王領兄 張婕

摘 要：用鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫高產(chǎn)蛋雞，三次強化免疫后收集所產(chǎn)的高免雞蛋，制備抗鴨坦布蘇病毒卵黃抗體。瓊脂擴散試驗測定該卵黃抗體的效價達1：64，對鴨坦布蘇病毒強毒的攻毒保護率達100 %，為鴨坦布蘇病毒病的綜合防治提供了一種有效的技術手段和實踐參考。

關鍵詞：鴨坦布蘇病毒；卵黃抗體；攻毒保護

Yolk Antibody Preparation of Duck TMU Virus and Immunity Protective Test

Wang Lingxiong1，Zhang Jie2

（1. Chengguan Town Animal Husbandry and Veterinary Station，Datong， Qinghai， 810102；

2. Qiaotou Town Animal Husbandry and Veterinary Station， Datong， Qinghai， 810199）

Abstract： Using duck Tembusu virus inactivated vaccine immune laying hens， after many times of immunization collected the hyperimmune eggs and prepared to yolk antibody against duck Tembusu virus. Antibody titer of the egg yolk in agar diffusion test was up to 1：64， and the attack protection rate of duck Tembusu virus reached 100%. The determination provides an effective technical means and practical reference for the integrated control of duck Tembusu virus disease.

Keywords： duck Tembusu virus； yolk antibody； attack protection

鴨坦布蘇病毒病（Duck Tembusu Virus Disease，DTVD）是由鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu Virus，DTV）引起的一種急性、烈性傳染病，臨床上主要以蛋、種鴨的產(chǎn)蛋量驟然大幅下降為主要特征[1]，該病于2010年春季在我國南方養(yǎng)鴨密集地區(qū)首次暴發(fā)[2，3]，現(xiàn)已呈全國性流行，已成為危害我國養(yǎng)鴨業(yè)的重要疾病之一，給國內養(yǎng)鴨業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失[4-7]。該病傳播速度快，發(fā)病急、發(fā)病率高，目前尚無商品化的疫苗和特效治療藥物，給臨床預防和治療帶來很大困難，本研究用鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫高產(chǎn)蛋雞，多次強化免疫后收集所產(chǎn)的高免雞蛋，制備抗鴨坦布蘇病毒卵黃抗體，并進行了卵黃抗體的免疫攻毒保護試驗，旨在為鴨坦布蘇病毒病的綜合防治提供一種新的技術手段和實踐參考。

1材料與方法

1.1毒株與試驗動物 鴨坦布蘇病毒由青海省動物疫控中心獸醫(yī)實驗室分離并保存；鴨胚、健康雛鴨均選自不含鴨坦布蘇病毒病母源抗體的鴨群；健康蛋雞30只，無疫病感染史。

1.2滅活疫苗的制備 將DTV用滅菌生理鹽水100倍稀釋后接種10日齡鴨胚，收集48～120 h死亡鴨胚的尿囊液，經(jīng)甲醛溶液滅活后作為水相與白油以2∶3的比例進行乳化，獲得油包水型滅活疫苗，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3蛋雞的免疫 以制備的滅活疫苗免疫健康蛋雞30只，首次免疫劑量為0.5 mL/只，間隔14 d后進行第二次免疫，免疫劑量為1.0 mL/只。間隔14 d后進行第三次免疫，免疫劑量為1.5 mL/只。3次免疫的免疫途徑均為頸背部和胸部皮下多點注射。

1.4 卵黃抗體的制備 第三次免疫10 d后開始收集高免雞蛋，無菌操作分離蛋清與蛋黃，將高免蛋黃與滅菌生理鹽水以1∶2的比例攪拌均勻，加入青、鏈霉素至終含量為1 000 U/mL，置 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 抗體效價測定 采用常規(guī)瓊脂擴散試驗方法測定卵黃抗體的抗體效價。

1.6安全檢驗 將制備的高免卵黃抗體皮下接種健康3日齡雛鴨10只，2.0 mL/只，觀察14 d，記錄試驗雛鴨的食欲、精神狀態(tài)以及發(fā)病死亡情況。

1.7免疫攻毒保護試驗 將40只健康7日齡雛鴨隨機分成2組，卵黃抗體免疫組20只，對照組20只，免疫組每只雛鴨皮下接種制備的卵黃抗體0.5 mL，24 h后，免疫組和對照組均肌肉注射DTV強毒，隔離飼養(yǎng)，觀察14 d。

