盧德權(quán)

(佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院附屬陳村醫(yī)院，廣東 佛山 528313)

人絨毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的糖蛋白激素，由α、β兩個(gè)亞單位和237個(gè)氨基酸組成[1]。通過(guò)對(duì)HCG定量的檢測(cè)．可以輔助診斷妊娠及與妊娠有關(guān)的疾?。貏e是對(duì)惡性葡萄胎及絨毛膜癌的治療以及病情監(jiān)測(cè)有重要的意義。由于α亞基與其他激素(LH、FSH、TSH)有共同的抗原性，β亞基則有其特異性，所以臨床應(yīng)用多以β亞基作為靶抗原來(lái)檢測(cè)HCG，故又稱(chēng)為β-HCG[2]。滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的患者血清β-HCG值遠(yuǎn)高于20萬(wàn)mIU/ml，甚至幾百萬(wàn)mIU/ml．但現(xiàn)有的檢測(cè)方法檢測(cè)血β-HCG的線性上限均不超過(guò)10000 mIU/ml．對(duì)這部分患者的β-HCG無(wú)法準(zhǔn)確定量，以觀察β-HCG測(cè)定值隨患者的病情變化情況。臨床實(shí)驗(yàn)室多采用樣本稀釋后檢測(cè)乘上稀釋倍數(shù)報(bào)告臨床，但所用稀釋液各有不同。

對(duì)于檢測(cè)超過(guò)線性范圍的結(jié)果必須進(jìn)行稀釋?zhuān)?dāng)然，只有廠家推薦的或?qū)嶒?yàn)室已證實(shí)可用的稀釋液才能用于稀釋樣本[3]。因此本文通過(guò)選用HCG稀釋液、零值血清、生理鹽水和蒸餾水作為稀釋液．對(duì)高濃度β-HCG血清樣本進(jìn)行稀釋后測(cè)定，以觀察不同稀釋液對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，為選擇適合的樣本稀釋液提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 西門(mén)子ADVIA centaur電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與配套的β-HCG試劑。β-HCG檢測(cè)的線性范圍為0．1～10000 mIU/ml，總精密度CV<6%。HCG稀釋液(Diluent)為廠家推薦作為儀器檢測(cè)HCG項(xiàng)目超過(guò)線性范圍上限時(shí)的樣本稀釋液。

1.2檢測(cè)對(duì)象 到我院就診的妊娠相關(guān)疾病患者高濃度β-HCG血清樣本1例，β-HCG測(cè)定值為9770 mIU/ml。

1.3方法 抽取受檢者靜脈血2 ml，3000 r/min分離血清。零值血清吸取當(dāng)天體檢樣本中男性血清混勻制成，要求無(wú)溶血、無(wú)脂血、無(wú)污染、無(wú)纖維凝塊。生理鹽水為東莞市普濟(jì)藥業(yè)有限公司生產(chǎn),規(guī)格為500 ml/4．5 g。蒸餾水為自制去離子水。零值血清．生理鹽水，以及蒸餾水β-HCG測(cè)定值均<0.01 mIU/ml。原值血清用HCG稀釋液，零值血清，生理鹽水和蒸餾水四種不同稀釋液分別稀釋?zhuān)♂尡壤謩e為1∶5，1∶10，1∶20～1∶640稀釋?zhuān)?個(gè)稀釋比例，稀釋后樣本均進(jìn)行雙份測(cè)定。

1.4質(zhì)量控制 室內(nèi)指控品采用寶迪免疫質(zhì)控品，高值和低值兩個(gè)濃度水平。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13．0，結(jié)果比較采用計(jì)算相對(duì)偏差和相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

原值血清用HCG稀釋液，零值血清，生理鹽水和蒸餾水四種不同稀釋液稀釋后血清β-HCG檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1用四種稀釋液稀釋高濃度β-HCG血清后的測(cè)定結(jié)果(mIU/ml)

稀釋后樣本β-HCG測(cè)定值取雙份測(cè)定值,的平均值，與原值血清的理論濃度進(jìn)行比較，并計(jì)算偏差結(jié)果見(jiàn)表2。原值血清樣本β-HCG檢測(cè)結(jié)果為9770．00 mIU/ml。

從表2可以看出．HCG稀釋液稀釋原值血清后．測(cè)定值與原值稀釋后的理論值比較，其偏差為-9．6%～1．04%，1∶640稀釋的時(shí)候，偏差>6%，達(dá)到-9．6%。零值血清稀釋后的測(cè)定值與原值稀釋后理論值比較，偏差為-1．46%～5．56%，從1∶5，1∶640時(shí)，其偏差均<6%。而生理鹽水稀釋后的測(cè)定值與原值稀釋后的理論值比較，偏差為-17．58%～3．03%，生理鹽水從稀釋比為1∶320時(shí)。其偏差大于6%，達(dá)到～12．69%。蒸餾水稀釋后的測(cè)定值與原值稀釋后的理論值比較，偏差為-2．70%～l3．25%,稀釋比為1∶40時(shí)，偏差就超過(guò)6%，達(dá)到9．79%。

