趙云生，毛福英，姚海花，白長財(cái)，趙啟鵬

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；3.汾陽市畜牧技術(shù)推廣站，山西 汾陽 032200)

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麻黃多糖發(fā)汗、止咳與利尿活性研究

趙云生1,2，毛福英1,2，姚?；?，白長財(cái)1,2，趙啟鵬1,2

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；3.汾陽市畜牧技術(shù)推廣站，山西 汾陽 032200)

目的：研究麻黃多糖的發(fā)汗、止咳與利尿活性。方法：采用氨水引咳法、著色法與濾紙法檢測比較未給藥的對照組小白鼠和給予麻黃多糖的實(shí)驗(yàn)組小白鼠的鎮(zhèn)咳率、發(fā)汗點(diǎn)數(shù)和排尿量。結(jié)果：高劑量(132mg/kg)與低劑量麻黃多糖(66mg/kg)的發(fā)汗、止咳作用均顯著優(yōu)于蒸餾水，但利尿作用低于蒸餾水。結(jié)論：麻黃多糖具有發(fā)汗與止咳功效，是麻黃的重要有效成分。

麻黃多糖；發(fā)汗；止咳；利尿

麻黃(Herba Ephedrae)藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草書籍均有收載，在中醫(yī)藥中占有重要地位。2010年版中國藥典收載的麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf.、中麻黃EphedraintermediaSchrenk et C.A.Mey.或木賊麻黃EphedraequisetinaBge.的干燥草質(zhì)莖，具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫的功效[1]。商品麻黃多是草麻黃、木賊麻黃和中麻黃的混合品，以草麻黃產(chǎn)量最高[2]。通常認(rèn)為麻黃堿、揮發(fā)油等為麻黃的主要有效成分，近年研究發(fā)現(xiàn)麻黃多糖具有免疫調(diào)節(jié)[3]、清除氧自由基[4]、降血脂[5]等多種藥理活性。本研究針對藥典收載麻黃的臨床功效，對麻黃多糖的發(fā)汗、止咳與利尿作用進(jìn)行研究，以期為麻黃的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究作一補(bǔ)充。

1 材料與試劑

1.1 藥材

麻黃：購自寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院門診部，由筆者鑒定為草麻黃(EphedrasinicaStapf.)的干燥草質(zhì)莖。

1.2 動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級昆明小鼠，雌雄各半，(20.0±2.0)g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號：SCXK(寧)2011-001。

1.3 試劑

磷酸可待因(香港澳美制藥廠)、毛果蕓香堿(西安永屹生物技術(shù)有限公司，Sigma-S0130)、蓖麻油(湖北科田藥業(yè)有限公司)。濃氨水、無水乙醇、碘、淀粉均為分析純。

2 樣品制備

2.1 麻黃多糖制備

取麻黃飲片200g，過60目藥典篩，以95%乙醇1 000mL超聲脫脂40min，舍棄乙醇脫脂液。將剩余殘?jiān)? 000mL水超聲提取3次，每次60min，合并水提液，濃縮至小體積后加無水乙醇，使乙醇濃度至85%，醇沉24h抽濾，沉淀減壓干燥，得麻黃多糖樣品。精密稱取60℃干燥至恒重的麻黃多糖1 320mg，加水溶解后定容至100mL容量瓶，備用[6-7]。

2.2 和田-高垣氏試劑制備

A液：取2g碘溶于100mL無水乙醇中，備用。

B液：取可溶性淀粉50g、蓖麻油100mL，混合均勻，備用。

3 分組與給藥方法

3.1 氨水引咳法[8]

選取健康昆明小鼠40只，按體重隨機(jī)均分為四組：①蒸餾水陰性對照組：給予等體積蒸餾水0.1mL/10g；②磷酸可待因陽性對照組：腹腔注射可待因30mg/kg；③麻黃多糖低劑量組：給予麻黃多糖66mg/kg；④麻黃多糖高劑量組：給予麻黃多糖132mg/kg。

