郝 琴，陳美霓

(延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西延安716000)

國(guó)際癌癥研究中心數(shù)據(jù)表明，2008年肺癌占全世界惡性腫瘤病死率第一位，占總病死率12.7%［1］。肺癌有發(fā)現(xiàn)晚、轉(zhuǎn)移早、病死率高等特點(diǎn)，即使接受標(biāo)準(zhǔn)化的治療，目前進(jìn)展性的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者中位生存時(shí)間約10個(gè)月［2］。癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移依賴(lài)新生血管的形成，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是最有效的促血管生長(zhǎng)因子。而目前認(rèn)為，E-鈣黏附素(E-cad)與腫瘤侵潤(rùn)性生長(zhǎng)和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切。2014年3～5月，我們采用免疫組化法檢測(cè)52例份NSCLC組織及11例份良性病變肺組織中VEGF、E-cad，觀察其表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年1月～2013年9月延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科存檔的NSCLC病理組織標(biāo)本52例份(觀察組)，患者男36例，女16例;所有患者均經(jīng)病理證實(shí)，且未行放化療。肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1999年WHO/IASLC肺和胸膜組織學(xué)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)［3］。其中鱗癌31例，腺癌18例，其他類(lèi)型癌3例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者37例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例;TNM分期Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期35例;分化程度為高6例，中25例，低21例。另選良性病變肺組織標(biāo)本11例份作為對(duì)照組，其中炎性病變5例，肺結(jié)核6例。兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2 主要試劑 兔抗人多克隆抗體VEGF、鼠抗人多克隆抗體E-cad及S-P試劑盒購(gòu)自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，DAB底物顯色劑購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.3 VEGF和E-cad的檢測(cè) 采用免疫組化SP法，抗原修復(fù)采用枸櫞酸鈉緩沖液高壓熱修復(fù)，其他步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。兔抗人VEGF抗體、鼠抗人E-cad抗體工作濃度均為1∶100，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):參照文獻(xiàn)［4］。VEGF:胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞;E-cad:包膜中見(jiàn)到棕黃色顆粒分布為陽(yáng)性，以病理科VEGF和E-cad陽(yáng)性的胃癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照。在400倍鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野，每個(gè)視野隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，將其染色陽(yáng)性的細(xì)胞相加再除以5，即得該例腫瘤細(xì)胞的陽(yáng)性率(%)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%定為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。兩組間比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法分析VEGF與E-cad間及與NSCLC臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組VEGF、E-cad表達(dá)比較 觀察組、對(duì)照組VEGF 陽(yáng)性率分別為 71.15%(37/52)、18.18%(2/11)，兩組比較，P ＜0.01;E-cad 陽(yáng)性率分別為57.69%(30/52)、90.91%(10/11)，兩組比較，P ＜0.05。

2.2 VEGF、E-cad陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，VEGF、E-cad表達(dá)與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度有關(guān)(P均＜0.05)，與其余病理參數(shù)無(wú)關(guān)(P均＞0.05)。

表1 VEGF、E-cad陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 觀察組VEGF和E-cad表達(dá)的關(guān)系 觀察組VEGF表達(dá)與E-cad表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=－0.373，P＜0.01)。

3 討論

世界范圍內(nèi)，肺癌已成為發(fā)病率和病死率增長(zhǎng)速度最快的惡性腫瘤，對(duì)人類(lèi)的健康和生命造成巨大威脅。據(jù)中國(guó)腫瘤登記中心數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)2008年肺癌發(fā)病率為52.1萬(wàn)，死亡人數(shù)約45.2萬(wàn)，病死率居惡性腫瘤第一位，近年來(lái)有明顯快速增長(zhǎng)趨勢(shì)［5］。

