呂冠欣，龔越強(qiáng)，嚴(yán)靜，歐景儀（.佛山市順德區(qū)藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山 58300；.佛山市順德區(qū)桂州醫(yī)院，廣東 佛山 58300）

鼻炎噴劑是佛山市順德區(qū)桂州醫(yī)院研發(fā)的一種醫(yī)院制劑（批準(zhǔn)文號(hào):粵HB20111414），處方含鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星、醋酸潑尼松龍等，具有抗菌、消炎、收縮血管的作用，臨床主要用于治療急慢性鼻炎、鼻黏膜腫脹等。該制劑目前的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)處方中環(huán)丙沙星進(jìn)行了含量測(cè)定；筆者查閱了相關(guān)資料[1-6]，大部分資料只記載該制劑中1種成分的含量測(cè)定方法，并無3種組分同時(shí)測(cè)定的方法。為了提高制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保障用藥安全、有效，本研究參考了類似的多組分同時(shí)測(cè)定的相關(guān)文獻(xiàn)[7-9]，建立了同時(shí)測(cè)定鼻炎噴劑中鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星、醋酸潑尼松龍的高效液相色譜（HPLC）法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠，能更好地控制本品質(zhì)量。

1 材料

1.1 儀器

1260 HPLC儀、G4212B二極管陣列檢測(cè)器、EZChrom色譜工作站（美國Agilent公司）；AG135型電子分析天平（德國梅特勒公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào):171241-201007，供含量測(cè)定用，純度:99.7%）、環(huán)丙沙星對(duì)照品（批號(hào):130451-200302，供含量測(cè)定用，純度:84.9%）、醋酸潑尼松龍（批號(hào):100012-200706，供含量測(cè)定用，純度:99.7%）均來源于中國食品藥品檢定研究院；鼻炎噴劑（順德區(qū)桂州醫(yī)院，批號(hào):130601、130602、130605，規(guī)格:每瓶15 ml，每1 ml中含鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星、醋酸潑尼松龍分別為10、5、0.5 mg）；甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:SHIMADZU Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，4.6 μm）；流動(dòng)相A:甲醇，B:乙腈，C:0.05 mol/L磷酸二氫鉀（含0.25%三乙胺，磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0），梯度洗脫；流速:1.0 ml/min；隨梯度改變紫外檢測(cè)波長分別為207、278、247 nm；柱溫:40℃；進(jìn)樣量:10 μl。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍計(jì)分別為5995、7208、13382，拖尾因子分別為1.07、1.13、1.03，色譜峰與其他峰分離度不低于2.0。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution procedure

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品鹽酸麻黃堿100.23 mg、環(huán)丙沙星109.25 mg、醋酸潑尼松龍10.81 mg，分別置于100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得質(zhì)量濃度分別為0.9993、0.9275、0.1078 mg/ml的對(duì)照品貯備液。分別精密量取上述貯備液10、5、5 ml置于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取鼻炎噴劑1 ml，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方量取輔料，制備不含鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍的陰性樣品（空白基質(zhì)），按“2.3”項(xiàng)下方法操作制得陰性樣品溶液。

2.5 干擾試驗(yàn)

取上述3種溶液進(jìn)樣，結(jié)果在供試品溶液色譜圖中，在對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上無吸收峰，表明空白基質(zhì)中各成分對(duì)測(cè)定結(jié)果未見影響，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.鹽酸麻黃堿；2.環(huán)丙沙星；3.醋酸潑尼松龍F(tuán)ig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative sample；1.ephedrine hydrochloride；2.ciprofloxacin；3.prednisolone acetate

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，配制成一系列不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，含鹽酸麻黃堿為99.93、199.86、399.72、599.58、799.44 μg/ml，環(huán)丙沙星為46.38、92.75、185.50、278.25、371.00 μg/ml，醋酸潑尼松龍為 5.39、10.78、21.56、32.34、43.12 μg/ml，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，結(jié)果見表2。

