石浩 王仁才 龐 立 仇振華 曾鄒林 劉吉?jiǎng)P

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南長沙 410128；2.湖南玖一玉泉科技實(shí)業(yè)有限公司，湖南衡陽 421001）お

摘要

［目的］分析不同品種棗果實(shí)多糖含量，篩選多糖含量高的棗果資源，促進(jìn)棗果資源的綜合開發(fā)利用。［方法］以雞蛋棗、糖棗、藥棗、長棗等16個(gè)湖南主要地方棗品種為試材，經(jīng)硫酸-苯酚法對(duì)不同品種棗果實(shí)多糖含量進(jìn)行了分析測(cè)定。［結(jié)果］分析表明，不同棗品種間最高與最低多糖含量相差達(dá)3.9倍，其中以小米棗和子代糖棗多糖含量最高，分別達(dá)9.75%、9.06%；母本糖棗、酸元棗、藥棗、長棗、玉泉八號(hào)和南方冬棗次之，多糖含量分別為8.82%、6.20%、5.89%、5.56%、5.54%、5.23%；而光皮棗多糖含量最低，僅為2.45%。不同棗品種間多糖含量差異較大。［結(jié)論］研究顯示，苯酚-硫酸法較為穩(wěn)定，正確率和精密度高，重現(xiàn)性好，可作為棗多糖含量的測(cè)定方法；同時(shí)，棗具有很高的多糖加工利用價(jià)值，值得開發(fā)利用。

關(guān)鍵詞棗；品種；多糖 ；硫酸-苯酚法

中圖分類號(hào) SB665.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2014）19-06370-03

お

Analysis of Polysaccharide in Fruits of Different Jujube Varieties

SHI Hao, WANG Ren瞔ai et al

(College of Horticulture and Landscape, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128)

Abstract ［Objective］ To analyze polysaccharide content in different varieties of jujube fruit, screen out jujube fruit resources with high polysaccharide content and promote the comprehensive development and utilization. ［Method］ Taking Hunan local variety egg jujube, candied jujube, medicinal jujube, long jujube etc.16 kinds of jujube cultivars as materials, the polysaccharide content in different jujube cultivars were determined by sulfuric acid瞤henol method. ［Result］ The highest and the lowest polysaccharide content in different varieties of jujube fruit reach 3.9 times, among which, millet jujube and filial generation candied jujube has the highest polysaccharide content of 9.75%, 9.06% respectively; The secondly were the female candied jujube, acid yuan jujube, medicinal jujube, long jujube, Yuquan No.8 and southern Dongzao, respectively, 8.82%, 6.20%, 5.89%, 5.56%, 5.54%, 5.23%, and the light skin jujube content is the lowest, only 2.45%. The polysaccharide content in different varieties of jujube fruit has significant differences. ［Conclusion］ The study showed that, sulfuric acid瞤henol method is stable with high accuracy, precision and good reproducibility, which can be used for determination of polysaccharide content in jujube; meanwhile, jujube has higher polysaccharide processing and utilization value, and is worthy of development.

Key wordsJujube; Varieties; Polysaccharide; Sulfuric acid瞤henol method

基金項(xiàng)目 湖南省2013年學(xué)位與研究生教育專項(xiàng)資金項(xiàng)目（CX2013睟294）；湖南省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2011NK4042）；湖南省自然科學(xué)基金委員會(huì)與衡陽市政府自然科學(xué)聯(lián)合基金項(xiàng)目（13JJ8010）。

作者簡介

石浩（1988-），男，湖南常德人，碩士研究生，研究方向：藥用植物資源高值化利用技術(shù)。*通訊作者，教授，博士生導(dǎo)師，從事藥用植物資源工程研究。

收稿日期 20140508

棗樹(玓izyphus jujube 玀ill)為鼠李科棗屬木本植物，在我國已有4 000多年的種植歷史。棗樹為我國的特產(chǎn)果樹，種植面積和總產(chǎn)量占全世界的90％以上［1-3］。湖南地區(qū)棗種植具有悠久的歷史，棗資源豐富，品種繁多，分布范圍廣，充分利用地方棗品種資源，發(fā)展南方棗業(yè)對(duì)于促進(jìn)湖南農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要意義。