小鼠灌胃給藥1h或腹腔注射可待因0.5h后，放入含100mL濃氨水浸濕棉花的250mL廣口瓶內(nèi)，關(guān)閉瓶蓋lmin，打開瓶蓋，取出小鼠2min，共3min，觀察小鼠表現(xiàn)，以腹肌收縮，同時(shí)張開大口，有時(shí)可有咳聲為指標(biāo)，記為咳嗽1次。記錄小鼠咳嗽潛伏期(放入廣口瓶至第1次咳嗽的時(shí)間)、2min內(nèi)咳嗽次數(shù)，若2min內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽動(dòng)作者為有咳嗽，否則算作無咳嗽。 觀察小鼠咳嗽潛伏期和2min咳嗽次數(shù)，計(jì)算鎮(zhèn)咳率。

鎮(zhèn)咳率(%) = (用藥組咳嗽潛伏期-蒸餾水陰性對照組咳嗽潛伏期) / 蒸餾水陰性對照組咳嗽潛伏期×100%。

3.2 著色法發(fā)汗[9]

取體重相近的40只小鼠，首先觀察其足底部有無污物，如有污物，用棉簽蘸取無水乙醇輕輕擦洗干凈。將其隨機(jī)分為四組，每組10只，雌雄各半：①蒸餾水陰性對照組：給予等體積蒸餾水0.1mL/10g；②毛果蕓香堿組陽性對照組：腹腔注射毛果蕓香堿溶液35mg/kg；③麻黃多糖低劑量組：給予麻黃多糖66mg/kg；④麻黃多糖高劑量組：給予麻黃多糖132mg/kg。

給藥后分別置于小鼠固定器內(nèi)，仰位固定，暴露雙后肢。給藥30min后，用干棉簽輕輕拭干40只小鼠足趾部原有和掙扎所致的汗液。然后分別于每只小鼠足趾部皮膚涂上和田-高垣氏試劑A液，待充分干燥后，再薄薄涂上B液，然后用放大鏡仔細(xì)觀察著色點(diǎn)顏色(深紫色著色點(diǎn))及汗點(diǎn)出現(xiàn)的時(shí)間、顏色和數(shù)量，待汗點(diǎn)出現(xiàn)后，連續(xù)觀察30min，每10min記錄1次。

3.3 濾紙法利尿?qū)嶒?yàn)[10]

選取6～8周齡健康昆明小鼠30只，禁食不禁水8～12h，稱體重后(實(shí)驗(yàn)前體重)，隨機(jī)分成三組：①空白對照組：腹腔注射生理鹽水0.1mL/10g；②麻黃多糖低劑量組：腹腔注射麻黃多糖66mg/kg；③麻黃多糖高劑量組：腹腔注射麻黃多糖132mg/kg。

實(shí)驗(yàn)前先輕壓每只小鼠下腹排盡余尿，各用lmL生理鹽水灌胃作水負(fù)荷，給藥后分別將三組小鼠罩在鋪有數(shù)層濾紙，直徑為240mm的干燥大燒杯中(濾紙置于燒杯底部支架上，支架下放置約100mL水以減少尿液揮發(fā))，燒杯口蓋以鐵網(wǎng)罩，每小時(shí)換1次濾紙，換濾紙后立即稱量出濾紙?jiān)黾又亓孔鳛樾∈笈拍蛄?，共觀察3h。

3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Excel軟件整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用SPSS15.0軟件計(jì)算平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 麻黃多糖止咳作用

與蒸餾水陰性對照組相比，磷酸可待因陽性對照組、麻黃多糖低劑量組、麻黃多糖高劑量組小鼠咳嗽率均明顯降低。麻黃多糖高劑量組小鼠鎮(zhèn)咳率顯著高于低劑量組，且二者具有量效關(guān)系，但麻黃多糖低或高劑量組小鼠鎮(zhèn)咳率均低于本實(shí)驗(yàn)劑量的磷酸可待因組。

與蒸餾水陰性對照組相比，磷酸可待因陽性對照組、麻黃多糖低或高劑量組小鼠咳嗽次數(shù)均明顯減少，咳嗽潛伏期變長；麻黃多糖高劑量組與磷酸可待因陽性對照組小鼠咳嗽次數(shù)相差不大，但其咳嗽潛伏期顯著短于可待因陽性對照組；麻黃多糖高劑量組小鼠咳嗽潛伏期長于低劑量組，咳嗽次數(shù)少于低劑量組，說明麻黃多糖具有減少小鼠咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 麻黃多糖止咳實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.2 麻黃多糖發(fā)汗作用

