臺(tái)凡力 陳民傭

（廣東湛江農(nóng)墾畜牧有限公司，廣東湛江 524022）

2013年廣東省湛江市規(guī)模化豬場(chǎng)PRRSV免疫抗體的監(jiān)測(cè)結(jié)果

臺(tái)凡力 陳民傭

（廣東湛江農(nóng)墾畜牧有限公司，廣東湛江 524022）

為了解廣東省湛江市規(guī)模化豬場(chǎng)中豬繁殖與呼吸綜合征的防控狀況，2013年對(duì)廣東省湛江市8個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征病毒免疫抗體的監(jiān)測(cè)。共采集樣品血清802份，采用ELISA的方法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，2013年4月、8月和12月豬繁殖與呼吸綜合征病毒免疫抗體的合格率分別為88.85%、79.48%和81.75%，抗體離散度分別是39.70%、49.60%和67.95%；全年免疫抗體合格率為83.29%?？梢?jiàn)2013年廣東省湛江市規(guī)?；i場(chǎng)中豬繁殖與呼吸綜合征病毒的免疫抗體合格率雖高，但疫苗免疫效果不理想，防控形勢(shì)比較嚴(yán)峻。

豬繁殖與呼吸綜合征；抗體監(jiān)測(cè)；廣東湛江；抗體離散度

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的一種繁殖障礙和呼吸道炎癥的傳染病[1]。其臨床特征為厭食、發(fā)熱；母豬繁殖障礙，懷孕期發(fā)生大批流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；仔豬與育成豬發(fā)生嚴(yán)重的呼吸道癥狀及高死亡率。

PRRSV主要侵害豬的巨噬細(xì)胞，極易感染和損傷免疫器官，致使機(jī)體免疫功能降低，使患病豬極易繼發(fā)各種疾病。本病1987年首先在美國(guó)被發(fā)現(xiàn)，1995年侵入我國(guó)，1996-1998年在我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)出現(xiàn)流產(chǎn)風(fēng)暴，2001-2002年在我國(guó)南方地區(qū)再次流行，給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)災(zāi)難性的打擊。PRRS被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為B類傳染病，我國(guó)將其列為二類傳染病。目前對(duì)該病的控制主要是通過(guò)接種疫苗，因此對(duì)該病抗體的監(jiān)控已經(jīng)成為規(guī)?；i場(chǎng)控制該病的重要措施。為了了解廣東省湛江市PRRS的防控狀況，筆者于2013年對(duì)廣東省湛江市8個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)802份血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，為該市有效控制PRRS提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清來(lái)源

2013年4月、8月和12月，分明從廣東省湛江市各縣市的8個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)采集共802份血清。要求樣品必須來(lái)源于經(jīng)產(chǎn)母豬。

1.1.2 試劑

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)試劑盒（PRRS X3 Ab），美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)。

1.1.3 儀器設(shè)備

MK3酶標(biāo)儀、MK2自動(dòng)洗板儀、MILLI-Q-A超純水機(jī)、單道微量移液器、多道微量移液器、渦旋混合儀等。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集

采取隨機(jī)抽樣的方法，每個(gè)豬場(chǎng)一次采血不低于30份。血樣采集后及時(shí)進(jìn)行常規(guī)血清分離，冷凍備檢。

1.2.2 抗體測(cè)定

取10μL血清，利用豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)上的操作程序進(jìn)行操作，在630 nm處測(cè)定樣本以及對(duì)照品的吸光度值（OD630）。只有陰性對(duì)照的平均OD630小于等于0.150，陽(yáng)性對(duì)照的平均值減去陰性對(duì)照的平均值大于或等于0.150時(shí)，該檢測(cè)結(jié)果才有效。如果被檢樣品阻斷率大于或等于40%，該樣本被判為抗體陽(yáng)性，即有PRRSV抗體存在；如果被檢樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣本就被判為抗體陰性，即無(wú)PRRSV抗體存在；如果被檢樣品的阻斷率在30%～40%之間，就應(yīng)在數(shù)日后再對(duì)該豬只個(gè)體進(jìn)行重測(cè)，如果重測(cè)結(jié)果仍可疑，就使用血清中和試驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)。

