敖永琴

（重慶市豐都人民醫(yī)院病理科，重慶408200）

接合物蛋白檢測(cè)在甲狀腺乳頭狀微小癌中的臨床診斷意義

敖永琴

（重慶市豐都人民醫(yī)院病理科，重慶408200）

目的探討甲狀腺乳頭狀微小癌中接合物蛋白（CRKL）的表達(dá)及其臨床檢測(cè)意義。方法收集2010－2013年我院收治的120名病人的甲狀腺組織石蠟標(biāo)本，其中30例為直徑＞1cm的甲狀腺乳頭狀癌患者，30例為甲狀腺乳頭狀微小癌患者，30例為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者，30例為未患甲狀腺相關(guān)疾病的患者，采用免疫組化（SP）法檢測(cè)標(biāo)本中CRKL的表達(dá)情況。結(jié)果甲狀腺乳頭狀微小癌組和甲狀腺乳頭狀癌組組中CRKL的表達(dá)陽(yáng)性率及平均吸光度（MOD）高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組和正常甲狀腺組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論CRKL在甲狀腺乳頭狀微小癌中呈高度表達(dá)，臨床上CRKL的檢測(cè)有助于確定甲狀腺乳頭狀微小癌的手術(shù)方案。

甲狀腺腫瘤；乳頭狀瘤；接合物蛋白；甲狀腺乳頭狀微小癌

（Chin J Lab Diagn，2014，18：1615）

接合物蛋白（CRKL）是CRK（CT10regulator of kinase）家族的重要成員之一，它可通過(guò)自身的SH2結(jié)構(gòu)域和氨基末端的SH3結(jié)構(gòu)域與下游的信號(hào)分子結(jié)合形成復(fù)合物，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化和轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［1，2］。研究證實(shí)CRKL在卵巢癌和乳腺癌的發(fā)展中起著十分關(guān)鍵的作用［3，4］，目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于甲狀腺乳頭狀微小癌中CRKL表達(dá)的研究報(bào)道比較少。本研究比較了CRKL在正常甲狀腺組織、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺乳頭狀微小癌以及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的表達(dá)情況，探討CRKL表達(dá)在甲狀腺乳頭狀微小癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2010－2013年我院收治的120名病人的甲狀腺組織石蠟標(biāo)本，其中30例為直徑＞1cm的甲狀腺乳頭狀癌患者，甲狀腺乳頭狀微小癌30例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫30例，30例為未患甲狀腺相關(guān)疾病的患者。所有甲狀腺患者均行手術(shù)病理證實(shí)，術(shù)前均無(wú)化療，放療及免疫治療史，也未合并其他疾病，而對(duì)照組均為未患有與甲狀腺相關(guān)疾病的入院病人。

1.2 試劑

小鼠抗人CRKL單克隆抗體（北京翰譜醫(yī)藥生物研究所生產(chǎn)），辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）以及多聚物輔助試劑（中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）。

1.3 SP染色

采用的CRKL陽(yáng)性表達(dá)切片（SantaCruz公司提供）為陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照采用磷酸緩沖液（PBS）。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。棕黃色片狀或顆粒狀為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，在每張切片上選取5個(gè)高倍視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，采用ImagePro Plus圖像分析系統(tǒng)計(jì)算CRKL的MOD。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x—±s）表示，多組間比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織CRKL的染色情況

甲狀腺乳頭狀微小癌細(xì)胞以及甲狀腺乳頭狀癌的胞膜與胞質(zhì)中出現(xiàn)淺黃色－棕褐色細(xì)顆粒，呈陽(yáng)性表達(dá)（見(jiàn)圖1，2）；結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的部分細(xì)胞可見(jiàn)淺黃色－棕褐色細(xì)顆粒（見(jiàn)圖3）；在正常甲狀腺組織細(xì)胞中幾乎見(jiàn)不到染色顆粒（見(jiàn)圖4）。

圖1 CRKL在甲狀腺乳頭狀癌陽(yáng)性表達(dá)（SP，×200）

圖2 CRKL在甲狀腺乳頭狀微小癌陽(yáng)性表達(dá)（SP，×200）

圖3 CRKL在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫陽(yáng)性表達(dá)（SP，×200）

圖4 CRKL在未患甲狀腺相關(guān)疾病組織陰性表達(dá)（SP，×200）

2.2 CRKL在不同甲狀腺組織中的表達(dá)情況

甲狀腺乳頭狀微小癌組和甲狀腺乳頭狀癌組中CRKL的表達(dá)陽(yáng)性率高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組和未患甲狀腺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組與未患甲狀腺相關(guān)疾病組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組和未患甲狀腺相關(guān)疾病組的MOD低于甲狀腺乳頭狀微小癌組和甲狀腺乳頭狀癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組與未患甲狀腺相關(guān)疾病組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表1 不同甲狀腺組織中CRKL表達(dá)陽(yáng)性率比較