VEGF是內(nèi)皮細(xì)胞特異性有絲分裂原，通過(guò)與其內(nèi)皮細(xì)胞膜上的受體結(jié)合而發(fā)揮作用，產(chǎn)生多種功能:①促進(jìn)生成新的血管。通過(guò)與血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性受體結(jié)合，促進(jìn)動(dòng)、靜脈以及淋巴管來(lái)源的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)［6］。②增加血管通透性。小囊液泡器(VVO)是位于微靜脈和小靜脈內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)里的一種類(lèi)似與葡糖串樣的細(xì)胞器，它與內(nèi)皮細(xì)胞的腔面和腔外面相連，可占細(xì)胞質(zhì)的20%。VVO之間、VVO與細(xì)胞之間相互作用形成一些有利于大分子物質(zhì)通過(guò)的小窗，VEGF通過(guò)對(duì)VVO“窗口”的調(diào)節(jié)增加血管通透性，促使大分子物質(zhì)通過(guò)VVO滲出血管外［7］。Brock等［8］報(bào)道，VEGF是已知的最強(qiáng)的血管滲透劑，高于組胺50 000倍。③通過(guò)干擾樹(shù)突細(xì)胞的成熟而影響腫瘤免疫，從而使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視［9］。④在肺癌中，VEGF還可以誘發(fā)惡性胸水［10］。VEGF與受體結(jié)合后，通過(guò)一系列信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，同時(shí)增加血管通透性，使血漿蛋白外滲，為胸腔積液形成提供了合適的微環(huán)境［11］。除此以外，VEGF與受體結(jié)合后，可引起內(nèi)皮細(xì)胞的一系列變化，包括Ca2+的內(nèi)流、IP3的增加、Von Willebrand因子的釋放以及胎兒血管內(nèi)皮金屬蛋白酶、凝血酶的產(chǎn)生。而Ca2+和IP3又可以作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的第二信使，傳導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，最終完成 VEGF 的生物學(xué)效應(yīng)［12］。研究［13～18］表明，人類(lèi)很多腫瘤中均有VEGF的高表達(dá)，如腦腫瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、骨肉瘤等，而且表達(dá)程度與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組VEGF陽(yáng)性率高于對(duì)照組，且VEGF陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度有相關(guān)性，提示VEGF參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移，可作為NSCLC的一項(xiàng)生物學(xué)行為的評(píng)估指標(biāo)。

目前認(rèn)為，E-cad與腫瘤侵潤(rùn)性生長(zhǎng)和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切，其主要有以下作用:①通過(guò)Wnt途徑、receptor tyrosine kinases及 Rho GTPase信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖。②影響細(xì)胞的分化，參與器官形成過(guò)程。③維持正常上皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的完整性。④參與了胰腺的β細(xì)胞生存能力的維持，減弱人胰腺β細(xì)胞的凋亡。⑤與血管新生密切相關(guān)［19］。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組E-cad陽(yáng)性率低于對(duì)照組，且 E-cad陽(yáng)性表達(dá)與 NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度有相關(guān)性，提示E-cad參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，E-cad的缺失或下降，可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵潤(rùn)與轉(zhuǎn)移，其可作為癌癥的一項(xiàng)重要檢測(cè)指標(biāo)。

VEGF就是通過(guò)直接或間接途徑來(lái)影響血管的形成。實(shí)驗(yàn)證明，E-cad是VEGF信路徑一個(gè)組成部分，其定位于內(nèi)皮細(xì)胞間連接處，參與調(diào)節(jié)血管屏障功能，重組新生血管中的血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與VEGF誘導(dǎo)的血管新生過(guò)程［20］。其可能的途徑是E-cad蛋白可形成鈣黏素—連環(huán)蛋白復(fù)合物體使其磷酸化或去磷酸化，通過(guò)非胞外信號(hào)(p42和p44 ERKs)促進(jìn)VEGF與其受體VEGF-2的結(jié)合，刺激血管形成。本研究顯示，觀察組VEGF與E-cad表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示VEGF的高表達(dá)及E-cad的表達(dá)下降或缺失可能共同促使了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。

總之，VEGF、E-cad與NSCLC的增殖、侵襲的調(diào)控密切相關(guān)。對(duì)VEGF與E-cad的聯(lián)合檢測(cè)，可能成為判斷NSCLC惡性程度和預(yù)后的重要指標(biāo)，同時(shí)為抗VEGF及其受體的藥物應(yīng)用于肺癌的治療提供新的思路。

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