與蒸餾水陰性對照組相比，毛果蕓香堿陽性對照組、麻黃多糖低劑量組、麻黃多糖高劑量組小鼠發(fā)汗能力明顯增強(qiáng)；麻黃多糖高劑量組小鼠的發(fā)汗作用強(qiáng)于麻黃多糖低劑量組，且二者具有量效關(guān)系，但麻黃多糖低或高劑量組小鼠的發(fā)汗能力均不如本實(shí)驗(yàn)劑量的毛果蕓香堿組強(qiáng)。采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示，與蒸餾水陰性對照組相比，麻黃多糖對小鼠的發(fā)汗作用達(dá)極顯著水平(P<0.01)，說明麻黃中除生物堿外，多糖亦具有發(fā)汗功效，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 麻黃多糖對小鼠足趾部汗液分泌影響

注：與對照組比較，**P<0.01。

4.3 麻黃多糖利尿作用

麻黃多糖高、低劑量組小鼠3h內(nèi)排尿總量均明顯低于蒸餾水陰性對照組，說明麻黃多糖利尿作用不強(qiáng)；麻黃多糖高、低劑量組相比，高劑量組小鼠的利尿作用明顯強(qiáng)于低劑量組，但仍顯著低于陰性對照組。對不同處理方式小鼠的平均排尿量進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明，低劑量組小鼠的3h排尿量顯著低于對照組(P<0.05)，而高劑量組小鼠3h排尿量與對照組無顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 麻黃多糖利尿作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：與對照組比較，*P<0.05。

5 討論

與蒸餾水相比，低、高劑量麻黃多糖均具有發(fā)汗與止咳的功效，說明麻黃多糖與麻黃中其它藥效物質(zhì)一樣，具有藥材麻黃的部分功效。

本研究中麻黃多糖低、高劑量組與陽性對照組相比，止咳與發(fā)汗活性均較低，這種現(xiàn)象與磷酸可待因與毛果蕓香堿的給藥劑量有關(guān)，其對于麻黃多糖的鎮(zhèn)咳、發(fā)汗功效評價(jià)并無影響。本實(shí)驗(yàn)中毛果蕓香堿溶液的配制濃度不能過大，否則會(huì)導(dǎo)致小鼠過量發(fā)汗而死。

本研究表明，麻黃多糖利尿作用不強(qiáng)，說明麻黃利水消腫的功效可能是由其它藥效物質(zhì)作用的結(jié)果。造成麻黃多糖組小鼠排尿量不及陰性對照組的原因也可能為麻黃多糖的發(fā)汗作用。在試驗(yàn)過程中，麻黃多糖低、高劑量組小鼠均表現(xiàn)出明顯的發(fā)汗作用，小鼠體內(nèi)水分可能更多地從汗腺分泌，而不是經(jīng)尿道排泄。綜上所述，麻黃多糖具有明顯發(fā)汗與止咳功效，但利尿作用不顯著，是麻黃的重要有效成分。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Study on Diaphoresis, Antitussive and Diuresis of Polysaccharide fromEphedrasinicaStapf.

Zhao Yunsheng1,2, Mao Fuying1,2, Yao Haihua3, Bai Changcai1,2, Zhao Qipeng1,2

(1.Ningxia Medical University Pharmacy College , Ningxia 750004,China;2.Ningxia Research Center of Modern Hui Medicine Engineering and Technology, Yinchuan 750004,China;3.Animal Husbandry Technical Advice Station of Fenyang County, Fenyang 032200,China)

Objective:Study on the diaphoresis, antitussive and diuresis activity of polysaccharide fromEphedrasinicaStapf. Methods:Ammonia water induced cough model, mice colouring method, and filter paper method were used to detect the cough relieving rate, sweating colouring points and urine output. Results:The polysaccharide high (132mg/kg) or low (66mg/kg) dose group had higher activity of diaphoresis and antitussive than the distilled water negative control group, but had lower diuresis activity than the distilled water negative control group. Conclusion:The polysaccharide has the activity of diaphoresis and antitussive, and is a part of effective components ofEphedrasinicaStapf.

EphedrasinicaStapf.; Polysaccharides; Diaphoresis; Antitussive; Diuresis

2014-05-08

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81160505)

趙云生(1974-)，男，博士，寧夏醫(yī)科大學(xué)副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)與資源。

R285.5

A

1673-2197(2014)16-0011-03