表2 不同甲狀腺組織中MOD比較

3 討論

甲狀腺乳頭狀微小癌是一種比較特殊的甲狀腺乳頭狀癌，其生長(zhǎng)緩慢，不易被察覺(jué)，預(yù)后較好，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，可轉(zhuǎn)移至全身而威脅患者生命。因此，找到一種特異性的對(duì)癌細(xì)胞惡性增殖起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用的分子，對(duì)臨床治療疾病有著重要意義。接合物蛋白CRKL參與了影響細(xì)胞生存的一系列基本生理活動(dòng)，并且CRKL與患者惡化、預(yù)后緊密相關(guān)。作為一種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，CRK蛋白可以通過(guò)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。CRKL是CRK家族成員之一，含有一個(gè)SH2結(jié)構(gòu)域以及兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域（呈串聯(lián)排列）。SH2結(jié)構(gòu)域可與整合蛋白結(jié)合，能使Cas、CasL／HEFl等發(fā)生酪氨酸磷酸化，SH3結(jié)構(gòu)域則可以與下游富含脯氨酸的蛋白等信號(hào)分子結(jié)合形成“黏著斑”復(fù)合物，如Dockl80、Sos、C3G、ABL和P13K等［5］，從整合蛋白將信號(hào)傳遞給Rac，使腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附、轉(zhuǎn)移加快［6］。CRKL去磷酸化后可激活C3G，C3G促進(jìn)Rapl與GDP分離，然后與GTP結(jié)合，從而引起羧基末端絲氨酸的磷酸化，再通過(guò)MAPK途徑促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、增殖及分化［7］。本研究結(jié)果顯示，與正常甲狀腺組織和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫相比，直徑超過(guò)1cm的甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺乳頭狀微小癌組織中CRKL表達(dá)率和MOD明顯增高。CRKL蛋白在甲狀腺乳頭狀微小癌中過(guò)度表達(dá)，對(duì)促進(jìn)甲狀腺乳頭狀微小癌的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移起推動(dòng)作用。CRKL蛋白可能通過(guò)整合信號(hào)通路使腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和浸潤(rùn)增加，促進(jìn)甲狀腺乳頭狀微小癌的發(fā)生發(fā)展［8］。由此可以推測(cè)，通過(guò)拮抗或抑制CRKL蛋白的表達(dá)及阻斷其信號(hào)通路中的蛋白分子可能會(huì)使甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生和發(fā)展受到阻礙。

綜上所述，CEKL在甲狀腺乳頭狀微小癌和甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)無(wú)差異，這可能與二者具有相同的生物學(xué)特性有關(guān)，由此可推測(cè)甲狀腺乳頭狀癌的手術(shù)治療方案可能對(duì)甲狀腺乳頭狀微小癌行之有效，故二者可以采用相同的手術(shù)方式進(jìn)行治療，對(duì)甲狀腺乳頭狀微小癌也可行頸部淋巴結(jié)清掃，以徹底清除癌細(xì)胞。

［1］楊香山，程紹梅，郭京艷，等.接合物蛋白在甲狀腺乳頭狀微小癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2013，16（10）：3444.

［2］倪慶鋒，田 原，陶金秋，等.接合物蛋白CRKL促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2013，7（16）：7467.

［3］Wang J，Che YL，Li G，Liu B，et al.Crk and Crkl present with different expression and significance in epithelial ovarian carcinoma［J］.Mol Carcinog，2011，50（7）：506.

［4］Zhao T，Miao Z，Wang Z，et al.Overexpression of CRKL correlates with malignant cell proliferation in breast cancer.Tumour Biol［J］.2013，34（5）：2891.

［5］沈太敏，趙純?nèi)w 涌，等.接合物蛋白Crk和CrkL在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及意義［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2008，11（6A）：940.

［6］Wang H，Linghu H，Wang J，et al.The role of Crk／Dock180／Racl pathway in the malignant behavior of human ovarian cancer cell SKOV3［J］.Tumour Biol，2010，31（1）：59.

［7］Gotoh T，Hattori S，Nakamura S，et al.Identification of Rap1as a target for the Crk SH3domain－binding guanine nucleotide－releasing factor C3G［J］.Mol Cell Biol，1995，15（12）：6746.

［8］Linghu H，Tsuda M，Makino Y，et al.Involvement of adaptor protein Crk in malignan feature of human ovarian cancer cell line MCAS［J］.Oncogene，2006，25（25）：3547.

Clinical Diagnosis Significance of Conjugates of Proteins in Detecting Papillary Thyroid Microcarcinoma

AO Yong－qin.

（Department of Pathology，F(xiàn)engdu people＇s Hospital In Chongqing，Chongqing408200，China）

ObjectiveTo investigate the expression of conjugates of proteins and its clinical significance in detecting papillary thyroid microcarcinoma（CRKL）.MethodsThe thyroid tissue specimens of 120patients in our hospital from 2010to 2013were collected，including 30cases of patients whose papillary thyroid carcinoma was of diameter greater than 1cm，30cases of patients with papillary thyroid microcarcinoma，30cases with nodular goiter，and 30patients without thyroid disease.The immunohistochemical（SP）method was used to detect the expression of CRKL in specimens.ResultsThe positive rate of CRKL and average absorbance expression（MOD）in the groups of thyroid papillary microcarcinoma and of thyroid papillary carcinomais were higher than those of nodular goiter and normal thyroid groups，and the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion CRKL is highly expressed in papillary thyroid microcarcinoma，and clinical test with CRKL is helpful to determine the operation scheme for the treatment of papillary thyroid microcarcinoma.

Thyroid Neoplasms；Papilloma；Junction Protein；Papillary Thyroid Microcarcinoma

R736.1

A

2013－11－25）

1007－4287（2014）10－1615－03