李云 賈偉新

摘 要：針對高致病性藍(lán)耳病病毒（PRRSV），農(nóng)業(yè)部動物疫病防控重點(diǎn)開放實(shí)驗室用戊二醛癸甲溴銨溶液對其進(jìn)行了體外殺滅效果試驗，結(jié)果顯示大于或等于0.01%濃度的戊二醛癸甲溴銨溶液可體外完全殺滅PRRSV。根據(jù)結(jié)果建議該消毒劑對PRRSV臨床使用濃度為≥0.01%，即1∶10 000稀釋，但同時也要根據(jù)具體情況具體分析，適當(dāng)提高使用濃度。

關(guān)鍵詞：高致病性藍(lán)耳病病毒；戊二醛癸甲溴銨溶液；體外殺滅效果

Killing Effect Determination of Glutaral and Deciquam Solution to High Pathogenic Porcinereproductive and Respiratory Syndrome Viruse（PRRSV）in Vitro

Li Yun1，2，Jia Weixin2

（1， Guangdong Galloper Veterinary Pharmaceutical Co，. Ltd. ， Zhongsan， Guangdong， 528437；

2. South China Agricultural University， Guangzhou， Guangdong， 510642）

Abstract：In view of high pathogenic porcinereproductive and respiratory syndrome viruse（PRRSV）， Key Laboratory of Animal Disease Control and Prevention of Ministry of Agriculture used glutaral and deciquam solution to test the killing effect in vitro. The result showed the concentration of glutaral and deciquam solution higher than or equal to 0.01% could completely kill the PRRSV in vitro. According to the result， the recommended concentration of this solution for PRRSV is 0.01%， namely 1∶10000 dilution. Higher concentration would be necessary according to different conditions.

Key words：high pathogenic porcinereproductive and respiratory syndrome viruse（PRRSV）； glutaral and deciquam solution； killing effect in vitro

隨著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的迅速和集約化發(fā)展，各種動物疫病不斷出現(xiàn)，消毒劑愈來愈受到人們的重視。在動物廄舍環(huán)境衛(wèi)生中，消毒劑的作用更是十分重要，獸醫(yī)臨床上為防治各種傳染病，使用消毒劑要比其他滅菌方法廣泛得多。

消毒劑種類繁多，常用的有醛類、酚類、醇類、鹵化物、氧化物、表面活性劑和金屬化合物等。消毒劑所含成分和含量的不同決定了它對病原微生物是否有殺滅作用以及完全殺滅所需的劑量[1]。本文作者用戊二醛癸甲溴銨溶液對高致病性藍(lán)耳病病毒進(jìn)行體外殺滅效果測定以確定該消毒劑是否可以殺滅PRRSV以及完全殺滅PRRSV的最低劑量。

1 試驗材料

1.1 受試樣品

受試樣品戊二醛癸甲溴銨溶液，無色澄清液體，含量規(guī)格：100 mL∶戊二醛5 g+癸甲溴銨5 g，由廣東騰駿動物藥業(yè)股份有限公司提供， 批號：11080401。

1.2病毒毒株

測定用病毒為高致病性藍(lán)耳病病毒（PRRSV），由農(nóng)業(yè)部動物疫病防控重點(diǎn)開放實(shí)驗室保存提供[3，4]。

1.3 動物細(xì)胞

猴腎細(xì)胞（Marc-145），由農(nóng)業(yè)部動物疫病防控重點(diǎn)開放實(shí)驗室保存提供。

2 試驗方法

2.1 Marc-145細(xì)胞對戊二醛癸甲溴銨溶液的感受性試驗

將戊二醛癸甲溴銨溶液用3% FBS稀釋成不同的濃度，將細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)液吸出，然后把每個濃度的消毒劑分別接種于細(xì)胞的相應(yīng)孔內(nèi)，接種四個孔， 每孔1 mL。對照組： 只加3% FBS。置37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察，連續(xù)5 d。本試驗重復(fù)3次。

