章安源 張志民 李淑花 劉道中 （山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所 濟(jì)南 250012）

紅外分光光度法鑒別阿苯達(dá)唑原料

章安源 張志民 李淑花 劉道中 （山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所 濟(jì)南 250012）

本研究建立了阿苯達(dá)唑快速、專屬的鑒別方法。分別采用直接檢測(cè)樣品法和以乙醇為溶劑進(jìn)行提取法，進(jìn)行紅外鑒別。作精密度和比對(duì)分析。乙醇提取法在含量測(cè)定、與標(biāo)準(zhǔn)圖譜相似度較直接監(jiān)測(cè)樣品法有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。結(jié)果表明，本法專屬性好，可準(zhǔn)確地鑒別本品。

紅外分光光度法 阿苯達(dá)唑 溴化鉀

阿苯達(dá)唑(abendazuo)為抗蠕蟲藥，對(duì)于其原料藥鑒別方法為一般的化學(xué)反應(yīng)和紅外吸收?qǐng)D譜。而紅外吸收光譜是有機(jī)化合物的重要特征之一，具有高 度的專屬性和特異性，是藥品檢驗(yàn)中鑒別有機(jī)藥物的重要方法?！坝?guó)藥典2009凡例Ⅱ[1]中說明當(dāng)紅外鑒別用于需要一定預(yù)處理樣品時(shí)，有可能無法達(dá)到嚴(yán)格一致，此時(shí)樣品光譜需與對(duì)照光譜大致相同”。為快速有效地鑒別阿苯達(dá)唑原料藥，本文研究了用兩種不同方法處理阿苯達(dá)唑，對(duì)兩種方法作一定的評(píng)價(jià)。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥 傅立葉65紅外分光光度儀(美國(guó)PE公司)、UV-2550紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)、BT125D電子天平(美國(guó)賽多利斯公司)。阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?中國(guó)藥品生物制品檢定所、批號(hào)100373-200502，純度100.0%)、阿苯達(dá)唑原料(常州亞邦齊暉醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)60118327、60112471、60112017)，無水乙醇、溴化鉀均為分析純。

1.2 方法 （1）直接制備對(duì)照品片及供試品(簡(jiǎn)稱方法1)：將溴化鉀在120℃干燥5h后，取溴化鉀約300mg，置瑪瑙研缽中研細(xì)，壓片，作為溴化鉀空白片。目測(cè)，空白片呈透明狀，上機(jī)后譜圖顯示基線透光率大于75%。取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌放c樣品各約0.5mg，分別與經(jīng)干燥的溴化鉀約70mg，置瑪瑙研缽中混合，研細(xì)后壓片，制得對(duì)照品，供試品。上機(jī)后，扣除空白片背景后，光譜圖顯示基線透光率大于80%。制備的對(duì)照品和供試品透光率均符合紅外圖譜要求。（2）處理后制備對(duì)照品片及供試品(簡(jiǎn)稱方法2)：根據(jù)阿苯達(dá)唑在丙酮中微溶，在乙醇中幾乎不溶，在水中不溶的性質(zhì)，選擇以無水乙醇溶解[2]。取對(duì)照品和供試品適量，分別溶于無水乙醇中，研磨使溶解，濾過，濾液置水浴上蒸干后，105℃干燥1h后[3,4]，取殘?jiān)?，滴?ml左右液狀石蠟，置研缽中研成均勻的糊狀物，取適量糊狀物均勻涂抹與兩個(gè)空白溴化鉀片之間，制得對(duì)照品和供試品。二者的光譜圖顯示基線透光率大于80%。符合檢測(cè)要求。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用spss10.0統(tǒng)計(jì)軟件，檢測(cè)數(shù)據(jù)以x±S表示，兩種方法比較用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗(yàn) 對(duì)照品和供試品各3批，每批進(jìn)行2個(gè)樣品平行試驗(yàn)，同一天不同時(shí)間、不同天重復(fù)3次，所得紅外譜線基本一致[5]。

