盧福山 樊平

摘要[目的] 探討仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能的相關(guān)性。[方法]采用垂直平板聚丙烯酰胺凝膠電泳法對(duì)60頭仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性進(jìn)行了研究，并對(duì)血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能進(jìn)行了相關(guān)性分析。[結(jié)果]被檢仔豬血清運(yùn)鐵蛋白有2種基因型（TfAB和TfBB），以TfBB為優(yōu)勢(shì)基因型，基因型頻率分別為0.333 3和0.666 7；TfA和TfB等位基因頻率分別為0.166 7和0.833 3，以TfB為優(yōu)勢(shì)基因。仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能間無(wú)顯著相關(guān)（P>0.05）。[結(jié)論]仔豬血清運(yùn)鐵蛋白存在多態(tài)性，且血清蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能間無(wú)顯著相關(guān)。

關(guān)鍵詞仔豬；血清運(yùn)鐵蛋白；多態(tài)性；體重；體高；體長(zhǎng)

中圖分類(lèi)號(hào)S828文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）01-00128-02

作者簡(jiǎn)介盧福山（1969-），男，青海湟源人，教授，從事獸醫(yī)臨床教學(xué)和動(dòng)物生化遺傳標(biāo)記研究，Email：Lufushan3341@126.com。

收稿日期20131209自1955年Smithies創(chuàng)建淀粉凝膠電泳法以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者采用電泳方法對(duì)不同畜禽品種的血液蛋白、酶、乳蛋白、卵蛋白、精清蛋白等的多態(tài)性及其遺傳機(jī)制進(jìn)行了大量深入研究，這些研究大多用于確定品種間的差異程度，估計(jì)品種間親緣關(guān)系，考證品種的起源、進(jìn)化和馴化過(guò)程[1-4]，或根據(jù)血漿蛋白位點(diǎn)的基因純合度分析群體的近交程度[5]，或利用血漿蛋白多態(tài)性作為遺傳標(biāo)記來(lái)探討早期選種的可能性[6-9]。目前，有關(guān)血液蛋白型與生產(chǎn)性能間的相關(guān)報(bào)道較多，但結(jié)果并不一致[10]。鑒于此，筆者對(duì)青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院實(shí)習(xí)牧場(chǎng)養(yǎng)殖的45日齡仔豬的血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性進(jìn)行研究，并測(cè)量計(jì)算1周前后體重、體長(zhǎng)、體高的平均日增量，以探討血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院實(shí)習(xí)牧場(chǎng)養(yǎng)殖的60頭45日齡仔豬，試驗(yàn)仔豬營(yíng)養(yǎng)良好，臨床健康。

1.2主要試劑膠原液；pH 8.9 Tris-HCl緩沖液；pH 6.9 Tris-HCl緩沖液；Tris-甘氨酸電泳緩沖液（pH 8.3）；10%過(guò)硫酸銨（AP）；四甲基乙二胺（TEMED）考馬斯亮藍(lán)染色試劑；0.1%溴酚藍(lán)；40%蔗糖液等。

1.3主要儀器TDZ4AWS離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)有限公司制造）；DYYIII型電泳儀（北京六一儀器廠制造）。

1.4血樣采集清晨飼喂前，從仔豬前腔靜脈采集非抗凝血5 ml，立即送至實(shí)驗(yàn)室分離血清（3 000 r/min，離心10 min），備用。

1.5生產(chǎn)性能測(cè)定對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行2次體重、體高、體長(zhǎng)測(cè)定，間隔時(shí)間為1周，并記錄數(shù)據(jù)。其中，體高為肩胛最高點(diǎn)到地面的垂直距離，體長(zhǎng)為肩端至坐骨端的距離。

1.6樣品制備取血清0.1 ml，加入40%蔗糖液20 μl，再加入0.1%溴酚藍(lán)20 μl，混勻備用。

1.7垂直平板聚丙烯酰胺凝膠電泳

1.7.1分離膠和濃縮膠組成成分。分離膠和濃縮膠的組成成分見(jiàn)表1。

1.7.2 凝膠制備。取少量分離膠倒入小燒杯中，加入AP和TEMED混勻后立刻灌膠，待膠凝固封底后。在剩余的分離膠中加入AP和TEMED，立即灌膠并覆蓋水層，待凝膠與水層之間出現(xiàn)明顯界面時(shí)，表明分離膠已經(jīng)聚合凝固，用注射器抽掉水層。確定分離膠徹底凝固后，配制濃縮膠，混勻后灌膠，立刻插入樣品槽模板，待膠凝固后取出樣品槽模板（注意垂直向上取出），并將垂直平板底槽去掉，平板移至電泳槽中，并用夾子固定兩側(cè)，將Tris-甘氨酸電泳緩沖液置于垂直平板電泳上、下槽中，并點(diǎn)樣2 μl。

