凌 云

(如東縣人民醫(yī)院 藥劑科,江蘇 如東 226400)

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HPLC法測定不同批號復(fù)方玄駒膠囊中淫羊藿苷含量

凌 云

(如東縣人民醫(yī)院 藥劑科,江蘇 如東 226400)

目的：建立反相高效液相色譜法測定不同批次復(fù)方玄駒膠囊中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液(58∶42)，流速為1.0mL/min，檢測波長為270nm，進(jìn)樣量為20μL，柱溫為30℃。結(jié)果：淫羊藿苷在進(jìn)樣量0.4995～4.995μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于3%；平均加樣回收率為98.2%，RSD為2.19%(n=6)。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)所建立的方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于復(fù)方玄駒膠囊的質(zhì)量控制。

復(fù)方玄駒膠囊；高效液相色譜法；淫羊藿苷；含量測定

復(fù)方玄駒膠囊為施強(qiáng)藥業(yè)集團(tuán)生產(chǎn)的國家級保護(hù)藥，主要由玄駒、淫羊藿、枸杞子和蛇床子等四味藥材組成，具有溫腎、壯陽、益精、祛風(fēng)濕之功效[1]。臨床主要用于治療腎陽虛型陽痿、陽痿不舉、舉而不堅(jiān)、少腹陰器發(fā)涼、精冷滑泄、神疲乏力、腰膝酸軟、性欲低下以及免疫調(diào)節(jié)和抗炎等[2-4]。淫羊藿苷反應(yīng)該制劑質(zhì)量是否達(dá)標(biāo)，筆者建立了復(fù)方玄駒膠囊中淫羊藿苷的HPLC測定方法，并測定了8個(gè)不同批次的制劑，以期建立該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料

Waters2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)；Waters 2996 PAD檢測器(美國Waters公司)；Empower化學(xué)工作站；色譜柱：BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm，5μm)；十萬分之一電子天平、百萬分之一電子天平(METTLER TOLEDOAT，瑞士)；BUCHI R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(步琪公司，瑞士)；KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器公司，昆山)。

復(fù)方玄駒膠囊(施強(qiáng)藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號見表1)；淫羊藿苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110737-200415)；甲醇：色譜純(江蘇漢邦科技有限公司)；水：重蒸餾水(Milli-Q純水器)；磷酸：分析純(國藥集團(tuán)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇—0.1%磷酸水溶液(58∶42)；流速：1.0mL/min；柱溫：30 ℃；紫外檢測波長270nm；進(jìn)樣量為20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液制備 復(fù)方玄駒膠囊取內(nèi)容物研細(xì)，精密稱定0.3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25mL，稱定重量，置水浴上加熱回流提取30min，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚振搖提取3次，每次20mL，棄去乙醚液，水層用醋酸乙酯—水飽和正丁醇(2∶1)的混合溶液振搖提取5次(20mL、20mL、15mL、15mL、15mL)，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，并定量轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對照品8mg，置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1mL中含淫羊藿苷32μg)對照品儲(chǔ)備液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下對照品溶液、供試品溶液適量，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜，詳見圖1。在該色譜條件下，淫羊藿苷的保留時(shí)間為34.171。

圖1 淫羊藿苷高效液相色譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下淫羊藿苷對照品溶液0.049 95mg·mL-1、0.099 9mg·mL-1、0.199 8mg·mL-1、0.299 7mg·mL-1、0.399 6mg·mL-1、0.499 5mg·mL-1各10μL注入液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得淫羊藿苷回歸方程為：Y=2×106X-45 228，r =0.999 5。表明淫羊藿苷在0.499 5～4.995μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取淫羊藿苷對照品溶液(0.111 2mg·mL-1)適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，結(jié)果顯示淫羊藿苷的峰面積RSD為2.4%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下同一批號供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、24h，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，依法進(jìn)行測定。結(jié)果淫羊藿苷RSD為1.96%，表明供試品溶液在24h內(nèi)質(zhì)量基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批號樣品6份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果顯示淫羊藿苷RSD為2.49%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的復(fù)方玄駒膠囊，共6份，約0.6g，分別加入對應(yīng)含量淫羊藿苷對照品，按供試品制備方法制得供試品溶液，注入液相色譜儀，計(jì)算回收率，淫羊藿苷平均回收率為98.2%，RSD為2.19%。

