高 穎， 吳 眉， 唐苾芯， 吳昆侖*， 范春香， 徐佩文， 吳偉泳， 楊 翎， 周小龍

（1.上海浦東新區(qū)公利醫(yī)院， 上海 200135； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)， 上海 201203； 3.上海藥谷藥業(yè)有限公司， 上海 201203）

吳氏消瘤散對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用

高 穎1， 吳 眉2， 唐苾芯1， 吳昆侖1*， 范春香1， 徐佩文1， 吳偉泳3， 楊 翎3， 周小龍3

（1.上海浦東新區(qū)公利醫(yī)院， 上海 200135； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)， 上海 201203； 3.上海藥谷藥業(yè)有限公司， 上海 201203）

目的 評價吳氏消瘤散 （太子參、白術(shù)、炙鱉甲、 山慈菇、 漏蘆、 土鱉蟲、 急性子、 炙龜甲、 薏苡仁、 枳實等）的抗腫瘤活性。 方法 建立 S180 肉瘤荷瘤小鼠模型、 B16 黑色素瘤荷瘤小鼠模型、 人肺腺癌 A549 荷瘤裸鼠模型， 并測定腫瘤質(zhì)量和腫瘤抑制率。 結(jié)果 吳氏消瘤散低、 中、 高劑量對鼠 S180 肉瘤細胞及人肺腺癌 A549 細胞， 中、 高劑量對小鼠 B16 黑色素瘤細胞的生長有一定抑制作用， 抑瘤率分別為 S180 肉瘤低劑量組為 29.07% ～39.74%、 中劑量組為33.99% ～41.01%、 高劑量組為43.21% ～51.56%； 人肺腺癌 A549 低劑量組為 25.17% ～33.69%、 中劑量組為 31.04%～38.84%、 高劑量組為 34.55% ～44.66%； B16 黑色素瘤中劑量組為 26.45% ～35.66%、 高劑量組為 39.59% ～67.21%。 結(jié)論 實驗表明， 吳氏消瘤散具有一定的抗腫瘤作用。

吳氏消瘤散； S180 肉瘤； B16 黑色素瘤； 人肺腺癌 A549； 腫瘤抑制

吳正翔教授系上海市名老中醫(yī)、曙光醫(yī)院中醫(yī)血液科專家，吳氏消瘤散是其根據(jù)多年臨床經(jīng)驗總結(jié)而成。本方由太子參、黃毛耳草、海芋、石見穿、石上柏、白術(shù)、鱉甲、山慈菇、墓頭回，漏蘆、土鱉蟲、急性子、龜甲、薏苡仁、枳實等十五味中藥組成，以健脾益氣、消癥散結(jié)為原則，選用太子參、白術(shù)等健脾益氣藥物，結(jié)合現(xiàn)代藥理確認具有抗腫瘤效果的中藥，在吳老長達幾十年的臨床實踐中，發(fā)現(xiàn)其對胃癌、肝癌、腸癌等多系統(tǒng)惡性腫瘤具有較好療效。因此，本課題利用小鼠移植瘤模型，對其抗腫瘤活性進行觀察。

1 實驗材料

1.1 動物及瘤株 SPF級 ICR 6 周齡小鼠， 體質(zhì)量 18 ～22 g， 雌雄不限 （同一批試驗中的小鼠性別相同）。 SPF級 C57BL/6 6 周齡小鼠， 體質(zhì)量 18 ～22 g， 雌雄不限 （同一批試驗中的小鼠性別相同）。SPF級 6 周齡 BALB/C裸鼠， 體質(zhì)量 18 ～22 g。 以上動物均由上海斯萊克實驗動物責任有限公司提供， 動物合格證號 SCXK （滬） 2007-0005。 S180肉瘤、 B16 黑色素瘤、人肺癌 A549 瘤株由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理評價研究中心傳代維持。

