逯雯潔 林鵬程

摘要[目的]建立藏藥八味獐牙菜丸中鹽酸小檗堿含量的測定方法。[方法]采用反相高效液相色譜法測定，色譜柱為依利特Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（25∶75，V/V）為流動相，流速1.0 ml/min，檢測波長為265 nm。[結(jié)果]在0.165 6～2.318 4 μg范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿濃度與峰面積線性關(guān)系良好，R=0.999 5，平均回收率為97.30%，RSD為1.57%（n=6）。[結(jié)論]該測定方法快速、重現(xiàn)性好，可用于八味獐牙菜丸中鹽酸小檗堿成分的含量測定。

關(guān)鍵詞HPLC；八味獐牙菜丸；鹽酸小檗堿

中圖分類號S567文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）01-00050-02

作者簡介逯雯潔（1985-），女，青海西寧人，藥師，碩士，從事中藏藥品分析檢驗工作，Email：kathy_608@163.com。*通訊作者，教授，碩士生導(dǎo)師，博士，從事天然產(chǎn)物有效成分研究工作，Email：qhlpc@126.com。

收稿日期20131202八味獐牙菜丸為藏醫(yī)傳統(tǒng)名方，收載于1995年《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)號為：WS3-BC-0241-95）[1]，由獐牙菜（Swertia）、兔耳草（Short spike Lagotis）、波棱瓜子、角茴香（Root of Erect Hypecoum）、榜嘎、小檗皮、巖參、木香8味藏藥材組成，臨床上用于治療膽囊炎及初期黃疸型肝炎。處方中小檗皮為小檗科植物甘肅小檗（Berberis kansuensis Schneid.）的干燥皮，是常用藏藥材之一[2]?！毒е楸静荨酚涊d，小檗皮“性涼而糙，能斂毒，清黃水，可除毒病及黃水病，止瀉，并可除陳舊熱病、陳舊黃水病及一切眼病”。說明小檗皮為方中主要功效成分之一，而原部頒標(biāo)準(zhǔn)無含量測定項。為提高小檗皮的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，筆者采用高效液相色譜法對八味獐牙菜丸中的小檗皮建立含量測定方法，以期為八味獐牙菜丸的進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象。八味獐牙菜丸樣品由2家藥廠提供，分別是青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司（批號20090722、20100420）和寧夏多維藥業(yè)有限公司（批號060601、080304、080911、090310、090311、091212、091209、090312）。

1.1.2 主要儀器。Waters1525型高效液相色譜儀和Waters2489紫外檢測器，均購自Waters公司；METTLER AB204-S電子天平和METTLER TOLEDO電子天平，均購自瑞士METTLER公司。

1.1.3 主要試劑。鹽酸小檗堿對照品（0713-200911），購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，市售。

1.2方法

1.2.1 色譜條件。色譜柱為依利特Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（25∶75，V/V）為流動相，流速1.0 ml/min，檢測波長為265 nm。

1.2.2 對照品溶液的配制。精密稱取8.28 mg鹽酸小檗堿對照品，加無水甲醇超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得，鹽酸小檗堿對照品溶液濃度為0.331 2 mg/ml。

1.2.3 提取方法的選擇。精密稱取1.000 g八味獐牙菜丸（批號060601），置具塞錐形瓶中，精密加入25.0 ml鹽酸-無水甲醇（1∶100，V/V），稱定重量，分別采用回流和超聲提取，提取時間為30 min，在“1.2.1” 色譜條件下測定鹽酸小檗堿的含量，比較提取結(jié)果的優(yōu)劣。

1.2.4 提取時間的選擇。精密稱取1.000 g八味獐牙菜丸（批號060601），置具塞錐形瓶中，精密加入25.0 ml鹽酸-無水甲醇（1∶100，V/V），超聲提?。üβ?50 W，頻率50 kHz）20、30和40 min，在“1.2.1” 色譜條件下測定鹽酸小檗堿的含量，比較提取結(jié)果的優(yōu)劣。

1.2.5 陰性對照溶液的配制。按處方比例稱取除小檗皮外的其他藥材適量，依據(jù)八味獐牙菜丸的處方工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