表2 不同稀釋液稀釋后β-HCG測(cè)定值與樣本理論值的比較(mIU/ml)

由統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后，零值血清組，與生理鹽水組，蒸餾水組比較，差異有非常顯著性(P<0．01)，HCG稀釋液組，與生理鹽水組，蒸餾水組比較，差異有非常顯著性(P<0．01)。其余各組之間比較差異無(wú)顯著性(P>0．05)。HCG稀釋液組、零值血清組、生理鹽水組、蒸餾水組各稀釋比測(cè)定值的均值分別與理論值進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3HCG稀釋液組、零值血清組、生理鹽水組、蒸餾水組測(cè)定值相關(guān)性分析比較

稀釋液回歸方程相關(guān)系數(shù)HCG稀釋液Y=0.96X+3.510.99998零值血清Y=0.99X+3.190.999987生理鹽水Y=0.94X+5.590.99984蒸餾水Y=0.97X+18.930.99964

表3結(jié)果顯示四種稀釋液稀釋樣本后，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0．999以上。但零值混合血清相關(guān)系數(shù)更接近于1，稀釋樣本后的斜率與截距最小。而HCG稀釋液、生理鹽水及蒸餾水的截距均較零值血清高，蒸餾水的截距高達(dá)18．93。

3 討 論

B．HCG測(cè)定對(duì)早孕和妊娠相關(guān)疾病的診斷、療效觀察等有重要意義，其血清β-HCG濃度常常超過(guò)試劑的測(cè)量范圍，需要進(jìn)行稀釋后進(jìn)行檢測(cè)。電化學(xué)發(fā)光免疫法(ECLIA)是由瑞士Roche公司推出的標(biāo)志免疫檢測(cè)方法，ECLIA時(shí)抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)是在一定的介質(zhì)環(huán)境中進(jìn)行的，影響介質(zhì)性能的主要原因有蛋白質(zhì)、pH值、離子強(qiáng)度和其他血清成分如脂質(zhì)、特有離子等，介質(zhì)成分的改變會(huì)直接影響結(jié)合反應(yīng)的結(jié)果[6]。

臨床檢測(cè)分析時(shí)，高濃度β-HCG樣本血清常需稀釋后檢測(cè)。稀釋液不同．則檢測(cè)結(jié)果存在不同程度的差異，可能與基質(zhì)效應(yīng)有關(guān)。從表2可以看出四種稀釋液稀釋血清后，零值血清稀釋原值皿清后，偏差最小，HCG稀釋液次之，生理鹽水尚可，蒸餾水偏差最大：HCG稀釋液在1∶640時(shí)，其偏差達(dá)到-9．60%．生理鹽水在1∶320時(shí)。其偏差達(dá)到12．69%，蒸餾水在1∶40時(shí)，偏差達(dá)到了9．79%，而零值血清從1∶5到1∶640，其偏差均<6%。這種偏差主要由稀釋及基質(zhì)效應(yīng)造成。表3結(jié)果顯示四種稀釋液稀釋樣本后，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0．999以上。但零值混合血清相關(guān)系數(shù)更接近于1，稀釋樣本后的斜率與截距最小。而HCG稀釋液、生理鹽水及蒸餾水的截距均較零值血清高，蒸餾水的截距高達(dá)18．93。零值血清的蛋白質(zhì)、pH值、離子強(qiáng)度和其他血清成分與樣本血清基本相近，其測(cè)定結(jié)果偏差最小[5]。HCG稀釋液為廠家提供給所有超線性范圍項(xiàng)目稀釋所用．為廠家推薦的稀釋液，其成分比較接近于血清，基質(zhì)效應(yīng)相對(duì)較小．所以原值血清用HCG稀釋液稀釋后測(cè)定值與理論值比較偏差也相對(duì)較小。生理鹽水的pH值、離子強(qiáng)度與血清相近，但無(wú)蛋白質(zhì)和血清成分，測(cè)定結(jié)果偏差較大；蒸餾水的pH值、離子強(qiáng)度與血清相差較大，亦無(wú)蛋白質(zhì)和血清成分，故偏差最大[6]。

所以，在做血清β-HCG稀釋檢測(cè)時(shí)，最好選用零值血清作為稀釋液，如男性血清或具有其他種族差異的混合血清。HCG稀釋液結(jié)果也比較可靠，但價(jià)格昂貴。生理鹽水具有便宜、經(jīng)濟(jì)、相對(duì)可靠的優(yōu)點(diǎn)，一般要求下也可作稀釋液，蒸餾水不宜作為稀釋液。同時(shí)建議實(shí)驗(yàn)室在編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序時(shí)，有必要規(guī)范樣本稀釋程序．以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

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