崔振峰，魏永強(qiáng)，韓肖聰，李越超，紀(jì)曉娜，張學(xué)偉

（1.長春工程學(xué)院理學(xué)院，長春130012；2.長春旭陽汽車橡塑制品有限公司，長春130033）

自從1962年美國海洋生物學(xué)家蕾切爾·卡遜（Rachel Carson）出 版 《寂 靜 的 春 天 》（Silent Spring），人們不再只看到農(nóng)藥帶來的好處，而是越來越多地關(guān)注到了其副作用。雖然最初這部作品也引起了學(xué)者的諸多爭議，但今天看來農(nóng)藥的危害已經(jīng)引起了人們的足夠重視。

監(jiān)控農(nóng)藥使用過程中對(duì)農(nóng)田環(huán)境造成的直接污染[1]，關(guān)注農(nóng)藥使用過程中的殘留行為[2]對(duì)環(huán)境的危害，以及農(nóng)藥的殘留對(duì)處在生物鏈較高端的人和動(dòng)物的影響，是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。2005年1月17日，美國公布了兩項(xiàng)關(guān)于修改噻嗪酮?dú)埩粝蘖康姆ㄒ?guī)。法規(guī)涉及的產(chǎn)品包括部分水果和蔬菜，分別對(duì)以下食品內(nèi)或表面的殺蟲劑噻嗪酮（Bruprofezin）制定如下限量：萵苣頭：5.0×10－6；萵苣葉：13.0×10－6；蔬菜、蔬菜用葫蘆9組：0.50×10－6；水果、柑橘10組：2.5×10－6；柑橘的干果肉7.5×10－6；柑橘油：80×10－6。歐盟對(duì)茶葉中噻嗪酮?dú)埩舻淖畲笙蘖慷?.05mg·kg－1。盡管國內(nèi)對(duì)農(nóng)藥危害的研究起步較晚，但發(fā)展很快，我國對(duì)糧食和茶葉中噻嗪酮?dú)埩袅恳沧隽讼嚓P(guān)規(guī)定。

國外關(guān)于噻嗪酮?dú)埩舻臋z測有相關(guān)報(bào)道[3]，色譜法是比較先進(jìn)的檢測手段[4]。農(nóng)藥對(duì)土壤[5]以及水體等自然環(huán)境帶來負(fù)面影響，直接影響到生物的生長和發(fā)育[6]，也可能形成短期不易察覺的長期影響。關(guān)注環(huán)境保護(hù)，農(nóng)藥在環(huán)境中的降解也成為研究熱點(diǎn)[7]。國內(nèi)關(guān)于茶葉[8]、蔬菜[9]、水果中噻嗪酮?dú)埩舻臋z測[10]也有報(bào)道。

噻嗪酮（結(jié)構(gòu)如圖1）的熔點(diǎn)104.5～105.5℃，分子量305.44，沸點(diǎn)273℃（12torr）。在結(jié)構(gòu)式中有苯環(huán)的Ⅱ66，具有較強(qiáng)的紫外吸收，適用于二極管陣列檢測器（DAD）。需要特別指出，在噻嗪酮的結(jié)構(gòu)中盡管雜原子N、S、O均有孤對(duì)電子，但與苯環(huán)及相互之間都不在同一平面，無法形成更大共軛體系的多中心П鍵。但這并不影響采用高效液相色譜法（HPLC－DAD）檢測噻嗪酮的殘留。

圖1 噻嗪酮的分子結(jié)構(gòu)式

關(guān)于茶葉中噻嗪酮的殘留量的不確定度胡貝貞等[11]人做了簡單的分析，本文將以芹菜為例評(píng)定HPLC－DAD檢測蔬菜中的噻嗪酮的不確定，為噻嗪酮的不同檢測方法提供對(duì)比依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑和樣品