1.2.3 離散度分析

離散度（CV）采用變異系數(shù)表示。如果被檢豬場(chǎng)PRRSV抗體的離散度小于或等于40%，則認(rèn)為該豬場(chǎng)PRRSV抗體水平比較整齊，免疫效果比較確實(shí)。反之，如果該場(chǎng)的離散度大于40%，則認(rèn)為該豬場(chǎng)的PRRSV抗體水平參差不齊，免疫效果不理想。

2 結(jié)果與分析

2013年廣東省湛江市PRRSV免疫抗體的監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，2013年4月監(jiān)測(cè)的PRRSV免疫抗體總體水平較好，免疫合格率高達(dá)88.85%。在參與調(diào)查的8個(gè)場(chǎng)中，其中6個(gè)場(chǎng)的免疫抗體合格率都達(dá)到90.00%以上。8個(gè)場(chǎng)的抗體離散度為39.70%，小于40%。通過(guò)以上數(shù)據(jù)可以判斷，這一時(shí)期廣東省湛江市PRRS的免疫工作比較到位，PRRSV抗體水平比較整齊，免疫效果確實(shí)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)PRRSV抗體阻斷率S/P≥3.0的樣品。在這一時(shí)期的監(jiān)測(cè)中，監(jiān)測(cè)結(jié)果最理想的是1號(hào)和8號(hào)規(guī)?；i場(chǎng)，這兩個(gè)豬場(chǎng)的免疫抗體合格率都達(dá)到了100%，并且抗體離散度很低，分別為21.49%和19.24%；最不理想的是3號(hào)規(guī)?；i場(chǎng)，免疫抗體合格率只有50%，同時(shí)抗體離散度非常高，達(dá)到92.22%。

2013年8月監(jiān)測(cè)的PRRSV免疫抗體總體水平一般，免疫合格率高達(dá)79.48%。在參與調(diào)查的8個(gè)場(chǎng)中，其中3個(gè)場(chǎng)的免疫抗體合格率都達(dá)到90.00%以上。8個(gè)場(chǎng)的抗體離散度為49.60%，大于40%。通過(guò)以上數(shù)據(jù)可以判斷，這一時(shí)期廣東省湛江市PRRS的免疫工作成果不夠理想，PRRSV抗體水平不整齊，免疫效果不確實(shí)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)PRRSV抗體阻斷率S/P≥3.0的樣品。在這一時(shí)期的監(jiān)測(cè)中，監(jiān)測(cè)結(jié)果最理想的是2號(hào)規(guī)模化豬場(chǎng)，這個(gè)場(chǎng)的免疫抗體合格率達(dá)到了100%，并且抗體離散度很低，為19.94%。在2013年4月監(jiān)測(cè)的最理想的兩個(gè)場(chǎng)中，1號(hào)和8號(hào)規(guī)?；i場(chǎng)的抗體水平下降都非常明顯。特別是1號(hào)場(chǎng)，免疫抗體合格率由4月的100 %下降到53.33%。3號(hào)場(chǎng)抗體合格率略有回升，但是仍然不理想，免疫抗體合格率為66.67%，抗體離散度略有下降，為63.22%。