棗果又名紅棗，營養(yǎng)豐富，用途廣泛，食療價(jià)值高，是上等的滋補(bǔ)食品，發(fā)展前景十分廣闊。棗不僅是滋補(bǔ)佳品，而且也是一味傳統(tǒng)的中藥，因富含營養(yǎng)和保健成分而享譽(yù)中外，為我國傳統(tǒng)藥食兼用果品［4］。棗果中含有豐富的生物活性物質(zhì)，如多糖、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、黃酮類、有機(jī)酸、三萜類、環(huán)磷酸腺苷、維生素、微量元素等［5-7］。

多糖是由多個(gè)單糖基及糖苷鍵相連接而成的高聚物，一般是20個(gè)以上的單糖聚合而成，廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜、高等植物和微生物的細(xì)胞壁中，是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一，同維持生命活動(dòng)密切相關(guān)［8］。多糖類化合物是中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性。棗果含有豐富的棗多糖，現(xiàn)代藥理研究表明，大棗多糖具有明顯的抗補(bǔ)體活性和促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖功能，具有養(yǎng)心安神、緩和藥性、補(bǔ)氣養(yǎng)血、健脾益胃、保肝、抗氧化、抗衰老、提高抗體免疫力等功效［9-12］。

1材料與方法

1.1 材料

供試材料為湖南玖一玉泉科技實(shí)業(yè)有限公司種植的玉泉8號(hào)棗、南方冬棗和子代糖棗，以及湖南省衡陽市衡南縣與祁東縣采集的方頭棗、小米棗、大米棗、母本糖棗、長棗、光皮棗、雞蛋棗、藥棗、酸棗、酸元棗、軍棗、牛奶棗、瓜棗13種地方棗品種，共16個(gè)棗品種果實(shí)。

主要儀器：ZW1105051705紫外可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司；SB3200D超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；AUW220D電子天平，日本shimadzu公司；DR1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州長城科工貿(mào)有限公司。

主要試劑：無水葡萄糖對(duì)照品、無水乙醇、丙酮、正丁醇、氯仿、98%濃硫酸、苯酚，均為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，色譜純。

1.2棗多糖含量測(cè)定方法的確定

1.2.1

供試品溶液的制備。

轉(zhuǎn)紅期鮮棗經(jīng)65 ℃干燥至恒重，粉碎過70目篩，精確稱取棗粉10 g裝入250 ml錐形瓶中同時(shí)加150 ml蒸餾水，60 ℃水浴超聲提取3次，每次15 min。抽濾棄去藥渣，合并濾液，60 ℃減壓蒸餾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)約15 ml體積后，用100 ml無水乙醇萃取，靜置2 h后過濾，65 ℃水浴干燥至恒重；稱重計(jì)算多糖粗提物質(zhì)量。粗多糖用20ml丙酮洗滌多次， 50 ml蒸餾水溶解。以多糖水溶液1/3體積加入Sevag試劑（氯仿∶正丁醇=4∶1）混合振蕩20 min后靜置15 min，除去水層與溶劑交界處的變性蛋白質(zhì)，重復(fù)多次直至除盡，定容至100ml容量瓶中，取1ml置100ml容量瓶中定容，即得。

1.2.2

對(duì)照品溶液的制備。精密稱取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對(duì)照品10 mg，置100ml量瓶中，加蒸餾水溶解并定容，即得100 μg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。

1.2.3

測(cè)定波長的確定。精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml于20 ml玻璃試管中，加入5%苯酚溶液1 ml，迅速加入濃硫酸5 ml，搖勻，常溫靜置20 min后沸水浴3 min，取出后室溫放置30 min，各試管中補(bǔ)加蒸餾水3 ml，在400~600 nm波長范圍用紫外可見分光光度計(jì)全波長掃描。經(jīng)測(cè)定，溶液在490 nm處有最大吸收峰。

1.2.4

線性關(guān)系考察。分別精密量取0.15、0.30、0.45、0.60、0.75、1.00 ml對(duì)照品溶液于6只20 ml玻璃試管中，加入5%苯酚溶液1 ml，并迅速加入濃硫酸5 ml，搖勻，常溫靜置20 min后沸水浴3min，取出后迅速冷卻至室溫，各試管中補(bǔ)加蒸餾水3 ml，在波長490 nm處測(cè)定吸光度。精密量取蒸餾水1ml同上述操作，作為空白對(duì)照。以濃度獵對(duì)吸光度A作線性圖。