1.2 藥物及試劑 吳氏消瘤散 （采用制劑前浸膏），由上海藥谷藥業(yè)股份有限公司提供，批號Z20110627。 陽性對照藥物環(huán)磷酰胺購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司， 批號 11031921。 DMEM完全培養(yǎng)基， 內(nèi)含 10%新生牛血清 （GIBCO BRL公司）。

1.3 儀器 CO2培養(yǎng)箱、細胞收集器、 電子天平等。

2 實驗方法

2.1 吳氏消瘤散對 S180 肉瘤生長的抑制作用

2.1.1 荷瘤小鼠模型的建立 參照文獻［1］方法，用無菌空針抽取適量腹腔積液，用滅菌的 0.9%氯化鈉溶液按 1 ∶10 稀釋， 0.5 h 內(nèi) ICR小鼠每只右側(cè)腋窩皮下接種腫瘤細胞懸液 0.2 mL。

2.1.2 分組及給藥 小鼠于接種次日隨機分為溶劑 （0.5%CMCNa） 對照組 （n=20）、 陽性 （環(huán)磷酰胺） 對照組 （n=10） 及吳氏消瘤散低、 中、高劑量組 （每組 n=10）。 環(huán)磷酰胺組 0.03 g/kg隔天一次腹腔注射、共7次；吳氏消瘤散組依次給予12.5、 25、50 g生藥/kg每日 1 次靜脈注射、 連續(xù)14 d。

2.1.3 瘤質(zhì)量及抑瘤率 末次給藥 24 h 后將 ICR小鼠頸椎脫臼處死，迅速解剖取出瘤塊稱取質(zhì)量。以上實驗重復(fù)兩次。

按下述公式計算腫瘤抑制率：

腫瘤抑制率%=［（對照組平均瘤質(zhì)量 -給藥組平均瘤質(zhì)量） /對照組平均瘤質(zhì)量］ ×100%

2.2 吳氏消瘤散對 B16 黑色素瘤生長的抑制作用

2.2.1 荷瘤小鼠模型的建立 取經(jīng)液氮凍存的小鼠 B16 黑色素瘤細胞株， 復(fù)蘇后在 37 ℃、 5%CO2條件下進行傳代培養(yǎng)，將對數(shù)生長期的細胞用生理鹽水制成密度 2.5 ×105個/mL的細胞懸液， 按0.2 m L/鼠的體積， 經(jīng)尾靜脈注射。

2.2.2 分組及給藥 C57BL/6 小鼠于接種次日隨機分為溶劑 （0.5%CMCNa）對照組 （n=20）、陽性 （環(huán)磷酰胺） 對照組 （n=10） 及吳氏消瘤散低、 中、 高劑量組 （每組 n=10）。 環(huán)磷酰胺組0.03 g/kg隔天一次腹腔注射、 共 7 次； 吳氏消瘤散組依次給予 12.5、25、 50 g生藥/kg每日 1 次靜脈注射、 連續(xù) 14 d。

2.2.3 瘤質(zhì)量及抑瘤率 各組動物于 3 周后處死，稱取瘤塊質(zhì)量，并計數(shù)肺轉(zhuǎn)移的克隆數(shù)。以上實驗重復(fù)兩次。

按下述公式計算腫瘤抑制率：

腫瘤抑制率%=［（對照組平均瘤質(zhì)量 -給藥組平均瘤質(zhì)量） /對照組平均瘤質(zhì)量］ ×100%

2.3 吳氏消瘤散對人肺腺癌 A549 生長的抑制作用

2.3.1 荷瘤裸鼠模型的建立 取液氮凍存的人肺腺癌 A549 細胞株， 復(fù)蘇后于 37 ℃、 5%CO2條件下傳代培養(yǎng)，將對數(shù)生長期的細胞用生理鹽水制備成密度為 1 ×107個/mL的細胞懸液， 接種于裸鼠右腋皮下。無菌條件下取裸鼠體內(nèi)生長旺盛的第2代異種移植模型的腫瘤組織， 切割成1～2 mm3大小，每只裸鼠右腋皮下接種一塊。至移植瘤直徑約5 mm時隨機分組，按實驗設(shè)計方案給藥。

