孫鑫鑫 王超群 黃必飛 王艷 曾悅

胃癌中表皮生長因子受體2蛋白的表達及其臨床意義

孫鑫鑫 王超群 黃必飛 王艷 曾悅

目的 探討表皮生長因子受體2（HER2）蛋白在胃癌及癌旁胃組織中的表達，分析其與胃癌臨床病理特征的關系。方法用免疫組織化學EnVision法檢測579例胃癌組織和65例癌旁胃組織中HER2蛋白表達并進行比較。結果胃癌和癌旁胃組織中HER2過表達率分別為10．54%（61/579）和0（0/65），兩者HER2過表達率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．01）。腸型胃癌HER2蛋白過表達率（17．90%）明顯高于彌漫型胃癌（4．18%）和混合型胃癌（8．57%），均P＜0．01；高-中分化胃癌HER2過表達率（14．91%）明顯高于低分化胃癌（6．58%），P＜0．01。HER2蛋白表達與胃癌臨床分期、淋巴結轉移及漿膜浸潤無關（均P＞0．05）。結論胃癌中HER2表達增強，其高表達與腸型胃癌和高-中分化胃癌密切相關。腸型胃癌和高-中分化胃癌中HER2高表達的機制有待進一步探索。

表皮生長因子受體2 胃癌 免疫組化 蛋白表達

胃癌是我國乃至全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率在惡性腫瘤中均位于前列[1]。目前，胃癌的治療以手術切除加化療為主，但腫瘤的復發(fā)和轉移仍然導致患者生存率低下[2]。因此，尋找與胃癌發(fā)生、發(fā)展相關的生物標記物，并對其進行干預，對提高患者生存質量和生存率有著重要意義。目前，雖然有較多關于胃癌中表皮生長因子受體2（HER2）蛋白表達狀態(tài)的研究，但由于研究人群和評分標準的差異，導致各研究報道的HER2蛋白陽性率（4%～53%，中位數18%）[2]有較大的偏差。本研究采用Hofmann等[3]建立的胃癌中HER2蛋白表達的評分標準，應用免疫組化方法檢測579例胃癌組織和65例癌旁胃組織中HER2蛋白表達，以求進一步研究并驗證HER2蛋白在胃癌中的表達及其與臨床病理意義。

1 對象和方法

1.1 對象 2006-01—2013-03我院手術切除的胃腺癌患者579例，男394例，女185例；年齡32～86歲，中位年齡67歲。Lauren分型：腸型257例，彌漫型287例，混合型35例；組織學分級：高-中分化腺癌275例，低分化腺癌304例；臨床分期：Ⅰ/Ⅱ期298例，Ⅲ/Ⅳ期281例；有淋巴結轉移340例，無淋巴結轉移239例；侵及漿膜者391例，未侵及漿膜者188例。患者術前均未做化療、免疫及放射治療。其中65例另取癌旁胃組織。

1.2 試劑 兔抗人HER2蛋白單克隆抗體、EnVision二步法試劑盒購自基因科技（上海）有限公司，均為丹麥Dako公司產品。

1.3 方法 所有組織均以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，分別做HE及免疫組化染色。免疫組化實驗采用檸檬酸鹽緩沖液高壓熱修復，EnVision二步法染色，DAB/H2O2顯色，蘇木素復染。用已知陽性片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照，具體步驟按說明書進行。染色結果由兩位病理醫(yī)師閱片核實診斷。

1.4 結果判斷 HER2蛋白染色主要定位于細胞膜，其結果判定采用Hofmann等[3]建立的評分標準，0（陰性）：無著色或＜10%細胞有細胞膜著色；1+（陰性）：＞10%細胞有弱的、不連續(xù)的細胞膜著色，需要高倍物鏡（×40）觀察染色；2+（意義不明確的）：＞10%細胞有弱到中等的、完整的或底外側的細胞膜著色；3+（陽性）：＞10%細胞有中到強的、完整的或底外側的細胞膜著色，只需要低倍物鏡（×2.5～5）即可觀察染色。本研究中以0～1+為HER2蛋白表達陰性，2+～3+為HER2蛋白過表達。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，應用χ2檢驗對胃癌和癌旁胃組織中HER2蛋白表達、胃癌中HER2蛋白表達與臨床病理特征的關系進行分析。

2 結果

2.1 HER2蛋白在胃癌及癌旁胃組織中的表達 HER2蛋白在胃癌中的過表達率為10.54%（61/579，其中3+45例，2+16例），在癌旁胃組織中的過表達率為0（0/65），胃癌組織與癌旁胃組織HER2蛋白過表達率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）（圖1）。

圖1 HER2蛋白免疫組化染色[A：胃癌組織HER2蛋白表達3+（×400）；B：癌旁胃組織HER2蛋白表達陰性（×200）]

2.2 胃癌組織HER2蛋白表達與患者臨床病理特征的關系 見表1。

由表1可見，HER2蛋白過表達率與胃癌Lauren分型及組織學分化程度相關（均P＜0.01），腸型胃癌HER2蛋白過表達率明顯高于彌漫型胃癌和混合型胃癌；高-中分化胃癌HER2蛋白過表達率明顯高于低分化胃癌（P＜0.01）。HER2蛋白表達與胃癌臨床分期、淋巴結轉移及漿膜浸潤無關（均P＞0.05）。

