彭金年 程庚金生 張付遠(yuǎn) 李丹丹

摘要[目的]建立利用薄層掃描法測(cè)定梔子中梔子苷含量的方法。[方法]樣品經(jīng)超聲提取，采用硅膠G高效薄層板條帶點(diǎn)樣，以氯仿-乙酸乙酯-無(wú)水甲醇（3∶2∶1，V/V/V）為展開(kāi)劑上行展開(kāi)，在240 nm波長(zhǎng)進(jìn)行掃描檢測(cè)。[結(jié)果]在0.240～0.640 μg/ml范圍內(nèi)，梔子苷濃度與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999 54，平均回收率為100.45%，RSD為1.69%。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于贛南野生黃梔子中梔子苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞薄層掃描法；梔子（FRUCTUS GARDENIAE）；梔子苷

中圖分類(lèi)號(hào)S567.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）01-00061-02

作者簡(jiǎn)介彭金年（1976- ），女，湖北洪湖人，副教授，博士，從事中藥成分與活性研究，Email：pengjinnian2007@126.com。

收稿日期20131210梔子（FRUCTUS GARDENIAE）為茜草科（Rubiaceae）植物梔子（Gardenia jasminoides Ellis）的干燥成熟果實(shí)[1]，具有瀉火除煩、清熱利尿和涼血解毒作用，主治熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱出衄、目赤腫痛、火毒瘡傷和外治扭挫傷痛等[2]。梔子中主含梔子苷（Geniposide）[3]，具有利膽和降壓作用。梔子在許多中成藥配伍中均有應(yīng)用，如黃連解毒湯、龍膽瀉肝丸、復(fù)方梔子沖劑、清淋沖劑、梔子金花丸、牛黃上清軟膠囊、三子散、金花消痤膠囊、石淋止痛劑、六味木香膠囊和小兒退熱軟膏等[4-6]。

在梔子及含梔子制劑分析中，常以梔子苷進(jìn)行質(zhì)量控制和含量測(cè)定。近些年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)梔子中梔子苷含測(cè)的研究頗多[7-8]，但有關(guān)采用高效薄層色譜法測(cè)定梔子中梔子苷含量的研究鮮有報(bào)道。筆者采用高效薄層色譜單波長(zhǎng)掃描法，建立一種操作方便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好梔子中梔子苷含量測(cè)定的新方法，以期為梔子中梔子苷的質(zhì)量控制和含量測(cè)定提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象。梔子，于2012年11月中旬采摘于贛南醫(yī)學(xué)院黃金校區(qū)，經(jīng)贛南醫(yī)學(xué)院中藥教研室老師鑒定為茜草科植物黃梔子果實(shí)（贛南野生黃梔子）。

1.1.2主要儀器。AB135S型電子分析天平，購(gòu)自瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)；DZF605真空干燥箱，購(gòu)自上海一恒科學(xué)儀器有限公司；數(shù)控超聲波清洗機(jī)，購(gòu)自上海聲彥超聲波儀器有限公司；WS701遠(yuǎn)紅外快速干燥器，購(gòu)自上海景凱科學(xué)儀器有限公司；ADS4C自動(dòng)點(diǎn)樣儀、ADC2C自動(dòng)展開(kāi)儀和Scanner3薄層掃描儀，購(gòu)自瑞士CAMAG。

1.1.3主要試劑。梔子苷對(duì)照品，購(gòu)自北京世紀(jì)賽科生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為MUST12041808；硅膠G高薄層板（10 cm×10 cm），由青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)；氯仿，乙酸乙酯和甲醇等試劑均為分析純，市售。

1.2方法

1.2.1對(duì)照品溶液制備。精密稱(chēng)取梔子苷2.00 mg，置于25 ml容量瓶中，用無(wú)水甲醇定容至刻度，作為對(duì)照品溶液。

1.2.2供試品溶液制備。取試驗(yàn)材料，研碎成粉末，遠(yuǎn)紅外干燥至恒重，精密稱(chēng)取干燥、粉碎的梔子粉末0.502 4 g，置具塞錐形瓶中，50 ml加入無(wú)水甲醇，超聲提取40 min，濾過(guò)，取濾液定容至100 ml，作為供試品溶液。

1.2.3薄層層析及薄層掃描條件。硅膠G高效薄層板（10 cm×10 cm），試驗(yàn)前置電熱干燥箱中110 ℃活化40 min，在干燥環(huán)境中放冷，備用。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇（3∶2∶1，V/V/V）為展開(kāi)劑上行展開(kāi)70 mm；波長(zhǎng)掃描240 nm；狹縫寬度為6.0 mm×0.3 mm。