2.3.2 分組及給藥 動物隨機分為溶劑 （0.5% CMCNa） 對照組 （n=16）、 陽性 （環(huán)磷酰胺） 對照組 （n=8） 及吳氏消瘤散低、 中、 高劑量組（每組 n=8）。 環(huán)磷酰胺組0.03 g/kg隔天一次腹腔注射、 共 7 次； 吳氏消瘤散組依次給予 12.5、 25、50 g生藥/kg每日 1 次靜脈注射、 連續(xù) 14 d。

2.3.3 腫瘤抑制率及相對腫瘤增殖率 用游標卡尺測量各裸鼠腫瘤的短徑 （a）與長徑 （b）， 按公式 （a2×b） /2計算腫瘤體積， 并以此計算相對腫瘤體積 （VRT）： VRT=Vt/V0， V0為隨機分組時腫瘤體積， Vt為實驗結(jié)束處死動物時腫瘤體積。 三周后實驗結(jié)束時剖取瘤塊稱定質(zhì)量。以上實驗重復(fù)兩次。

按下述公式計算相對腫瘤增殖率及腫瘤抑制率：

相對 腫 瘤 增 殖 率%=（ 給 藥 組 VRT/對 照 組VRT） ×100%

腫瘤抑制率%=［（對照組平均瘤質(zhì)量 -給藥組平均瘤質(zhì)量） /對照組平均瘤質(zhì)量］ ×100%

3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

運用 SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理， 所得數(shù)據(jù)用表示， 各組數(shù)據(jù)做方差齊性檢驗和正態(tài)性檢驗，滿足條件者用方差分析做多組間比較，P＜0.05 為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

4 結(jié)果

4.1 吳氏消瘤散對 S180 肉瘤生長的抑制作用 吳氏消瘤散低、 中、 高劑量對 S180 肉瘤均具有抑制作用，荷瘤動物瘤質(zhì)量與溶劑對照組相比，具有極顯著性差異 （P＜0.01）。詳見表1。

表 1 吳氏消瘤散對 S180 肉瘤生長的抑制作用 （）Tab.1 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on S180 sarcoma （）

表 1 吳氏消瘤散對 S180 肉瘤生長的抑制作用 （）Tab.1 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on S180 sarcoma （）

注： 與溶劑對照組比較，**P＜0.01

組別 動物數(shù)/只 動物體質(zhì)量/g始/終 始 終 瘤質(zhì)量/g 抑瘤率/%溶劑對照組 20/20 20.5 27.4 2.94 ±0.49—陽性對照組 10/10 20.7 24.9 0.47 ±0.12** 84.01低劑量組 10/10 20.4 27.7 1.86 ±0.43** 36.73中劑量組 10/10 20.9 27.3 1.83 ±0.34** 37.76高劑量組 10/10 21.3 26.4 1.50 ±0.34** 48.98溶劑對照組 20/20 20.0 27.3 2.98 ±0.34 —陽性對照組 10/10 20.2 26.2 0.93 ±0.19** 68.77低劑量組 10/10 20.0 29.5 2.12 ±0.26** 29.07中劑量組 10/10 20.0 29.1 1.97 ±0.16** 33.99高劑量組 10/10 20.2 28.1 1.29 ±0.22** 43.21溶劑對照組 20/20 19.7 27.9 3.00 ±0.33 —陽性對照組 10/10 19.9 23.3 0.40 ±0.13** 86.66低劑量組 10/10 20.0 26.1 1.81 ±0.37** 39.74中劑量組 10/10 20.4 26.4 1.77 ±0.37** 41.01高劑量組 10/10 20.0 25.4 1.46 ±0.37**51.56

4.2 吳氏消瘤散對 B16 黑色素瘤生長的抑制作用吳氏消瘤散中、 高劑量對于小鼠 B16 黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移具有明顯抑制作用 （P＜0.05 或 P＜0.01），抑瘤 率 分 別 在 26.45% ～35.66%、39.59% ～67.21%之間。詳見表 2。