表1 胃癌組織HER2蛋白表達與患者臨床病理特征的關系

3 討論

HER2是表皮生長因子受體（EGFR）家族重要成員，編碼一個相對分子質量1.85×105的具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白受體（又稱p185）。目前有研究認為，HER2自身磷酸化后激活下游PI3K/AKT和RAF/ERK1/ 2兩條主要的信號通路，在細胞生長、增殖、分化以及腫瘤細胞侵襲轉移過程中起了重要作用[4-5]。

HER2基因擴增和蛋白過表達存在于20%～30%的乳腺浸潤性導管癌患者，且與患者預后不良相關[6]，針對HER2的分子靶向藥物Herceptin使部分HER2蛋白過表達乳腺癌患者受益。因此，關于各種惡性腫瘤中HER2表達成為研究的熱點。已有研究表明，HER2基因擴增和蛋白過表達不僅存在于乳腺癌中，還見于卵巢癌、子宮內膜癌、結腸癌、食管癌等[7]。

目前，雖然有較多關于胃癌中HER2蛋白表達狀態(tài)的研究，但各研究報道的HER2蛋白陽性率從4%～53%不等[2]，存在較大偏差。近年來，有4項研究報道中國胃癌患者HER2蛋白陽性率（3+）從5.8%～9.8%不等[8-11]，他們均采用了Hofmann等[3]建立的評分標準。本課題檢測了579例胃癌HER2蛋白表達，發(fā)現45例為3+（7.77%），16例2+（2.76%），總體HER2蛋白過表達率為10.54%（61/579），在文獻報道的范圍內。與癌旁胃組織比較，胃癌組織中HER2蛋白表達明顯增強，為HER2蛋白陽性胃癌患者抗HER2分子靶向治療提供了理論基礎。我們還發(fā)現，腸型胃癌HER2蛋白過表達率明顯高于彌漫型和混合型胃癌，高-中分化胃癌HER2蛋白過表達率明顯高于低分化胃癌，這些結果與多數國、內外研究報道相符[11-12]，提示HER2蛋白過表達與特定類型癌細胞亞群相關。因高-中分化胃癌多數是腸型胃癌，低分化胃癌多數是彌漫型胃癌，所以上述結果是一致的。然而，亦有文獻報道HER2蛋白在腸型胃癌和低分化胃癌中高表達，而在彌漫型胃癌和高-中分化胃癌中低表達[13]。多數研究報道HER2蛋白過表達與患者預后不良相關，而與臨床分期、淋巴結轉移及腫瘤浸潤深度等臨床病理特征無關[2，11-12]。

腸型胃癌及高-中分化胃癌中HER2蛋白高表達的機制，有學者認為腸型胃癌和彌漫型胃癌的發(fā)生是受不同的信號傳導途徑影響，不同組織病理學特征的胃癌之間存在不同模式的遺傳學改變[12]。彌漫型胃癌結合乳腺浸潤性小葉癌HER2蛋白表達狀態(tài)分析，可以找到一些共同點，即這兩種腫瘤均HER2蛋白低表達，且E-cadherin表達缺失，而腸型胃癌和乳腺浸潤性導管癌則正好相反。因此，我們提出疑問，HER2蛋白表達是否與E-cadherin通路相關？我們將在下一步研究中繼續(xù)驗證這個問題。

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Expression of HER2 in gastric carcinoma and its clinicopathological significance

Objective To investigate the expression of epidermal growth factor receptor 2(HER2)protein in gastric carcinoma and its clinicopathological significance．MethodsThe expression of HER2 was detected with immunohistochemical EnVision method in 579 specimens of gastric carcinoma and 65 specimens of adjacent gastric tissue．ResultsThe positive expression rates of HER2 protein in gastric carcinomas and adjacent gastric tissues were 10．54%(61/579)and 0(0/65),respectively(P＜0．01)．The HER2 expression rate in intestinal type gastric carcinomas(17．90%)was significantly higher than that in diffuse type gastric carcinomas(4．18%)and mixed type gastric carcinomas(8．57%)(P＜0．01)．The expression rate of HER2 in well and moderately-differentiated gastric carcinomas was significantly higher(14．91%)than that in poorly differentiated ones(6．58%)(P＜0．01)．No association was observed between HER2 expression and clinical stage,lymph nodes metastasis and serosal invasion(P＞0．05)．ConclusionHER2 expression is up-regulated in gastric carcinoma,particularly in intestinal type gastric carcinomas and well and moderately-differentiated gastric carcinomas．

HER2 Gastric carcinoma Immunohistochemistry Protein expression

2013-08-12）

（本文編輯：沈昱平）

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目（2012KYB230）

322100 東陽市人民醫(yī)院病理科（孫鑫鑫、王超群、黃必飛、曾悅），腫瘤內科（王艷）

王超群，E-mail:chaoqunw869@sohu.com