2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品和供試品各3批，放入干燥器，每隔1h測(cè)定1次，12h內(nèi)所得所得紅外圖譜基本一致。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取對(duì)照品和供試品按每批進(jìn)行2個(gè)樣品平行試驗(yàn)，連續(xù)測(cè)定3批，重復(fù)3次。所得紅外譜線基本一致。

2.4 樣品的含量測(cè)定 取兩種方法制下制備合格的對(duì)照品和供試品，按《中國(guó)獸藥典》紫外-可見分光法測(cè)定阿苯達(dá)唑含量，所有對(duì)照品和供試品含量均合格，符合紅外光譜測(cè)定的要求。（1）對(duì)照品和供試品分別用兩種不同的處理方法(方法1和方法2)連續(xù)進(jìn)行18次盲測(cè)，經(jīng)t檢驗(yàn)分析，結(jié)果表明兩種不同方法測(cè)定對(duì)照品的含量值之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；不同方法測(cè)定供試品的含量值之間的總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果見表1。

表1 二種不同前處理方法測(cè)定含量(±S) (%)

表1 二種不同前處理方法測(cè)定含量(±S) (%)

注：*P＜0.05，下表類同。

測(cè)試方法 對(duì)照品 供試品方法1 99.9±0.10 99.2±0.05方法2 100.0±0.01 99.4±0.26*

2.5 對(duì)照品和供試品紅外圖譜測(cè)定 經(jīng)過計(jì)算機(jī)對(duì)多次測(cè)定得到的對(duì)照品和供試品紅外圖譜進(jìn)行平均化處理，作為紅外標(biāo)準(zhǔn)圖譜[6]，見圖1、2、3、4、5。

圖1 對(duì)照品(方法1)

圖2 供試品(方法1)

圖3 對(duì)照品(方法2)

圖4 供試品(方法2)

圖5 阿苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)圖譜(獸藥典)

2.6 數(shù)據(jù)處理 標(biāo)準(zhǔn)化后的對(duì)照品和供試品圖譜與2010版《獸藥典》提供的阿苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行比較。計(jì)算機(jī)自動(dòng)計(jì)算其相似度，相似度最低限的閾值為90%.0[6]。這些數(shù)據(jù)可以作為評(píng)價(jià)方法1和方法2是否對(duì)紅外圖譜有影響。經(jīng)t檢驗(yàn)分析，結(jié)果表明兩種不同前處理后測(cè)得的對(duì)照品圖譜與標(biāo)注圖譜之間差異不顯著(P＞0.05)；兩種不同方法處理的供試品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜之間差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表2。

表2 兩種不同前處理方法后的譜線比對(duì)試驗(yàn)(x±S) (%)