4.3 吳氏消瘤散對人肺腺癌 A549 生長的抑制作用 吳氏消瘤散低、中、高劑量均可抑制人肺腺癌A549 荷瘤裸鼠的相對腫瘤增殖率， 不同劑量的抑瘤 率 分 別 在 25.17% ～ 33.69%、31.04% ～38.84%、 34.55% ～44.66%之間。 詳見表 3。

5 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為，腫瘤是細胞病理極不均一的一類疾病，不同部位甚至同一部位的腫瘤，其生物學(xué)行為千差萬別。一部分腫瘤在發(fā)病初期即已發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移，治療頗為棘手。目前主張對其應(yīng)采取綜合治療、個體化治療，以提高治愈率、生存率，改善生存質(zhì)量。中醫(yī)藥是放化療、生物治療等綜合療法中的重要一環(huán)，具有誘導(dǎo)腫瘤細胞分化及凋亡、抑制腫瘤細胞生長及轉(zhuǎn)移、清除自由基、逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥、減輕化療藥物毒副作用及產(chǎn)生類干擾素等多方面的作用［2-4］。

惡性腫瘤屬于中醫(yī)學(xué) “積聚”、 “巖”、 “瘤”等范疇。 中醫(yī)學(xué)對本病的認識很早， 如 《靈樞·九針》中曰： “時者四時八風(fēng)客于經(jīng)絡(luò)之中， 為痼病者也”， 《靈樞·五變》曰：“余聞百疾之始期也，必生于風(fēng)雨寒暑，循毫毛而入腠理？或為留痹，或為積聚”，認為外感六淫之邪為惡性腫瘤發(fā)生的重要原因。在認識到六淫外邪致病的同時，更加強調(diào)人體正氣的決定作用， 如 《靈樞·百病始生》說：“壯人無積， 虛則有之”， 又 《醫(yī)宗必讀》 提出：“積之成也， 正氣不足， 而后邪氣踞之”， 《外證醫(yī)寨》 更明確指出 “正氣虛則成巖”。 在五臟之中，歷代醫(yī)家認為脾胃為后天之本，又為氣血生化之源，脾氣虧虛每致五臟虛損而百病叢生。如清代陳士鐸在 《辨證奇聞錄》 中指出： “脾位居中焦而運化精微，以灌注于四臟，是四臟之所仰望者，全在脾胃之氣。倘脾胃一傷，則四臟無所取資，脾胃病而四臟俱病矣”。 脾虛則不能推動血行而致血瘀；不能運化水濕而濕聚痰凝， “津液凝澀滲著不去，而成積矣”。因此，脾虛氣弱、氣滯血瘀、 痰凝濕聚等確為腫瘤形成的基本病機［5］。 近些年對腫瘤發(fā)病機理的探討日趨深入， 目前認為， “癌毒” 是惡性腫瘤的特異性病因，同時其作為病理產(chǎn)物可進一步加重對機 體的損 傷［6-8］。因 此， 對其治 療主張采取辨病與辨證相結(jié)合的治療模式，注重解決“癌毒” 這一重要因素。

表 2 吳氏消瘤散對小鼠 B16 黑色素瘤生長的抑制作用 （）Tab.2 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on B16 melanom a （）

表 2 吳氏消瘤散對小鼠 B16 黑色素瘤生長的抑制作用 （）Tab.2 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on B16 melanom a （）

