王紅梅 劉曉嵐 張軼華

【摘 要】建立了氣相色譜法測(cè)定市場(chǎng)上不同廠家魚油制品中EPA和DHA含量的方法。采用皂化反應(yīng)-甲酯化反應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行前處理，用外標(biāo)法進(jìn)行定量測(cè)定。EPA和DHA在0.03mg/ml～0.5mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（γ=0.9996，0.9991），回收率在98.6%～99.8%之間。該方法操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可作為魚油制品質(zhì)量評(píng)價(jià)的參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】氣相色譜法；EPA；DHA；皂化反應(yīng)-甲酯化反應(yīng)

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）02-0722-01

長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸（LC-PUFA），是細(xì)胞膜的重要組成材料，對(duì)中樞神經(jīng)和視網(wǎng)膜的發(fā)育及維持其正常生理功能具有相當(dāng)重要的作用。魚油中富含LC-PUFA，尤其是其中所含的二十碳五烯酸（C20：5ω3， EPA）和二十二碳六烯酸（C22：6ω3， DHA）被稱為腦黃金，是在其它油脂中難以見到的。EPA和DHA的含量是決定魚油保健品價(jià)格的主要因素，因此研究測(cè)定EPA和DHA的測(cè)定方法十分必要。已有文獻(xiàn)報(bào)道EPA和DHA的測(cè)定方法[1]，本文對(duì)樣品進(jìn)行皂化反應(yīng)-甲酯化反應(yīng)，建立了簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確的GC檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6890（美國(guó)）；標(biāo)準(zhǔn)品：EPA甲酯（貨號(hào)：C100MGU-99-M），DHA甲酯（貨號(hào)：C100MGU-84-M）；正己烷，甲醇均為色譜純（德國(guó)Merck公司）；水為二次蒸餾水。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取EPA甲酯和DHA甲酯各0.1g置100ml容量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度。

1.2 分析條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：HP-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱（30mⅹ0.53mmⅹ1.00μm）；柱溫：200℃；進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測(cè)器溫度：230℃。載氣及流速：高純氮?dú)猓兌取?9.999%，6.0ml/min；分流比：5：1；進(jìn)樣量：1μl。

1.2.2 樣品處理

取樣品5-10粒，內(nèi)容物混勻，精密稱取約0.2g適量置100ml容量瓶中，加適量正己烷溶解，加入2mol/L氫氧化鈉-甲醇溶液2ml，充分震蕩10min，放入60℃的水浴中加熱2min，冷卻至室溫，再加入2mol/L鹽酸-甲醇溶液4ml，充分震蕩10min，放入60℃的水浴中加熱2min，棄去下層溶液，再加2ml蒸餾水洗凈并去除水層，吸出正己烷至裝有無水硫酸鈉的漏斗中脫水，將脫水后的溶液定溶至100ml容量瓶中，作為供試品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品處理方法的優(yōu)化

在對(duì)油脂中的EPA和DHA分析過程中發(fā)現(xiàn)，油脂中的脂肪酸以脂肪酸甘油酯的形式存在，但其沸點(diǎn)很高，不利于色譜分析。由于脂肪酸甲酯的揮發(fā)性較高能夠保證優(yōu)良的色譜峰形，便于色譜分析，因此采用甲酯化方法將甘油酯轉(zhuǎn)化為甲酯。酯化方法的選擇對(duì)于分析結(jié)果的影響使明顯的，有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)魚油制品直接測(cè)定或用氫氧化鉀-甲醇直接甲酯化[2，3]，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這兩種方法的測(cè)定結(jié)果偏低且回收率低。先用氫氧化鈉-甲醇溶液進(jìn)行皂化反應(yīng)，再用鹽酸-甲醇溶液進(jìn)行甲酯化反應(yīng)，測(cè)定結(jié)果較高，用水凈化并用無水硫酸鈉脫水后，溶液pH接近中性，可延長(zhǎng)色譜柱的壽命，且能避免色譜峰拖尾。樣品圖譜見圖1.

2.2 色譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)柱溫對(duì)EPA甲酯和DHA甲酯的保留時(shí)間影響很大，當(dāng)柱溫設(shè)為220℃，保留時(shí)間依次為4.2min和7.8min，但與相鄰雜質(zhì)峰均不能完全分開；柱溫設(shè)為200℃時(shí)，EPA甲酯和DHA甲酯均與相鄰雜質(zhì)峰完全分開。

2.3 線性范圍及檢出限

取1.1項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，依次量取0.3ml，1ml，3ml和5ml置10ml容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，分別進(jìn)樣1μl，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，EPA甲酯和DHA甲酯線性方程依次為A=5847.4C-46.358，γ=0.9996；A=5011.8C+24.364，γ=0.9991，表明在0.03mg/ml～0.5mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。根據(jù)3倍信噪比計(jì)算檢出限依次為0.3μg/ml和0.4μg/ml。

2.4 重復(fù)性和穩(wěn)定性

按2.1項(xiàng)下方法處理樣品（×××牌魚油軟膠囊），平行處理6份，計(jì)算EPA和DHA的含量，RSD依次為1.0%和1.2%，說明色譜系統(tǒng)重復(fù)性良好。取重復(fù)性試驗(yàn)的同一份供試品溶液，常溫下放置0，2，4，8h進(jìn)樣分析，記錄峰面積，RSD為2.1%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.5 回收率

以加標(biāo)回收率試驗(yàn)考察方法的準(zhǔn)確性。按2.1項(xiàng)下方法處理樣品（×××牌魚油軟膠囊），分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用外標(biāo)法以2.3項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算各成分的含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果顯示回收率為98.6%～99.8%，RSD均小于3.0%，符合含量測(cè)定的準(zhǔn)確性要求。

2.6 樣品測(cè)定

以建立的方法測(cè)定11批次不同廠家魚油制品的EPA和DHA的含量，結(jié)果見表2。從表2可以看出市場(chǎng)上的魚油制品的質(zhì)量良莠不齊，亟待建立有效的測(cè)定方法，以保證保健品的質(zhì)量。

3 結(jié)論

建立了氣相色譜法測(cè)定魚油制品中的EPA和DHA含量。用皂化反應(yīng)-甲酯化反應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行前處理，方法簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可應(yīng)用于測(cè)定市場(chǎng)上不同廠家的魚油制品。樣品結(jié)果顯示，魚油制品中EPA和DHA的含量差異較大，提示保健品質(zhì)量有待規(guī)范。

參考文獻(xiàn)：

[1] Mu Z C， Sun J W. Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine. （牟志春，孫建武.中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志），1998，21（6）：328

[2] Zhuang J Y， Feng Z Q ， Xie Z Y. Modern Food Science and Technology （莊俊鈺，馮志強(qiáng)，謝忠陽.現(xiàn)代食品科技），2009，25（11）：1363

[3] Mu J， Qu Z W. Food Science. （牟峻，曲忠文. 食品科學(xué)），2001，22（10）：76