2.2消毒劑對PRRSV的殺滅試驗

試驗組：用DMEM將消毒劑稀釋成不同濃度，PRRSV 原液（ TCID50 =104.2/ 0.1 mL）與等量不同濃度的消毒劑混合（病毒稀釋2倍）；20℃作用20 min，再分別用3% FBS稀釋103倍，使接種到細(xì)胞上的病毒含量能夠?qū)е录?xì)胞產(chǎn)生病變，消毒劑濃度小于或等于0.001%（不影響細(xì)胞正常生長）。然后將細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)液吸出，把上述稀釋好的消毒劑與病毒混合液按消毒劑濃度大小分別依次加入相應(yīng)孔中，即消毒劑PRRSV 混合液加入Marc-145 細(xì)胞培養(yǎng)板孔中； 每個濃度接四個孔，每孔1mL。對照組：陰性對照為3% FBS； 陽性對照為2×103 倍稀釋的PRRSV液（3% FBS稀釋）；消毒劑對照為0.001%的消毒液（3% FBS稀釋）。對照組的每孔加入量為1mL。然后置37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察，連續(xù)5～7 d。本試驗重復(fù)5次。

3 試驗結(jié)果

3.1 Marc-145細(xì)胞對戊二醛癸甲溴銨溶液的感受性試驗

結(jié)果見表1：

結(jié)果表明，試驗組消毒劑濃度小于或等于0.001%時，對PK-15細(xì)胞的生長無明顯影響，即細(xì)胞正常生長，消毒劑濃度大于或等于0.01%時，對細(xì)胞生長有不同程度的影響，即細(xì)胞生長異常，發(fā)生萎縮、脫落、死亡、崩解等，3% FBS對照組，細(xì)胞正常生長。

3.2 戊二醛癸甲溴銨溶液對PRRSV殺滅效果試驗

結(jié)果見表2：

結(jié)果表明，大于或等于0.01%濃度的戊二醛、癸甲溴銨溶液可殺滅PRRSV， 使PK-15細(xì)胞不受病毒感染， 不產(chǎn)生細(xì)胞病變，而且細(xì)胞能正常生長；0.001%濃度的戊二醛癸甲溴銨溶液可殺滅病毒，但殺滅不完全，致使沒被殺滅的病毒所在孔內(nèi)產(chǎn)生較弱細(xì)胞病變或細(xì)胞生長異常；小于或等于0.0001% 濃度的戊二醛癸甲溴銨溶液不能殺滅病毒， 并產(chǎn)生細(xì)胞病變（圓縮、空泡、融合、脫落等） 。在3% FBS 及0.001% 戊二醛癸甲溴銨溶液對照組，細(xì)胞生長正常；在病毒對照組，細(xì)胞受相應(yīng)病毒感染，產(chǎn)生典型細(xì)胞病變。

4分析與討論

戊二醛為醛類消毒藥，可殺滅細(xì)菌的繁殖體和芽孢、真菌、病毒等；癸甲溴銨為雙長鏈陽離子表面活性劑，其季銨陽離子能主動吸引帶負(fù)電荷的細(xì)菌和病毒并覆蓋其表面，阻礙細(xì)菌代謝，導(dǎo)致膜的通透性改變，協(xié)同戊二醛更易進(jìn)入細(xì)菌病毒內(nèi)部，破壞蛋白質(zhì)和酶活性，達(dá)到快速高效的消毒作用。

按照國家標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)用量，戊二醛癸甲溴銨溶液需在臨用前用水按0.025%～0.2%比例稀釋后噴灑或浸泡消毒。噴灑：常規(guī)環(huán)境消毒，1∶2 000～4 000稀釋，疫病發(fā)生時環(huán)境消毒，1∶500～1 000。浸泡：器械、設(shè)備等消毒，1∶1 500～3 000[2，3]。

本測定結(jié)果顯示大于或等于0.01%濃度的戊二醛癸甲溴銨溶液可體外殺滅PRRSV，故建議該消毒劑對PRRSV臨床使用濃度為≥0.01%，即1∶10000稀釋，但同時也要根據(jù)具體情況具體分析，適當(dāng)提高使用濃度。 （編輯：何芳）

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳杖榴主編. 獸醫(yī)藥理學(xué)（第二版）[M]. 中國農(nóng)業(yè)出版社. 2002. 251-263.

[2] 農(nóng)業(yè)部獸藥評審中心編. 獸藥國家標(biāo)準(zhǔn)匯編（第二冊）[M]. 中國農(nóng)業(yè)出版社. 2011.181.

[3] 中國獸藥典委員會編. 中華人民共和國獸藥典（2010年版）[M]. 中國農(nóng)業(yè)出版社. 2011.附錄

[4] 農(nóng)業(yè)部獸藥評審中心. 獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S]. 2010.127.