1.2.6 方法學(xué)考察。（1）系統(tǒng)適應(yīng)性考察。取適量對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，在“1.2.1” 色譜條件下測定鹽酸小檗堿的含量，考察系統(tǒng)適應(yīng)性。（2）線性關(guān)系的考察。按上述色譜條件，分別精密吸取0.5、0.7、1.0、3.0、5.0和7.0 μl對照品溶液（0.331 2 mg/ml），在“1.2.1” 色譜條件下進(jìn)樣，以峰面積y為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算線性回歸方程。（3）精密度考察。精密吸取3 μl濃度為0.331 2 mg/ml對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得鹽酸小檗堿峰面積，計算RSD。（4）穩(wěn)定性試驗。取供試品溶液（批號060601），按上述色譜條件分別在0、2、4、6和8 h注入液相色譜儀，進(jìn)樣量3 μl，測定鹽酸小檗堿峰面積，計算RSD。（5）重現(xiàn)性試驗。取樣品（批號060601）制備5份供試液，按上述色譜條件下分別測定，進(jìn)樣10 μl，測定峰面積，按鹽酸小檗堿峰面積計算RSD。（6）加樣回收率試驗。精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加無水甲醇溶解配制成0.331 2 mg/ml的溶液，搖勻；精密稱取0.400 g已知含量的八味獐牙菜丸樣品（批號060601，含量為2.553 mg/g），稱取6份，置具塞錐形瓶中；每份中均同時加入鹽酸小檗堿對照品溶液（0.331 2 mg/ml）2.0 ml，并精密加入鹽酸-無水甲醇（1∶100，V/V）23 ml，制成供試品溶液，并按色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量，計算平均回收率和RSD。

1.2.7 樣品溶液的含量測定。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，按上述色譜條件對10批樣品進(jìn)行含量測定，以外標(biāo)一點(diǎn)法計算樣品中鹽酸小檗堿的含量。

2結(jié)果與分析

2.1提取方法的選擇 測定結(jié)果表明，回流提取法和超聲提取法的提取結(jié)果差別不大，因回流提取繁瑣費(fèi)時，故選擇超聲提取法。

2.2提取時間的選擇 測定結(jié)果表明，30和40 min所測得的芒果苷含量接近，且大于20 min所提的含量，故提取時間選擇30 min。

2.3方法學(xué)考察 （1）系統(tǒng)適應(yīng)性考察。圖1表明，在相同時間上，對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液圖譜有對應(yīng)的吸收峰，陰性無干擾，表明系統(tǒng)適應(yīng)性良好。（2）線性關(guān)系的考察。計算得線性回歸方程為y=4 629 102.46x-136 034.70，R=0.999 5。試驗結(jié)果表明，在0.165 6～2.318 4 μg/ml范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。（3）精密度考察。計算得鹽酸小檗堿峰面積的RSD=0.13%，表明精密度良好。（4）穩(wěn)定性試驗。計算得鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.14%，表明穩(wěn)定性良好。（5）重現(xiàn)性試驗。計算得鹽酸小檗堿峰面積的RSD為1.14%，表明重現(xiàn)性良好。（6）加樣回收率試驗。由表1可知，平均回收率為97.30%，RSD為1.57%，表明該測定方法快速、重現(xiàn)性好，可用于八味獐牙菜丸中鹽酸小檗堿成分的含量測定。

2.4樣品溶液的含量測定 以外標(biāo)一點(diǎn)法計算得10批樣品中鹽酸小檗堿的含量分別為2.66、3.74、2.61、2.73、2.70、2.57、2.63、2.83、2.72和2.55 mg/g，平均含量為2.77 mg/g。

3結(jié)論與討論

由于原標(biāo)準(zhǔn)對成藥中小檗皮未進(jìn)行定量控制，因此增訂了用高效液相法測定小檗皮中鹽酸小檗堿的含量測定項。含量測定方法優(yōu)化時，嘗試用乙腈-濃度0.1%磷酸溶液，無水甲醇-水-冰醋酸-三乙胺溶液，乙腈-磷酸二氫鉀溶液等多種流動相，最后選擇乙腈-濃度0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（25∶75，V/V）為流動相，被測組分達(dá)到良好地分離度并且有較好的峰形。根據(jù)分別測得2個廠家10批樣品中鹽酸小檗堿含量在2.55～3.74 mg/g，平均含量為2.77 mg/g，查閱文獻(xiàn)可知[3-10]，小檗皮中鹽酸小檗堿的含量因產(chǎn)地不同而差異較大，故在藏成藥生產(chǎn)過程中還需嚴(yán)格控制小檗皮產(chǎn)地來源以確保藥品質(zhì)量。

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