表 1 2013 年廣東省湛江市PRRSV免疫抗體的監(jiān)測(cè)結(jié)果

2013年12月監(jiān)測(cè)的PRRSV免疫抗體總體水平一般，免疫合格率高達(dá)81.75%。在參與調(diào)查的8個(gè)場(chǎng)中，其中3個(gè)場(chǎng)的免疫抗體合格率都達(dá)到90.00%以上。8個(gè)場(chǎng)的抗體離散度為67.95%，大于40%。通過(guò)以上數(shù)據(jù)可以判斷，這一時(shí)期廣東省湛江市PRRS的免疫工作不夠理想，PRRSV抗體不整齊，免疫效果不確實(shí)。6個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)都發(fā)現(xiàn)了PRRS抗體阻斷率S/P≥3.0的樣品。在實(shí)際生產(chǎn)中，現(xiàn)有的診斷試劑盒還不能區(qū)分野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，但一般認(rèn)為現(xiàn)有的疫苗干預(yù)所能產(chǎn)生抗體的阻斷率都小于3.0。因此當(dāng)樣品的阻斷率超過(guò)3.0時(shí)，我們將其判為野毒感染。在這一時(shí)期的監(jiān)測(cè)中，參與調(diào)查的8個(gè)場(chǎng)中有6個(gè)場(chǎng)疑似有野毒活動(dòng)，所以各個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果都不理想。1號(hào)規(guī)?；i場(chǎng)免疫抗體合格率雖然達(dá)到了100%，并且抗體離散度很低，僅為20.14%，但是其S/P≥3.0的數(shù)量達(dá)到了25頭，占抽樣比率的78.13%，因此判斷這次檢測(cè)到的抗體為野毒和疫苗毒共同產(chǎn)生的抗體。另外2號(hào)場(chǎng)、6號(hào)場(chǎng)的情況和1號(hào)場(chǎng)類似，免疫抗體合格率雖高，但是有野毒存在。5號(hào)場(chǎng)和8號(hào)場(chǎng)雖然沒(méi)有出現(xiàn)抗體阻斷率S/P≥3.0的情況，但是其抗體合格率和離散度都是一般水平。

2013年全年監(jiān)測(cè)的PRRSV免疫抗體總體水平良好，免疫抗體合格率高達(dá)83.29%。但是，免疫抗體合格率雖高，但抗體離散度不理想，平均值高達(dá)52.42%，高于40%，說(shuō)明在2013年廣東省湛江市對(duì)PRRS免疫抗體的人為干預(yù)效果不理想，PRRS的防控形勢(shì)比較嚴(yán)峻。

3 討論

3.1 抗體依賴性增強(qiáng)作用

PRRS感染的一個(gè)重要特點(diǎn)就是抗體依賴性增強(qiáng)作用（Antibody dependent enhancement，ADE），即無(wú)論在體內(nèi)或者體外的試驗(yàn)條件下，PRRSV抗體的存在可介導(dǎo)和加強(qiáng)感染，而不是保護(hù)[2]。因此，單單通過(guò)血清抗體來(lái)評(píng)估PRRSV疫苗的免疫效果不科學(xué)，但可以通過(guò)檢測(cè)PRRSV N蛋白的抗體水平來(lái)監(jiān)測(cè)群體中PRRSV的活躍程度。

例如參與調(diào)查的1號(hào)場(chǎng)，一年當(dāng)中抗體變化非常明顯，4月時(shí)免疫抗體合格率為100%，8月時(shí)則下降到53.3%，12月時(shí)又重新回到100%，離散度由21.49%上升到69.04%，又重新下降到20.14%。如果該場(chǎng)從4—8月都沒(méi)有接種疫苗，基本就可以斷定1號(hào)場(chǎng)內(nèi)PRRS野毒非?；钴S，隨時(shí)都可能暴發(fā)。更細(xì)致地又可以分為兩個(gè)階段，如果在7、8月都沒(méi)有接種疫苗，則8月的監(jiān)測(cè)結(jié)果說(shuō)明疑似有野毒干擾，或者疫苗效價(jià)衰減比較迅速。如果在8—11月沒(méi)有接種疫苗，則從12月的監(jiān)測(cè)結(jié)果看基本可以斷定有野毒干擾。

再如2號(hào)場(chǎng)，一年當(dāng)中免疫抗體合格率變化不大，變化幅度在10%以內(nèi)，但是抗體離散度變化非常明顯，從49.90%下降至19.14%，又重新升至59.04%。如果在4—8月之間接種過(guò)疫苗，說(shuō)明這次接種疫苗的質(zhì)量非常好，對(duì)PRRSV的干擾作用非常有效；如果這期間沒(méi)有接種過(guò)疫苗，基本可以斷定是野毒的干擾。如果在8—12月之間接種過(guò)疫苗，說(shuō)明疫苗質(zhì)量非常差，甚至有散毒的可能；如果沒(méi)有接種過(guò)疫苗，則說(shuō)明疫苗的效價(jià)衰減比較迅速。因此對(duì)于PRRSV來(lái)說(shuō)，全年的監(jiān)控非常重要。