表2 3種組分的線性關(guān)系（n＝5）Tab 2 Linear ranges of 3 componments（n＝5）

2.7 精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)（130601）的供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍峰面積的RSD分別為0.8%、0.8%和0.7%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（130601）的供試品溶液，分別放置0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍含量的RSD分別為0.3%、0.6%和0.8%（n＝6），表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（130601）樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍含量的RSD分別為0.9%、1.0%和1.3%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗(yàn)

分別精密量取鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍對(duì)照品適量，加入處方比例的陰性基質(zhì)，各配制3種組分分別相當(dāng)于處方量80%、100%、120%的樣品各3份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 3 Results of recovery test（n＝3）

2.11 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再分別精密量取供試品溶液和混合對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 4 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

（1）將對(duì)照品溶液注入色譜儀，以二極管陣列檢測(cè)器在190～400 nm波長處記錄色譜圖，高效液相三維圖顯示，鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍的最大吸收波長分別在207、278、247 nm，因此采用改變檢測(cè)波長的方法，使待測(cè)物質(zhì)能得到最靈敏的結(jié)果。而且，在本研究的色譜條件下，鹽酸麻黃堿、環(huán)丙沙星和醋酸潑尼松龍的保留時(shí)間分別約為5、18、44 min，各峰出現(xiàn)間隔時(shí)間較長，能有足夠的時(shí)間使改變檢測(cè)波長后的圖譜穩(wěn)定、基線漂移不明顯，因而不會(huì)影響分析結(jié)果。

（2）經(jīng)前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相中水相的pH對(duì)組分的峰形有較大影響:pH過高，環(huán)丙沙星峰會(huì)產(chǎn)生前沿現(xiàn)象；pH過低，鹽酸麻黃堿峰會(huì)產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。經(jīng)參閱相關(guān)資料[10]，最終確定pH為3.0±0.1，結(jié)果較為理想。

（3）該制劑原標(biāo)準(zhǔn)中只有環(huán)丙沙星的含量測(cè)定，處方中鹽酸麻黃堿為限用物質(zhì)，應(yīng)有含量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。因此，筆者建立了同時(shí)測(cè)定處方中3種組分的含量測(cè)定方法，結(jié)果表明該方法操作簡便、靈敏度高、分離良好。故本方法可為鼻炎噴劑的生產(chǎn)質(zhì)量控制提供科學(xué)的分析方法，從而完善該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

[1]張秀梅，袁如彩.HPLC法測(cè)定鹽酸麻黃堿滴鼻液中鹽酸麻黃素的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，6（34）:44.

[2]唐雙意，鐘小斌，梁秋云.高效液相色譜法測(cè)定麻黃素祛痰合劑中鹽酸麻黃堿的含量[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，26（4）:561.

[3]徐菊根，邵珠民.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸麻黃堿滴鼻劑中鹽酸麻黃堿的含量[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19（19）:2426.

[4]陸蘊(yùn)，余青.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方鹽酸麻黃堿滴眼液中鹽酸麻黃堿的含量[J].中國藥房，2006，17（12）:939.

[5]武晉考，柴桂珍.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方環(huán)丙沙星各組分含量[J].中國獸藥雜志，2002，36（2）:43.

[6]呂青志，李珂珂，劉德勝，等.HPLC法測(cè)定醋酸潑尼松龍微乳中醋酸潑尼松龍的含量[J].中國藥房，2012，23（4）:373.

[7]白林，魏萍，王瑾，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方環(huán)丙沙星滴鼻液中3組分的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，18（2）:79.

[8]文為，曾嶸.高效液相色譜法測(cè)定強(qiáng)麻滴鼻劑中鹽酸麻黃素和潑尼松龍的含量[J].山西醫(yī)藥雜志，2006，35（3）:270.

[9]林潔.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定滴鼻劑中鹽酸麻黃堿和氫化可的松的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（8）:474.

[10]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:二部[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:412.