林德銳 皇培剛 羅文瓊 常晗蕾

摘要：為了評(píng)價(jià)豬瘟和偽狂犬活疫苗的免疫效果，采用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）和偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）對(duì)35～40日齡豬瘟和偽狂犬母源抗體陰性的健康仔豬分為4組，分別進(jìn)行單獨(dú)注射、分點(diǎn)同時(shí)注射與混合注射，觀察各組注射后的副反應(yīng)，并對(duì)不同時(shí)期的抗體用ELISA試驗(yàn)檢測血清抗體效價(jià)來評(píng)價(jià)其免疫效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，兩種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射和混合注射，相互間的干擾很小，兩種疫苗同時(shí)注射不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，原因可能是兩疫苗共同刺激動(dòng)物的免疫器官后有提高動(dòng)物產(chǎn)生免疫抗體的作用[1]。

關(guān)鍵詞：豬瘟；偽狂犬；注射；免疫效果；疫苗豬瘟和豬偽狂犬病是目前危害養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2],特別是近幾年，豬偽狂犬病在國內(nèi)有擴(kuò)大流行的勢頭，一旦豬瘟和偽狂犬病同時(shí)爆發(fā)，將給豬場帶來毀滅性的打擊。本試驗(yàn)用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）、偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）單獨(dú)注射、分點(diǎn)同時(shí)注射和混合注射健康易感仔豬，了解抗體產(chǎn)生的時(shí)間和抗體水平，從而評(píng)價(jià)幾種免疫方式的免疫效果差異。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1 疫苗及稀釋液

豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）：云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：2013021，病毒效價(jià)：18 000 RID/頭份，生產(chǎn)日期：2013年7月15日。

偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）：云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：2013001，病毒效價(jià)：106.0TCID50/頭份，生產(chǎn)日期：2013年4月19日。

豬用活疫苗專用稀釋液：云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20130516，生產(chǎn)日期：2013年5月16日。

1.1.2試驗(yàn)地點(diǎn)

昆明市嵩明楊林青石山豬場，豬場疫病預(yù)防控制較好，具備試驗(yàn)條件。

1.1.3試驗(yàn)動(dòng)物

從90頭35～40日齡仔豬中用豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒（IDEXX）及偽狂犬抗體ELISA檢測試劑盒（IDEXX）檢測，選擇出52頭豬瘟母源抗體、偽狂犬母源抗體均為陰性的健康仔豬。

1.1.4診斷試劑

豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒、豬偽狂犬ELISA抗體檢測試劑盒購自北京愛德士生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)分組及接種

隨機(jī)分為4個(gè)組，每組13頭豬，頸部肌肉注射，分組及免疫劑量如下：

豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）試驗(yàn)組：按1頭份/mL濃度稀釋疫苗給每頭仔豬注射豬瘟活疫苗1 mL；

偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）試驗(yàn)組：按1 頭份/mL濃度稀釋疫苗給每頭仔豬注射偽狂犬活疫苗1 mL；

豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）+ 偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）分點(diǎn)同時(shí)注射試驗(yàn)組：按1頭份/mL濃度分別稀釋兩種疫苗，在該組每頭仔豬的不同部位分別注射豬瘟活疫苗和偽狂犬活疫苗1 mL；

豬瘟活疫苗（ST）+ 偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）混合注射試驗(yàn)組：按照0.5頭份/mL濃度混合稀釋豬瘟和偽狂犬活疫苗，給每頭仔豬注射2 mL。

1.2.2二次免疫

首次免疫接種后35 d，以2頭份/mL稀釋疫苗，對(duì)每個(gè)試驗(yàn)組的6頭(一半)豬按一免方法進(jìn)行二免（二免免疫一半主要是想了解豬只在二免的情況下抗體的變化，并與一免進(jìn)行對(duì)比；計(jì)算數(shù)值時(shí)，因二免每組免疫了6只仔豬，一免的豬只按剩下的7只計(jì)算，二免按6只計(jì)算）。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1免疫副反應(yīng)