安捷倫HPLC 1100液相色譜儀（配備自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測器、十八烷基鍵合固定相液相色譜柱）；AL104萬分之一電子天平，梅特勒托利多儀器（上海）有限公司；KQ－100E型超聲波清洗器，江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；冷凝旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申生有限公司；WKY型微量移液器，上海榮泰生化工程有限公司；OCEAN過濾器（0.45μm的水系和有機(jī)系濾膜）；噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg·mL－1），國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心GBW（E）060547；甲醇（色譜純），水（超純水），其他試劑為分析純。

1.2 色譜分析

流動(dòng)相甲醇∶水（V／V）＝80∶20；流速1.0mL·min－1；柱溫30.0℃；DAD檢測波長230nm。在該色譜條件下分析樣品，保留時(shí)間為4.633min。

1.3 農(nóng)殘?zhí)崛》椒?/h3>

取一定量的芹菜樣品，準(zhǔn)確稱量重量為m（g）。攪拌機(jī)打碎混勻后，依次加入15g氯化鈉、200mL丙酮、50mL二氯甲烷，勻漿1min后，置于超聲波清洗儀中震蕩20min，使混合均勻，之后經(jīng)過濾器過濾，將濾液置于分液漏斗中靜置分層，取上清液傾入500mL燒杯中，加入活性炭脫色120min，脫色后的液體中再加入30g無水硫酸鈉，不斷震蕩，靜止15min后，取裝有無水硫酸鈉的漏斗，以少許二氯甲烷洗滌無水硫酸鈉，合并濾液，用蒸餾裝置在30～40℃下將洗脫液濃縮近干，取出濃縮液在室溫下?lián)]干，用甲醇溶解，并準(zhǔn)確定容到體積V mL，用0.45μm的針頭過濾器過濾，待分析。

2 建立數(shù)學(xué)模型

芹菜樣品中噻嗪酮的殘留量按式（1）計(jì)算：

式中：X為芹菜中含噻嗪酮的質(zhì)量濃度，μg·g－1；A為對(duì)應(yīng)色譜峰面積，mAU·s；F為色譜分析時(shí)的進(jìn)樣體積，μL。V 為樣品提取后定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

3 不確定度分析

芹菜中噻嗪酮的殘留檢測步驟如圖2所示，不確定度的來源包括農(nóng)殘?zhí)崛?、檢測、外標(biāo)曲線和分析儀器4個(gè)方面。

圖2 芹菜中噻嗪酮?dú)埩舻姆治鲞^程

3.1 農(nóng)殘?zhí)崛∫氲牟淮_定度

3.1.1 稱取蔬菜樣品引入的不確定度

用電子天平稱取90g芹菜樣品，引起的不確定度為：

相對(duì)不確定度為：

3.1.2 樣品定容引入的不確定度

10mL容量瓶的定容最大允許誤差為±0.01mL，視為矩形分布，取分布因子樣品提取過程中由定容引入的不確定度為：

由樣品定容引入的相對(duì)確定度為：

由農(nóng)殘?zhí)崛∫氲南鄬?duì)不確定度分量為：

3.2 農(nóng)殘檢測引入的不確定度

對(duì)芹菜樣品進(jìn)行噻嗪酮農(nóng)殘分析，取樣質(zhì)量m＝90g，定容體積V＝10mL，進(jìn)樣體積F＝5μL，重復(fù)檢測的峰面積分別為41.1，40.7，45.7，43.5和42.1mAu·s，將檢測的峰面積（A）帶入式（1），芹菜中噻嗪酮的殘留量分別為：0.482，0.481，0.497，0.490和0.486μg·g－1。平均值

單次檢測的標(biāo)準(zhǔn)差為：

平均質(zhì)量濃度的不確定度為：

由農(nóng)殘檢測引入的相對(duì)不確定度分量為：

3.3 外標(biāo)曲線引入的不確定度

用噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0mg·mL－1）配置不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中，按進(jìn)樣量F＝5μL進(jìn)行色譜分析。以峰面積對(duì)噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度做外標(biāo)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Area＝35.138C－1 113.1，線性最小二乘法擬合的相關(guān)系數(shù)為0.999 65。

3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)品的說明書中顯示，1.0mg·mL－1噻嗪酮農(nóng)殘級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)不確定度為0.2%。

