戴秀美 王清明 惠涌泉 王秋菊 常維山*

（①山東農業(yè)大學動物科技學院 山東 泰安 271018 ②山東菁華農牧發(fā)展有限公司 山東 諸城③ 山東諸城市皮毛動物研究所）

犬瘟熱是犬類、毛皮動物和部分海洋哺乳動物的一種多發(fā)性、高度接觸性烈性傳染病[1]，病死率差異很大，為30%～80%。早期以雙相熱、結膜炎、支氣管炎、卡他性肺炎、胃腸炎為特征，后期出現明顯的神經癥狀，部分病例足墊過度角質化。自1973年我國首次發(fā)現犬瘟熱以來，該病已給毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經濟損失，是毛皮動物養(yǎng)殖三大疫病之一。雖然犬瘟熱疫苗在中國毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)中得到了推廣應用，但犬瘟熱引起貂、狐和貉等毛皮動物死亡率仍然較高(平均23.2%)[2]。雖然有犬瘟熱疫苗出售，但仍存在免疫失敗現象。為了解使用激素后水貂犬瘟熱免疫效果，2013年9～10月筆者對大連市、諸城市部分水貂養(yǎng)殖場進行了CDV血清學調查與分析。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 2013年9～10月水貂出欄期間對諸城市和大連市部分水貂養(yǎng)殖場進行隨機心臟采血取樣，共100份血清。其中諸城市50份，大連市50份。水貂養(yǎng)殖場均使用齊魯動物保健廠CDV-11株犬瘟熱活疫苗進行犬瘟熱的免疫。

1.1.2 主要試劑及儀器 CDV-Ab ELISA 48孔和96孔檢測試劑盒(美國RB公司生產)、酶標儀、50ml移液槍、50ml排槍、300ml排槍、37℃溫箱、濕盒、黃白槍頭等。

1.2 方法

1.2.1 采血和血清分離 隨機采集的100份血樣，心臟采血后將離心管靜置放置20min，后3000r/min離心3～5min，收集血清置于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 按照美國RB公司CDV-Ab ELISA 檢測試劑盒使用說明步驟進行，以96孔板為例，每板設置陰陽性對照8孔，并加入陰陽性各50ml；待測樣本孔加待測樣本10ml，再加樣本稀釋液40ml；然后陰陽性對照孔和樣本孔每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100ml，用封板膜封住反應板，37℃溫箱孵育60min。棄去液體，在吸水紙上拍干，每孔加入200ml洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，洗板5次。每孔加入底物A、B各50ml，37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50ml，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判定：臨界值= 陰性對照孔平均值+0.15；陰性判定: 樣品D450nm值<臨界值者為犬瘟熱病毒(CDV)抗體陰性；陽性判定：樣品D450nm值>臨界值者為犬瘟熱(CDV)抗體陽性。

2 結果

諸城市部分地區(qū)采集的50份激素貂血清，CDV抗體平均陽性率為36%，本地區(qū)陽性率見表1。大連莊河市部分地區(qū)采集的50份出欄水貂血清，CDV抗體平均陽性率為32%，本地區(qū)陽性率見表2。

表1 山東諸城市部分地區(qū)CDV抗體陽性率 (%)

表2 大連莊河市部分地區(qū)CDV抗體陽性率 (%)

3 小結與討論

犬瘟熱是困擾毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的三大疫病之一，對使用過激素的水貂進行犬瘟熱抗體的監(jiān)測能夠對犬瘟熱免疫效果有比較直觀的了解。于2013年9～10月間對山東諸城市和大連莊河市激素貂的100份血清進行了犬瘟熱抗體ELISA檢測。結果表明山東諸城市和大連莊河市激素貂的CDV抗體平均陽性率相近，為30%左右。在使用相同疫苗免疫的條件下，犬瘟熱抗體陽性率與犬瘟熱疫苗的免疫次數密切相關，已完成犬瘟熱二次免疫的水貂養(yǎng)殖場的抗體陽性率明顯高于只進行過一次免疫及未進行過免疫的。大連莊河市藍店鄉(xiāng)雖然進行過2次犬瘟熱疫苗免疫，但其抗體陽性率仍然較低，主要原因可能是二次免疫時機不對，不能很好地掌握二次免疫間隔時間，導致免疫空白期的出現，造成免疫失敗，犬瘟熱抗體產生量低。

總之，犬瘟熱的有效控制需要合理的疫苗免疫程序。本研究提醒水貂養(yǎng)殖戶：規(guī)范、合理、嚴格的免疫接種至關重要，且一定要重視二次免疫，只有這樣才能產生堅實的疫苗保護力，防止犬瘟熱暴發(fā)造成不必要的經濟損失。

[1]Martella V，Elia G，Buonavoglia C.Canine distemper virus [J]Vet Clin North Am Small Anim Pract, 2008, 38(4): 787-797.

[2]王珺瑋.貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學特性研究[D].南京: 南京農業(yè)大學, 2008