3.2 監(jiān)測(cè)方法

目前臨床上監(jiān)測(cè)PRRSV抗體多采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的方法。國(guó)內(nèi)外很多生物制品廠家都生產(chǎn)檢測(cè)PRRSV抗體的試劑盒，但是質(zhì)量參差不齊。錢(qián)歡和唐利[2]對(duì)市場(chǎng)一些常見(jiàn)的試劑盒做了對(duì)比試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)美國(guó)IDXX公司生產(chǎn)的PRRSV抗體檢測(cè)試劑盒的重復(fù)性和一致性比較高，適用于發(fā)病診斷和疫病預(yù)警。馬超峰等[3]也對(duì)市場(chǎng)一些常見(jiàn)的試劑盒做了對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果是美國(guó)IDXX公司生產(chǎn)的PRRSV抗體檢測(cè)試劑盒具有較高的敏感性和特異性，可以作為檢測(cè)PRRSV的首選試劑盒。IDEXX的PRRSV抗體ELISA檢測(cè)試劑盒是用重組的PRRSV抗原包被微量反應(yīng)板，利用ELISA原理來(lái)檢測(cè)豬血清或血漿中的PRRSV抗體。該試劑盒具有較高的重現(xiàn)性、敏感性和特異性，檢測(cè)結(jié)果可靠。所以筆者認(rèn)為，本試驗(yàn)對(duì)廣東省湛江市規(guī)模化豬場(chǎng)的檢測(cè)結(jié)果比較可靠。

3.3 樣品來(lái)源

之所以只選擇經(jīng)產(chǎn)母豬作為樣品來(lái)源，是因?yàn)橹饕紤]了以下幾種因素。

首先是公豬?，F(xiàn)在的規(guī)?；i場(chǎng)基本采用人工授精，公豬集中在公豬站，種豬場(chǎng)內(nèi)飼養(yǎng)的數(shù)量極少。同時(shí)由于公豬很精貴，飼養(yǎng)管理和免疫工作做得比較到位。一般情況下，公豬的免疫抗體水平要高于母豬群的免疫抗體平均水平，因此公豬的免疫抗體水平不能代表一個(gè)豬場(chǎng)的免疫水平。

其次是產(chǎn)房仔豬、保育豬和育肥豬。現(xiàn)在規(guī)?；i場(chǎng)都采用多點(diǎn)式飼養(yǎng)、仔豬單相流動(dòng)、全進(jìn)全出的管理模式，一般情況下育肥豬上市前在種豬場(chǎng)只能免疫PRRSV疫苗1～2次。從免疫學(xué)的角度考慮，經(jīng)過(guò)1～2次免疫后的動(dòng)物機(jī)體還處于基礎(chǔ)免疫狀態(tài)，免疫抗體還不能達(dá)到理想的水平。同時(shí)很少有豬場(chǎng)監(jiān)測(cè)母源抗體，并根據(jù)母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律來(lái)制定免疫程序，多數(shù)都是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)給仔豬在15日齡左右首次免疫。在這個(gè)時(shí)期免疫，母源抗體還處在一個(gè)比較高的水平，因此免疫抗體受母源抗體的干擾也會(huì)比較嚴(yán)重。而經(jīng)產(chǎn)母豬一般都經(jīng)過(guò)3次以上的疫苗接種，受母源抗體的影響相對(duì)較小。綜上所述，產(chǎn)房仔豬、保育豬和育肥豬的PRRSV抗體水平要低于經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平，因此它們的免疫抗體水平也不能代表豬場(chǎng)的免疫抗體水平。