1.2.5

精密度試驗(yàn)。不同檢測(cè)人員，按照“1.2.3”項(xiàng)方法測(cè)定供試液吸光度；精密吸取多糖供試品溶液6份，每份1.0 ml，測(cè)定出吸光度，計(jì)算玆SD值考察試驗(yàn)精密度。

1.2.6

重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取棗粉10 g，共6份，按照“1.2.1”項(xiàng)供試液的制備方法，再按“1.2.3”項(xiàng)的顯色方法測(cè)定吸光度，計(jì)算玆SD值考察試驗(yàn)重復(fù)性。

1.2.7

穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取多糖供試品溶液1.0 ml，按照“1.2.3”項(xiàng)方法顯色后，每隔30 min測(cè)定一次吸光度，連續(xù)6次，觀察硫酸-苯酚法對(duì)多糖顯色效果的穩(wěn)定性，測(cè)定出吸光度，計(jì)算玆SD值考察試驗(yàn)穩(wěn)定性。

1.2.8

加樣回收率試驗(yàn)。精密吸取40 μg/ml的多糖供試品溶液0.5 ml，共6份，精密加入0.5 ml(10、30、50、70、90、100 μg/ml)的葡萄糖對(duì)照品溶液，搖勻后按照“1.2.3”項(xiàng)方法顯色，測(cè)定多糖含量，計(jì)算玆SD值考察試驗(yàn)加樣回收率。

回收率％=〖ZK(〗(測(cè)得多糖的質(zhì)量-供試品中多糖的質(zhì)量)/添加葡萄糖對(duì)照品質(zhì)量×100％〖ZK)〗

1.2.9

多糖含量的計(jì)算。公式如下：

多糖含量（%）=獵璱×N/M

式中，C璱為樣品測(cè)定吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線中對(duì)應(yīng)濃度(│蘥/ml)；

玁為樣品稀釋倍數(shù)（10 000）；玀為棗粉質(zhì)量（10 g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)測(cè)定方法的分析

2.1.1

線性關(guān)系考察。以濃度C對(duì)吸光度A作線性圖，得回歸方程y=0.009 2x+0.007 2(R2=0.999 4)。結(jié)果表明，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)硫酸-苯酚法顯色后在15~100 μg/ml范圍線性關(guān)系良好。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液線性關(guān)系考察

2.1.2

精密度試驗(yàn)結(jié)果。

不同檢測(cè)人員對(duì)6份多糖供試品溶液所測(cè)得吸光值分別為：0.455、0.475、0.466、0.465、0.448、0.460，經(jīng)計(jì)算其玆SD值為2.04%，小于3%，說明該方法具有良好的精密度。

2.1.3

重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果。

按照“1.2.1”項(xiàng)供試液的制備方法，再按“1.2.3”項(xiàng)的方法顯色后測(cè)得6份多糖供試品溶液吸光值分別為：0.455、0.458、0.438、0.422、0.460、0.453，經(jīng)計(jì)算其玆SD值為1.98%，小于3%，說明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.1.4

穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果分析。從表1中可知，多糖溶液經(jīng)硫酸-苯酚法顯色后，在2.0 h內(nèi)其吸光值的檢測(cè)結(jié)果沒有變化，2.5 h后溶液吸光值開始略微降低，通過spss軟件方差分析獸值為0.887，大于0.05，可判斷不同時(shí)間段所測(cè)定吸光值不具有顯著性差異。由此說明，采用硫酸-苯酚法測(cè)定多糖含量，吸光值隨時(shí)間變化不大，但顯色后的溶液在2.0 h內(nèi)檢測(cè)效果最佳。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定時(shí)間h

獳值

重復(fù)1 重復(fù)2 重復(fù)3 獳平均值

0.5 0.460 0.475 0.468 0.468

1.0 0.458 0.473 0.470 0.467

1.5 0.475 0.466 0.462 0.468

2.0 0.472 0.462 0.468 0.467

2.5 0.466 0.458 0.471 0.465

3.0 0.458 0.466 0.463 0.462

2.1.5

加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分析。由表2可知，在硫酸-苯酚法測(cè)定多糖含量加樣回收試驗(yàn)結(jié)果中，其玆SD值為2.6%，小于3%，該方法回收率良好，所制訂分析方法的準(zhǔn)確┒雀?。?/p>