1.7.3電泳。上槽與負(fù)極連接，下槽與正極相連，先調(diào)節(jié)電壓為120 V，開(kāi)始電泳。當(dāng)指示染料進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)至200 V，電泳5 h后停止電泳，斷開(kāi)電源。

1.7.4染色。電泳結(jié)束后，取出垂直電泳平板，將膠片取出，浸入考馬斯亮藍(lán)染色液中染色0.5～1.0 h，再用脫色液漂洗直至背景無(wú)色為止。

1.7.5Tf分型。按照鈴木正三等[11]記載的標(biāo)準(zhǔn)和圖譜判定Tf型，對(duì)少數(shù)區(qū)帶不清晰者進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。

1.8數(shù)據(jù)處理與分析

1.8.1基因型頻率和基因頻率。按照仔豬血清運(yùn)鐵蛋白基因座受一對(duì)共顯性等位基因控制的假設(shè)，根據(jù)實(shí)測(cè)數(shù)用單一計(jì)數(shù)法計(jì)算基因型頻率和基因頻率。

1.8.2相關(guān)性分析。對(duì)仔豬不同運(yùn)鐵蛋白型的生產(chǎn)性能采用t檢驗(yàn)分析差異顯著性。

2結(jié)果與分析

2.1仔豬血清運(yùn)鐵蛋白基因型分布和基因頻率從圖1可以看出，被檢仔豬血清運(yùn)鐵蛋白（Tf）有AB型和BB型2種基因型，且呈多態(tài)性。2種基因型頻率分別為0.333 3和0.666 7，其中BB型為優(yōu)勢(shì)基因型；TfA和TfB等位基因的頻率分別為0.166 7和0.833 3，而TfB為優(yōu)勢(shì)基因。

3討論

3.1仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性血清運(yùn)鐵蛋白作為一種鐵結(jié)合糖蛋白[12]，其合成受到基因的控制，也是基因的一種表達(dá)產(chǎn)物。因此，盡管它具有相對(duì)穩(wěn)定性，但仍以一定的頻率發(fā)生各種形式的變異而形成多態(tài)性。自1957年Smithies采用淀粉凝膠電泳法首次鑒定出Tf的多態(tài)性以后，迄今已在此基因座位發(fā)現(xiàn)了10個(gè)共顯性等位基因，其中TfB為優(yōu)勢(shì)基因，其次是TfA和TfC，其余基因則非常罕見(jiàn)[13]。該研究表明被檢的仔豬群體中因Tf存在AB和BB 2種基因型而呈多態(tài)性，其基因型頻率分別為0.333 3和0.666 7，其中BB基因型為優(yōu)勢(shì)基因型；TfA和TfB基因頻率分別為0.166 7和0.833 3，以TfB為優(yōu)勢(shì)基因。此結(jié)果與黃海根等[14]在華東南地區(qū)部分地方豬群、陶鈞等[15]在湖南地方豬種群的研究結(jié)果相似。

3.2仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與其生產(chǎn)性能相關(guān)性血液蛋白（酶）多態(tài)性作為一種重要的生化遺傳標(biāo)記，已被廣泛應(yīng)用于探討畜禽品種的起源、進(jìn)化及品種間的親緣關(guān)系，并利用這些標(biāo)記進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)，進(jìn)行早期選育的輔助標(biāo)記。利用血清運(yùn)鐵蛋白遺傳標(biāo)記來(lái)研究豬的生產(chǎn)性能的報(bào)道較多[6，8，10]，但存在著較大的分歧。該試驗(yàn)中被檢仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能（體重、體長(zhǎng)和體高）日增量間無(wú)顯著差異（P>0.05），說(shuō)明仔豬血清運(yùn)鐵蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能間的相關(guān)性不顯著。這與吳金亮等[16]在滇玉新品系豬、王彥芳等[17]在甘肅黑豬的研究結(jié)果相一致。

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