1.2.4方法學(xué)考察。（1）線(xiàn)性關(guān)系的考察。用卡瑪全自動(dòng)點(diǎn)樣儀精密吸取上述制備好的對(duì)照品溶液（0.08 mg/ml）于同一硅膠G高效薄層板上條帶點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量分別為3、4、5、6、7和8 μl，以梔子苷峰面積為縱坐標(biāo)（Y），梔子苷濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算線(xiàn)性回歸方程。（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)。準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液4 μl，自動(dòng)點(diǎn)樣與展開(kāi)，對(duì)同一硅膠G高效薄層板的同一斑點(diǎn)每隔60 min掃描一次，計(jì)算峰面積值的RSD。（3）同板精密度試驗(yàn)。精密吸取對(duì)照品溶液2 μl，在同一硅膠G高效薄層板上平行點(diǎn)樣5次，按色譜條件及掃描條件對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各斑點(diǎn)峰面積的RSD。（4）加樣回收率試驗(yàn)。取5份已知梔子苷含量的梔子提取液400 μl，各加入梔子苷對(duì)照品溶液400 μl，混合均勻。分別精密吸取上述混合液2 μl，點(diǎn)于同一硅膠G高效薄層板上，按色譜條件及掃描條件對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均回收率和RSD。

1.2.5樣品的含量測(cè)定。精密吸取供試品溶液4 μl，在同一硅膠G高效薄層板上平行點(diǎn)樣4次，按色譜條件及掃描條件對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品中梔子苷的量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)及樣品質(zhì)量換算出樣品中梔子苷的百分含量，計(jì)算梔子苷平均含量。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察（1）線(xiàn)性關(guān)系的考察。計(jì)算得線(xiàn)性回歸方程為Y=216.700+7.728X，r=0.999 54。試驗(yàn)結(jié)果表明，在0.240～0.640 μg/ml范圍內(nèi)，梔子苷濃度與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)。計(jì)算得峰面積值的RSD為0.74%，表明5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。（3）同板精密度試驗(yàn)。計(jì)算得各斑點(diǎn)峰面積的RSD為0.91%，表明精密度良好。（4）加樣回收率試驗(yàn)。計(jì)算得平均回收率為100.45%，RSD為1.69%（n=4），表明該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于贛南野生黃梔子中梔子苷的含量測(cè)定。

2.2樣品的含量測(cè)定根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品中梔子苷的量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)及樣品質(zhì)量換算出樣品中梔子苷的百分含量，計(jì)算得梔子苷平均含量為1.564 0%，RSD為2.62%。

3結(jié)論與討論

（1）試驗(yàn)所用供試品的處理方法操作簡(jiǎn)單、效率高，樣品薄層掃描測(cè)定條件適宜，梔子苷分離良好，雜質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。檢測(cè)方法誤差小、精度高，可用于梔子中梔子苷的含量測(cè)定。

（2）展開(kāi)劑是影響試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的一個(gè)重要因素。試驗(yàn)選擇了多種展開(kāi)劑對(duì)供試品與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行展開(kāi)，包括乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1，V/V/V/V）、氯仿-乙酸乙酯-無(wú)水甲醇（3∶2∶1，V/V/V）和石油醚-乙酸乙酯-甲酸（35∶10∶0.5，V/V/V），結(jié)果表明第2種展開(kāi)劑的展開(kāi)效果最好，斑點(diǎn)清晰、Rf值適宜。所以試驗(yàn)采用氯仿-乙酸乙酯-甲醇（3∶2∶1，V/V/V）為展開(kāi)劑。

（3）掃描波長(zhǎng)的選擇。試驗(yàn)對(duì)梔子苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了光譜掃描，測(cè)得梔子苷在240和238 nm處都有最大吸收，進(jìn)而在238、240 nm波長(zhǎng)處分別對(duì)梔子供試品進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)在240 nm處基線(xiàn)平整、沒(méi)有小峰、不拖尾，所以選擇波長(zhǎng)為240 nmwe梔子苷的測(cè)定波長(zhǎng)。

參考文獻(xiàn)

[1] 鄭占虎，董澤宏，余靖，等. 中成藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M]. 北京：學(xué)苑出版社，1999：3166.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：231.

[3] 陳德昌，魯靜，王寶琴. 中藥化學(xué)對(duì)照品工作手冊(cè)[K]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2000：117.

[4] 付紅蕾，梁華正，廖夫生. 梔子中京尼平苷的研究現(xiàn)狀和應(yīng)用前景[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，68（1）：54-56.

[5] 劉怡，陳磊，張留記. 不同產(chǎn)地梔子皮和梔子仁中有效成分的含量比較[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2012，23（1）：81.

[6] 王謙，唐暢，姚健，等. 各梔子主產(chǎn)區(qū)梔子中梔子苷含量的比較研究[J]. 瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，32（2）：133-135.

[7] 李桂蘭，巴雅爾，茍雅書(shū). 薄層掃描法測(cè)定沙日-毛都-8中梔子甙的含量[J]. 中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2002，8（2）：39.

[8] 于淑華，李景清，吳志英，等. 薄層掃描法測(cè)定三子散（蒙古族驗(yàn)方）中梔子苷的含量[J]. 藥物分析雜志，1996，16（4）：267.