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

序號(hào) 取樣量う蘥 添加量う蘥 測(cè)得量う蘥 回收率% 平均回收ぢ省% 玆SD%

1 20 5 25.12 102.4099.23 2.08

〗2 20 15 35.07 100.47

3 20 25 44.80 99.20

4 20 35 54.31 98.03

5 20 45 64.52 98.93

6 20 50 68.18 96.36

2.2 不同棗品種多糖粗提物及多糖含量測(cè)定結(jié)果分析

不同品種棗果實(shí)多糖粗提物含量有一定差異。由表3可知，16個(gè)棗品種中，多糖粗提物含量均值為1.55 g，其中以小米棗、子代糖棗含量最高，分別為3.02、2.79 g，均值達(dá)到了2.91 g；母本糖棗、長棗、南方冬棗、酸元棗、藥棗含量次之，分別為2.63、1.84、1.38、1.31、1.30 g；而瓜棗、光皮棗含量最低，僅為1.08、1.10 g。多糖含量高與含量低棗品種之間含量相差達(dá)2.6倍。

不同品種棗果實(shí)多糖含量差異較大。由表3可見，16個(gè)品種棗果中，多糖含量均值為5.25%，其中以小米棗、子代糖棗含量最高，分別為9.75%、9.06%，均值達(dá)到了9.41%；母本糖棗、酸元棗、藥棗、長棗、玉泉八號(hào)和南方冬棗次之，分別為8.82%、6.20%、5.89%、5.56%、5.54%、5.23%；而光皮棗、瓜棗含量最低，僅為2.45%、2.54%；多糖含量高與含量低棗品種之間含量相差達(dá)3.9倍。通過方差分析，無論是多糖粗提物還是多糖含量，其獸＞F0.01(15,32)，差異達(dá)極顯著水平，說明不同棗品種間多糖粗提物及其多糖含量差異極為顯著。

對(duì)比多糖含量與多糖粗提物含量還可看出，兩者基本上存在一一對(duì)應(yīng)的關(guān)系，多糖粗提物含量高的棗品種其多糖含量也相對(duì)高一些；多糖含量組內(nèi)均方為0.009，多糖粗提物質(zhì)量組內(nèi)均方為0.017，對(duì)比兩者組內(nèi)均方可知，多糖含量測(cè)定具有很高的穩(wěn)定性，多糖粗提物測(cè)定其穩(wěn)定性相對(duì)較低┮壞?。?/p>

表3不同品種棗果中多糖粗提物及多糖含量

棗果っ稱 多糖粗提物ず量∥g 多糖含量% 棗果っ稱 多糖粗提物ず量∥g 多糖含量%

方頭棗 1.21 3.55 大米棗 1.16 4.91

小米棗 3.02 9.75 玉泉八號(hào) 1.27 5.54

子代糖棗 2.79 9.06 酸棗 1.12 3.55

母本糖棗 2.63 8.82 酸元棗 1.31 6.20

長棗 1.84 5.56 軍棗 1.12 2.87

光皮棗 1.10 2.45 牛奶棗 1.18 4.32

雞蛋棗 1.24 3.84 瓜棗 1.08 2.54

藥棗 1.30 5.89 南方冬棗 1.38 5.23

3 結(jié)論與討論

棗資源多種多樣，資源基因差異大，不同品種棗果實(shí)多糖的含量存在較大差異。該試驗(yàn)結(jié)果表明，不同棗品種間多糖含量最高與最低相差達(dá)3.9倍，其中小米棗與子代糖棗多糖含量高達(dá)9%以上，具有很高的多糖加工利用價(jià)值，值得開發(fā)├用。

試驗(yàn)過程中始終保持65 ℃左右的溫度，既能提高試驗(yàn)效率，又能避免因溫度過高導(dǎo)致棗多糖顏色過深；通過水浴超聲所浸提出的粗多糖經(jīng)乙醇沉淀、洗滌，丙酮洗滌，Sevag試劑除蛋白，可除去大量脂溶性物質(zhì)、色素、單糖、蛋白質(zhì)等進(jìn)而使測(cè)定結(jié)果更加精準(zhǔn)。該試驗(yàn)研究顯示，苯酚-硫酸法較為穩(wěn)定，準(zhǔn)確率和精密度高，而且重現(xiàn)性好，可作為棗多糖含量的測(cè)定方法。

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