2.9 樣品含量測定

精密稱取8個(gè)不同批號的樣品，按“2.2.1”項(xiàng)方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算8批樣品中淫羊藿苷含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果 (mg/g , n=8)

3 討論

3.1 提取方法的選擇

本試驗(yàn)分別比較了索氏提取、水浴加熱回流提取、超聲提取三種不同提取方法。同等條件下，通過HPLC圖譜驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)水浴加熱回流提取效果較好。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)考察了30%乙醇、50%乙醇、乙醇提取，經(jīng)HPLC檢測，表明用乙醇提取效果較好；因此本實(shí)驗(yàn)選擇乙醇作為提取溶劑，進(jìn)一步對不同提取時(shí)間進(jìn)行考察，通過HPLC驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)乙醇加熱回流30min效果最好。

3.2 流動(dòng)相的選擇

本試驗(yàn)分別考察了甲醇—水、乙腈—水、甲醇—0.1%磷酸水、乙腈—0.1%磷酸水4個(gè)溶劑系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇—0.1%磷酸水作為流動(dòng)相分離效果較好。

3.3 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)，比較了兩種不同的色譜柱，分別為SYMEMETRYTM-C18(150mm×3.9mm,5μm)和BDS HYPERSIL-C18(250nm×4.6nm，5μm)，結(jié)果表明，前者不能使酚酸類成分與樣品中其它成分達(dá)到理想分離效果，后者分離效果較好。

3.4 質(zhì)量控制建議

通過本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，淫羊藿在本制劑中占有重要的地位，通過測定淫羊藿苷成分來控制其制劑質(zhì)量具有一定的代表性，但同時(shí)隨著制劑評價(jià)體系的逐漸完善，還需增加某些特征性成分作為評價(jià)該制劑質(zhì)量的依據(jù)。

[1] 王欣，蘇晶石，楊可為，等.復(fù)方玄駒膠囊治療前列腺炎療效觀察[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21(10)：2045-2047.

[2] 黃旭元，翁一鳴，陳斌，等. 復(fù)方玄駒膠囊治療脾腎陽虛少、弱精子癥的臨床研究[J].中國男科學(xué)雜志， 2010，24(4)：54-57.

[3] 賈偉，薛京，王永新，等.復(fù)方玄駒膠囊免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用的研究[J].中草藥，2003，34(2)：154-156.

[4] 張訊，梁季鴻，梁世坤，等.復(fù)方玄駒膠囊聯(lián)合他莫西芬治療特發(fā)性少精子癥的臨床研究[J].中華男科學(xué)雜志，2012，18(7)：661-664.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang by HPLC

Ling Yun

(Department of Pharmacy ,Rudong Country People’s Hospital , Jiangsu 226400, China )

Objective:To develop a method for the content determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang . Methods:HPLC method was adopted. The determination was performed on BDS HYPERSIL-C18column with mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid-water (58∶42), at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 270 nm, and the sample size was 20μL. The column temperature was 30℃. Results:Results:The linear range were 0.4995～4.995μg for Icariin, respectively RSD of precision , stability , and reproducibility test were lower than 3%. The average recoveries were 98.2% (RSD=2.19%,n=6).Conclusion:The method is simple , accurate , reproducible and suitable for the content determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang.

Fufang Xuanju Jiaonang ; HPLC ; Icariin ; Content Determination

2014-06-15

凌云(1970-)，女，江蘇省如東縣人民醫(yī)院藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥劑學(xué)。

R284.2

A

1673-2197(2014)21-0008-02