注： 與溶劑對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 動物數(shù)/只 動物體質(zhì)量始/終/g始終肺克隆數(shù) 抑瘤率/%溶劑對照組 20/20 20.1 ±1.27 23.4 ±3.74 24.50 ±10.13—陽性對照組 10/10 20.2 ±1.11 21.3 ±4.08 4.9 ±2.69** 80.00低劑量組 10/10 19.8 ±1.21 23.4 ±3.89 17.4 ±2.63** 28.98中劑量組 10/10 20.1 ±1.26 24.2 ±2.57 16.7 ±3.66** 31.84高劑量組 10/10 20.1 ±1.14 24.3 ±4.05 14.80 ±2.49** 39.59溶劑對照組 20/20 20.0 ±1.23 24.9 ±4.32 24.40 ±10.03 —陽性對照組 10/10 20.3 ±1.25 21.3 ±3.46 1.6 ±1.26** 93.44低劑量組 10/10 20.2 ±1.15 21.4 ±3.16 16.5 ±5.99* 32.38中劑量組 10/10 20.1 ±1.28 24.3 ±2.75 15.7 ±4.00** 35.66高劑量組 10/10 20.3 ±1.37 25.1 ±1.59 8 ±4.81** 67.21溶劑對照組 20/20 20.3 ±1.22 23.7 ±4.77 23.25 ±10.11 —陽性對照組 10/10 20.2 ±1.19 23.5 ±4.83 2.2 ±1.75** 90.54低劑量組 10/10 19.5 ±0.94 24.4 ±4.70 18.2 ±6.30 21.72中劑量組 10/10 20.4 ±1.26 25.5 ±3.21 17.1 ±3.93* 26.45高劑量組 10/10 20.3 ±1.10 26.2 ±2.58 12.3 ±3.71**47.10

表 3 吳氏消瘤散對人肺腺癌 A549 生長的抑制作用 （）Tab.3 Inhibition effect of Wushi Xiaoliu Powder on human lung adenocarcinoma A549 （）

表 3 吳氏消瘤散對人肺腺癌 A549 生長的抑制作用 （）Tab.3 Inhibition effect of Wushi Xiaoliu Powder on human lung adenocarcinoma A549 （）

注： 與溶劑對照組比較，**P＜0.01

組別 動物數(shù)/只始 /終 V0/cm3 Vt/cm3 VRT（Vt/V0） 增殖率/% 瘤質(zhì)量/g 抑瘤率/相對腫瘤%溶劑對照組 16/16 0.106 ±0.013 1.378 ±0.416 13.27 — 1.157 ±0.29—陽性對照組 8/8 0.104 ±0.011 0.209 ±0.046** 2.12 15.95 0.199 ±0.04** 82.79低劑量組 8/8 0.104 ±0.010 0.826 ±0.267** 8.09 60.95 0.866 ±0.21** 25.17中劑量組 8/8 0.098 ±0.007 0.742 ±0.227** 7.68 57.88 0.798 ±0.24** 31.04高劑量組 8/8 0.103 ±0.009 0.770 ±0.178** 7.59 57.21 0.758 ±0.19** 34.55溶劑對照組 16/16 0.107 ±0.030 1.382 ±0.392 13.13 — 1.394 ±0.34 —陽性對照組 8/8 0.108 ±0.020 0.258 ±0.062** 2.52 19.20 0.252 ±0.10** 81.90低劑量組 8/8 0.110 ±0.018 0.942 ±0.268** 8.66 65.93 1.022 ±0.26** 26.73中劑量組 8/8 0.104 ±0.017 0.858 ±0.189** 8.51 64.79 0.853 ±0.16** 38.84高劑量組 8/8 0.105 ±0.022 0.798 ±0.226** 8.03 61.16 0.772 ±0.16** 44.66溶劑對照組 16/16 0.110 ±0.037 1.335 ±0.341 12.82 — 1.339 ±0.34 —陽性對照組 8/8 0.104 ±0.013 0.218 ±0.053** 2.11 16.47 0.209 ±0.04** 84.40低劑量組 8/8 0.112 ±0.019 0.909 ±0.304** 8.27 64.48 0.888 ±0.21** 33.69中劑量組 8/8 0.102 ±0.015 0.834 ±0.225** 8.17 63.69 0.875 ±0.13** 34.69高劑量組 8/8 0.102 ±0.021 0.720 ±0.147** 7.53 58.75 0.816 ±0.19**39.10