2結果

2.1 卵黃抗體效價測定結果 采用瓊脂擴散試驗方法測定卵黃抗體的瓊擴抗體效價達1∶64。

2.2安全檢驗結果 10只雛鴨食欲、精神狀態(tài)均良好，無任何臨床不適表現(xiàn)。

2.3卵黃抗體免疫攻毒保護試驗結果 如表1所示，卵黃抗體免疫組的20只鴨免疫卵黃抗體24 h后，攻鴨坦布蘇病毒后第3 d有3只鴨出現(xiàn)減食、精神不振、腹瀉癥狀，持續(xù)2 d后逐漸恢復正常，未出現(xiàn)死亡鴨只，保護率達100 %，觀察期結束后隨即挑取10只鴨剖檢，均無肉眼可見的病理變化；對照組的20只雛鴨在攻毒后3 d開始出現(xiàn)減食、精神沉郁、腹瀉癥狀，并部分鴨伴有轉圈、運動失調等輕度的神經(jīng)性癥狀，隨后部分鴨陸續(xù)出現(xiàn)死亡，死亡鴨剖檢可見肝臟腫大、淤血、壞死，脾臟腫大，心肌岀血等病理變化。

3討論

卵黃抗體以其成本低、產(chǎn)量高、簡單快速、安全高效等優(yōu)點，在動物傳染病綜合防控中得到了廣泛應用，尤其在預防和治療雞傳染性法氏囊病、鴨病毒性肝炎等家禽急性傳染病方面發(fā)揮極其重要的作用。鴨坦布蘇病毒病是近年來在我國出現(xiàn)的以鴨產(chǎn)蛋驟然大幅下降為主要特征的一種急性、烈性傳染病，該病傳播速度快、發(fā)病急、發(fā)病率高，主要臨床表現(xiàn)為感染鴨食欲下降直至禁食，同時蛋、種鴨產(chǎn)蛋數(shù)量迅速下降直至停產(chǎn)。正處于高產(chǎn)的種、蛋鴨一旦感染鴨坦布蘇病毒，產(chǎn)蛋率在短時間內急劇下降，將給鴨場帶來巨大的經(jīng)濟損失。由于缺乏特效治療藥物，多數(shù)養(yǎng)鴨場只能選用抗病毒藥物來治療鴨坦布蘇病毒病，治療效果并不理想。而采用鴨坦布蘇病毒抗原免疫蛋雞制成的鴨坦布蘇病毒高免卵黃抗體，通過被動免疫可使鴨獲得堅實的保護力，將是特異性地預防和治療鴨坦布蘇病毒病良好的生物制品。本研究制備的雞源鴨坦布蘇病毒卵黃抗體的瓊擴抗體效價達1∶64，為鴨坦布蘇病毒病的綜合防治提供了一種經(jīng)濟、簡易、安全、有效的技術和方法。王友令等[8]通過人工攻毒試驗研究表明鴨坦布蘇病毒對7日齡雛鴨也有較強的致病性，發(fā)病率達100 %，死亡率達80 %，故本研究選用7日齡雛鴨進行人工攻毒試驗來觀察卵黃抗體對鴨坦布蘇病毒的免疫攻毒保護作用，試驗結果亦表明鴨坦布蘇病毒對未免疫卵黃抗體健康雛鴨的發(fā)病率達100 %（20/20），死亡率達85 %（17/20），與王友令等[8]的研究結果存在高度的一致性，但卵黃抗體免疫組的死亡率為0 %（0/20），保護率達100 %（20/20），說明卵黃抗體能夠有效保護鴨坦布蘇病毒的攻擊。總之，本研究制備的鴨坦布蘇病毒卵黃抗體可以有效預防和治療鴨坦布蘇病毒病， 為鴨坦布蘇病毒病的綜合防治提供了一種有效的技術手段和實踐參考。 （編輯：何芳）

參考文獻：

[1] 陳桂英. 鴨坦布蘇病毒病診斷方法概述[J].動物醫(yī)學進展，2013，34（8）：107-111.

[2] 曹貞貞， 張存， 黃瑜， 等. 鴨出血性卵巢炎的初步研究[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（12）：3-6.

[3] 滕巧泱， 顏丕熙， 張旭， 等. 一種新的黃病毒導致蛋鴨產(chǎn)蛋下降及死亡[J].中國動物傳染病學報， 2010， 18（6）：1-4.

[4] Cao Z， Zhang C， Liu Y， et al. Tembusu virus in ducks， china[J]. E merg Infect Dis， 2011，17（10）：1873-1875.

[5] Zhu W， Chen J， Wei C， et al. Complete genome sequence of duck Tembusu virus， isolated from Muscovy ducks in southern China[J]. J Virol， 2012，86（23）：13119.

[6] 葛平萍， 刁有祥， 唐熠， 等. 鴨坦布蘇病毒山東株的分離鑒定及其特性 [J]. 中國獸醫(yī)學報，2014，34 （1）：30-33..

[7] 王善輝， 李云龍， 成子強. 鴨坦布蘇病毒江蘇XZ株的分離和鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（11）：185-188.

[8] 王友令， 袁小遠， 楊金興， 等. 1株鴨坦布蘇病毒人工感染雛鴨的病理學研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學報， 2013，44（1）：66-70.