3 討論

（1）精密度反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性，其中批內(nèi)精密度反映的同1份標(biāo)本在一天內(nèi)使用同一試劑不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性，批間精密度反映的是同1份標(biāo)本在不同天內(nèi)檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性，二者都對(duì)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果常規(guī)檢測(cè)質(zhì)量的評(píng)價(jià)有重要影響[5]。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)照品和供試品分別檢測(cè)3批，每批2個(gè)平行樣品，重復(fù)3次，從結(jié)果表2中可以看出，本試驗(yàn)對(duì)兩種不同方法處理過的對(duì)照品和供試品的圖譜相似度的批內(nèi)、批間CV均小于5%，重復(fù)性好，兩種方法總體間CV符合情況很好，可以滿足紅外圖譜測(cè)定要求；可能是方法2前處理包括藥品的提純及干燥去水的過程，而且制片為非傳統(tǒng)的石蠟糊法制片，因而檢測(cè)的重復(fù)性好，從而可以大大提高紅外檢測(cè)的靈敏度和分析的特異性。是一種較理想的測(cè)定方法。從表1和表2結(jié)果顯示方法2處理過的供試品無論是含量還是與標(biāo)注圖譜的相似度兩個(gè)指標(biāo)都較方法1差異顯著(P＜0.05)。（2）紅外分光光度法已廣泛應(yīng)用于藥物的定性鑒別中。而光譜圖的質(zhì)量很大程度上取決于樣品的制備。對(duì)于原料藥可直接取樣壓片，但如果測(cè)得的光譜圖與《藥品紅外光譜集》所收載的對(duì)照?qǐng)D譜不一致時(shí)，在排除可能影響測(cè)定的外在因素后，可按該藥物光譜圖中備注的方法或藥品標(biāo)準(zhǔn)中該品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行預(yù)處理后，再錄制光譜圖與對(duì)照?qǐng)D譜比對(duì)[7]。本試驗(yàn)對(duì)分析得到的阿苯達(dá)唑圖譜與獸藥典提供的標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行了對(duì)比，阿苯達(dá)唑供試品未經(jīng)處理(方法1)直接壓片后得出的紅外圖譜與《獸藥紅外光譜集》所收載的標(biāo)準(zhǔn)圖譜在1380cm-1處的吸收峰有差異，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較相似度在91%左右。分子的紅外光譜是發(fā)生紅移還是藍(lán)移，是多種因素綜合作用的結(jié)果[8]。目前由多晶型藥物引起紅外光譜的差異占全部晶型藥物的數(shù)量還很有限[9]。丙酮作粉碎或分散促進(jìn)劑情況下，往往會(huì)加速晶型轉(zhuǎn)變[10]，多晶型的變化會(huì)導(dǎo)致紅外光譜的差異，因此，當(dāng)紅外光譜不一致時(shí)，首先應(yīng)考慮樣品的純度是否符合要求，不純的樣品雜質(zhì)檢出率有時(shí)可低至1%[11]。所以本試驗(yàn)設(shè)計(jì)乙醇提取后既能提取有效成份，也可能除去了絕大部分的輔料，而且去掉部分輔料，供試品的純度較高，結(jié)果顯示供試品圖譜的相似度較方法1有提高(P＜0.05)。（3）另外水分的存在也會(huì)使紅外譜圖失真，也應(yīng)考慮采取有效的方法去除水分的干擾。無論是原料藥還是制劑的提取物，對(duì)于非揮發(fā)性或熔點(diǎn)較高(105℃以上)的樣品在壓片前均應(yīng)進(jìn)行干燥處理[12]。阿苯達(dá)唑的熔點(diǎn)在206～212℃，所以經(jīng)過溶劑提取后作者又根據(jù)供試品自身的理化性質(zhì)采用了105℃，時(shí)間在1h。（4）雖然在粉劑樣品制樣中，壓片法是最優(yōu)先選用的方法，但易受潮或空氣而產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，重現(xiàn)性差，用方法2處理過的樣品是使用的石蠟糊法，試驗(yàn)的穩(wěn)定性良好[13]，這是因?yàn)槭灷锏挠唾|(zhì)能包裹住研磨好的粉狀樣品的顆粒表面，樣品如糊狀平鋪于兩塊空白溴化鉀空白片之間，能夠?qū)悠沸纬杀Ｗo(hù)的外環(huán)境，容易得到穩(wěn)定不變的紅外光譜圖。（5）經(jīng)過方法2處理后的對(duì)照品和供試品，測(cè)得的紅外譜線，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行比較，供試品圖譜與標(biāo)注圖譜相似度均在 93.0% 左右，并且特征峰明顯，重現(xiàn)性好。證明了應(yīng)用紅外鑒別阿苯達(dá)唑原料的可行性。因此推斷，輔料和水分均有可能干擾阿苯達(dá)唑的紅外分光光度法測(cè)定。

由圖可見，經(jīng)過處理(方法2)過的阿苯達(dá)唑供試品與《獸藥紅外光譜集》所收載的標(biāo)準(zhǔn)圖譜大體一致。因此，本法可作為阿苯達(dá)唑原料的鑒別方法之一，省時(shí)，準(zhǔn)確。從而更好地為檢測(cè)紅外的任務(wù)服務(wù)。

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S818.9

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1007-1733(2014)04-0005-03

2013–12–23）