吳氏消瘤散以補氣健脾、活血化瘀消痰組方，同時加入山慈菇、石見穿等抗癌解毒藥物。藥理研究顯示，太子參、白術(shù)等補氣健脾之品對免疫系統(tǒng)具有廣泛調(diào)節(jié)作用，可增強網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能、 促進特異性抗體形成、 調(diào)節(jié) TNF-α、 IL-6 等分泌； 太子參［9］對人胃癌 MGC80-3、 肝癌 HepG2 和結(jié)腸癌RKO等多種腫瘤細胞增殖有抑制作用；白術(shù)［10］、 石見穿［11］可促進腫瘤細胞壞死、 凋亡， 白術(shù)揮發(fā)油還可通過抑制細胞外基質(zhì)降解而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移［12］； 山 慈菇［13］對 SMMC-7721 細胞黏 附和侵襲有明顯抑制作用。因此，該方充分體現(xiàn)了扶正是基本、抗癌是關(guān)鍵的治療思想，做到了在宏觀上符合傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，在微觀上符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論和中藥藥理學(xué)。本研究也證實，該方劑低、中、高劑量對 S180 肉瘤及人肺腺癌 A549， 中、高劑量對B16 黑色素瘤等多種腫瘤細胞的生長具有抑制作用。

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Antitumor effect of Wushi Xiaoliu Powder on tumor bearing m ice

GAO Ying1， WU Mei2， TANG Bi-xin1， WU Kun-lun1*， FAN Chun-xiang1， XU Pei-wen1，WUWei-yong3， YANG Ling3， ZHOU Xiao-long3
（1.Gongli Hospital of Pudong District， Shanghai200135， China； 2.Shanghai University of TCM， Shanghai 201203， China； 3.Shanghai Medicine Pharmaceutical Company Limited， Shanghai201203， China）

AIM To investigate the antitumor effect ofWushi Xiaoliu Powder（ Pseudostellariae Radix， Atractylodismacrocephalae Rhizoma， Trionycis Carapax， Cremastrae Pseudobulbus， Rhapontici Radix， Impatientis Semen， Testudinis Carapacis et Plastr， Coicis Semen， Aurantii Fructus immaturus， etc.） on tumor bearing mice. METHODS The antitumor effect was evaluated with S180 sarcoma bearing mice，B16 melanoma bearing mice and human lung adenocarcinoma A549 bearing nudemice bymeasuring the tumorweightand calculating the tumor inhibition rate.RESULTS Wushi Xiaoliu Powder atmoderate or high dose inhibited the tumor cell growth in all threemodels.The tumor inhibition rates of S180 sarcoma bearing mice were 29.07% ～39.74%at low dose，33.99% ～41.01%atmoderate dose and 43.21% ～51.56%at high dose.The inhibition rates of human lung adenocarcinoma A549 bearing nude mice were 25.17% ～33.69%at low dose， 31.04% ～38.84%at moderate dose， and 34.55% ～44.66%at high dose.The inhibition rates of B16 melanoma bearingmice were 26.45% ～35.66%atmoderate dose and 39.59% ～67.21%athigh dose.CONCLUSION Wushi Xiaoliu Powder has an-titumor effect.

Wushi Xiaoliu Powder； S180 sarcoma； B16 melanoma； human lung adenocarcinoma A549； antitumor effect

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）03-0446-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.002

2013-05-16

上海市浦東新區(qū)科技發(fā)展基金資助項目 （PKJ2012-Y52）

高 穎 （ 1971 —） ， 女， 博 士， 主 治 醫(yī) 師， 助 理 研 究 員， 研 究 方 向： 中 醫(yī) 內(nèi) 科 疾 病 的 診 斷 和 治 療。 E-mail： gaoying711517789800@sina.com

*通信作者： 吳昆侖 （1954—） ， 男， 碩士， 主任醫(yī)師， 研究方向： 中醫(yī)內(nèi)科疾病的診斷和治療。 E-mail： wkl418@163.com