免疫后的仔豬進(jìn)行免疫接種副反應(yīng)觀察，觀察注射2 d內(nèi)均無過敏反應(yīng)、嘔吐、抽搐、休克等癥狀。

2.2 免疫效果檢測

在首次免疫接種后28 d、42 d、56 d、70 d，進(jìn)行采血分離血清，分別采用IDEXX公司抗體檢測試劑盒及相應(yīng)方法分別檢測豬瘟免疫抗體及偽狂犬病免疫抗體滴度，進(jìn)行抗體陽性率、抗體滴度平均值，綜合判斷免疫效果。檢測方法按試劑盒操作方法進(jìn)行并判定，結(jié)果如下：

2.2.1單獨(dú)注射豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）豬瘟注射抗體檢測結(jié)果（豬瘟抗體阻斷率%）

2.2.2單獨(dú)注射偽狂犬病活疫苗免疫抗體檢測結(jié)果

2.2.3 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）+ 偽狂犬病活疫苗分點(diǎn)同時(shí)注射試驗(yàn)組檢測結(jié)果

2.2.3.1豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果（豬瘟抗體阻斷率%）

2.3.3.2偽狂犬病免疫抗體檢測結(jié)果

2.3.4豬瘟活疫苗（傳達(dá)細(xì)胞源）+偽狂犬病活疫苗混合注射試驗(yàn)組檢測結(jié)果

2.3.4.1豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果（豬瘟抗體阻斷率%）

2.3.4.2偽狂犬病免疫抗體檢測結(jié)果

3分析與討論

3.1對(duì)豬瘟免疫抗體的分析與討論

3.1.1單獨(dú)注射

由表1可以看出：一免28 d后抗體阻斷率平均值為62.0%以上，陽性率為100%；

一免后35 d取其中一半（6頭）進(jìn)行二免。一免后42 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為72.6%，陽性率為100%；二免后7 d抗體阻斷率平均值為82.3%，陽性率為100%。一免后56 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為76.2%，陽性率為100%；二免后21 d抗體阻斷率平均值為84.50%，陽性率為100%。一免后70 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為54.2%，陽性率為85.7%；二免后35 d抗體阻斷率平均值為73.50%，陽性率為100%。

一免后42 d前抗體陽性率均為100%，但一免后56 d及一免后70 d測抗體時(shí)，一免陽性率僅為85.7%，而二免后7 d、21 d、35 d陽性率仍為100%。

由此看出，單獨(dú)注射瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）時(shí)，二免抗體明顯好于一免，但到56 d時(shí)，一免抗體已開始下降，需進(jìn)行二免。

3.1.2分點(diǎn)同時(shí)注射

由表3可以看出：

一免后28 d，抗體阻斷率平均值為65.3%以上，陽性率為83.3%；

一免后35 d取其中一半（6頭）進(jìn)行二免。一免后42 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為78.5%，陽性率為100%；二免后7 d抗體阻斷率平均值為78.9%，陽性率為100%。一免后56 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為80.5%，陽性率為100%；二免后21 d抗體阻斷率平均值為82.1%，陽性率為100%。一免后70 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為73.7%，陽性率為100%；二免后35 d抗體阻斷率平均值為75.9%，陽性率為100%。

一免后42 d后抗體陽性率均為100%，一免和二免抗體阻斷率差別不大。

3.1.3豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）+偽狂犬病活疫苗混合注射

由表5可以看出：

一免后28 d后抗體阻斷率平均值為58.6%以上，陽性率為100%；

一免后35 d取其中一半（6頭）進(jìn)行二免。一免后42 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為77.1%，陽性率為100%；二免后7 d抗體阻斷率平均值為79.4%，陽性率為100%。一免后56 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為85.1%，陽性率為100%；二免后21 d抗體阻斷率平均值為85.3%，陽性率為100%。一免后70 d采血測抗體，一免抗體阻斷率平均值為71.7%，陽性率為100%；二免后35 d抗體阻斷率平均值為73.2%，陽性率為100%。