorlosporins; Medicine tolerance

R978.1

B

1671-8194（2014）10-0010-02