最后是后備豬?，F(xiàn)在的規(guī)?；i場(chǎng)在引進(jìn)后備豬的時(shí)候，都有一個(gè)嚴(yán)格隔離馴化的程序，在隔離馴化的過(guò)程中，一般都會(huì)加打兩次PRRS疫苗，并且做嚴(yán)格的檢疫，直到引進(jìn)后備豬的抗體水平達(dá)標(biāo)，才讓它們混群[4]，因此后備豬的PRRSV免疫抗體水平會(huì)略高于經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫抗體水平，所以也不能代表豬場(chǎng)的實(shí)際免疫狀態(tài)。只有經(jīng)產(chǎn)母豬，它們一般都在豬場(chǎng)呆3～5年，每年免疫2～4次，它們的PRRS免疫抗體水平才可以真實(shí)反映出一個(gè)豬場(chǎng)的免疫水平。

3.4 樣品數(shù)量

現(xiàn)在規(guī)模化豬場(chǎng)母豬存欄相對(duì)比較多，一般都超過(guò)300頭以上，按照常用的10%～20%的采樣標(biāo)準(zhǔn)來(lái)采樣，所需樣品數(shù)量比較大。筆者選擇采用生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法來(lái)確定樣本含量。根據(jù)PRRSV抗體檢測(cè)試劑盒的特異性和敏感性以及檢測(cè)結(jié)果的估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算，PRRSV免疫抗體檢測(cè)需要采集的樣本數(shù)量大約為30份[5]，該數(shù)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以代表一個(gè)豬場(chǎng)的免疫水平，所以要求所有參與調(diào)研的規(guī)模化豬場(chǎng)采集35份左右的血清，最少有效血清數(shù)量不能低于30份。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)中抽檢的樣品可以代表和反映廣東省湛江市規(guī)?；i場(chǎng)PRRS疫苗免疫的真實(shí)情況。

3.5 疫苗選擇

目前市場(chǎng)上PRRS疫苗的生產(chǎn)廠家比較多，生產(chǎn)規(guī)格也很多。每一種規(guī)格的疫苗、每一個(gè)廠家的疫苗都有自己的市場(chǎng)。免疫PRRS疫苗后能不能真正地、有效地干預(yù)到豬體對(duì)PRRSV的反應(yīng)才是關(guān)鍵。本試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)廣東省湛江市2013年P(guān)RRSV免疫抗體的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同規(guī)格、不同廠家的疫苗所產(chǎn)生的免疫效果相差甚遠(yuǎn)。因此，建議大家一定要慎重選擇疫苗。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，目前廣東省湛江市的規(guī)?；i場(chǎng)在設(shè)計(jì)PRRS免疫程序時(shí)，大多是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或者根據(jù)專家教授的推薦來(lái)設(shè)計(jì)，有的豬場(chǎng)甚至很多年都沒(méi)有變過(guò)免疫程序。隨著疫苗的生產(chǎn)工藝不斷在改進(jìn)，疫苗免疫效果不斷在進(jìn)步，因此對(duì)免疫程序也要做出相應(yīng)的調(diào)整。所以，建議有條件的豬場(chǎng)最好借助實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段，根據(jù)抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，來(lái)選擇適合自己豬場(chǎng)的PRRS疫苗，完善適合本豬場(chǎng)的免疫程序。

[1]宜長(zhǎng)和.豬病學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2010: 146-172.

[2]錢(qián)歡,唐利.3種檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的ELISA試劑盒的比較[J].豬業(yè)科學(xué),2012(10):42-44.

[3]馬超鋒,孫何云,張軼,等.幾種檢測(cè)豬豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體ELSA診斷試劑盒的對(duì)比試驗(yàn)[J].豬業(yè)科學(xué),2013(9): 82-83.

[4]蘆惟本.后備種豬同化技術(shù)[J].養(yǎng)豬,2013(4):113-114.

[5]劉建營(yíng),曹長(zhǎng)仁,謝水華,等.豬血液的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析技術(shù)[J].豬業(yè)科學(xué),2012(10):36-39.

S858.28

B

1673-4645(2014)09-0040-04

2014-05-05

臺(tái)凡力（1976-），男，山東菏澤人，碩士，中級(jí)獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和綜合防控工作