3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)稀釋過程引入的不確定度

采用10mL容量瓶稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，由標(biāo)準(zhǔn)品定容引入的相對(duì)不確定度為：

由外標(biāo)曲線引入的相對(duì)不確定度分量為：

3.4 分析儀器引入的不確定度

3.4.1 進(jìn)樣器引入的不確定度

高效液相色譜分析采用自動(dòng)進(jìn)樣，定量環(huán)的誤差為±0.10μL，按矩形分布處理，進(jìn)樣引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

進(jìn)樣體積F＝5μL時(shí)的相對(duì)不確定度為：

3.4.2 二極管陣列檢測器引入的不確定度

檢測器的波長精度為±1nm，按矩形分布處理，由檢測器引入的不確定度為：

在230nm波長下檢測樣品的相對(duì)不確定度為：

由分析儀器引入的相對(duì)不確定度分量為：

3.5 合成相對(duì)不確定度計(jì)算

由上述各相對(duì)不確定度分量合成芹菜中噻嗪酮?dú)埩袅康牟淮_定度為：

3.6 擴(kuò)展不確定度

按置信概率P＝95%時(shí)，取k＝2。則芹菜樣品噻嗪酮?dú)埩袅繙y定的相對(duì)擴(kuò)展不確定度為：

故其擴(kuò)展不確定度為：

該芹菜樣品中的噻嗪酮?dú)埩袅勘硎緸椋?/p>

4 結(jié)語

評(píng)定了蔬菜中噻嗪酮農(nóng)藥殘留的高效液相色譜檢測方法的不確定度，相對(duì)擴(kuò)展不確定度為2.70%，說明該方法結(jié)果可靠。該評(píng)定方法的建立，可以為其他蔬菜中農(nóng)殘檢測的高效液相色譜法不確定度分析提供參考。

[1]董婷.超高效液相色譜法測定稻田水和土壤中噻嗪酮的殘留量[J].廣州化工，2013，41（8）：129－131.

[2]張存政，孫星，張志勇，等.噻嗪酮在茶園環(huán)境中的殘留行為研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29（8）：1483－1489.

[3]Hernández－Borges J，Cabrera J C，Rodríguez－Delgado M á，etc.Analysis of pesticide residues in bananas harvested in the Canary Islands（Spain）[J].Food Chemistry，2009，113（1）：313－319.

[4]Rajski?，Lozano A，Uclés A，etc.Determination of pesticide residues in high oil vegetal commodities by using various multi－residue methods and clean－ups followed by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2013，1304：109－120.

[5]張仙，王明明，劉軍，等.氣相色譜法測定土壤中的噻嗪酮[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（22）：4713－4716.

[6]王坤英，趙俊偉，李寧寧，等.噻嗪酮對(duì)黑斑蛙胚胎發(fā)育和蝌蚪生長的影響及血細(xì)胞DNA損傷效應(yīng)[J].河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，35（4）：203－206.

[7]李超，潘榮清，唐超西，等.噻嗪酮降解菌BF3的分離、鑒定及降解特性[J].中國環(huán)境科學(xué)，2011，31（6）：965－970.

[8]上官良敏.茶葉中亞胺硫磷、噻嗪酮和噠螨靈的氣相色譜—離子阱二級(jí)質(zhì)譜測定[J].亞熱帶植物科學(xué)，2011，40（3）：57－59.

[9]朱莉萍，董靜，孫軍，等.分散型固相萃取—?dú)庀嗌V法測定蔬菜及其制品中滅線磷、嘧酶胺、莠去津、氟硅唑、噻嗪酮、異丙威殘留量[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（8）：79－82.

[10]張新忠，羅逢健，張芬，等.分散固相萃取凈化氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉、西葫蘆和芒果中噻螨酮和噻嗪酮?dú)埩袅縖J].分析化學(xué)，2012，40（11）：1686－1692.

[11]胡貝貞，蔡海江，宋偉華.茶葉中氟蟲腈等8種農(nóng)藥殘留的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定及不確定度評(píng)定[J].色譜，2012，30（9）：889－895.