陳愛金 涂斐佩

摘要：目的：探討膠乳凝集法在奧林帕斯AU2700非原裝試劑自建系統(tǒng)中測定血清胱抑素C的性能評價。方法：方法評價血清胱抑素C測定的精密度、回收率、檢測限、干擾因素、線性范圍。結(jié)果：膠乳凝集法測定血清Cys C批內(nèi)變異系數(shù)為1.52 %（低值） 、1.25 %（高值） 日間變異系數(shù)為2.73 %（低值） 、1.77 %（高值）平均回收率為97.3 % 檢測線性范圍為0.1～ 6.00 mg/L?？偰懠t素正干擾在573 mol/L，血紅蛋白負干擾6 g/L ，甘油三酯負干擾12 mmol/L以下對Cys C偏差﹤5 % ?；静皇苋苎?、黃疸和脂血干擾。結(jié)論：：膠乳凝集法測定血清Cys C快速、準確、精密度高，可作為腎臟功能損傷的指標。

關(guān)鍵詞：胱抑素C腎小球濾過率肌酐清除率

【中圖分類號】R453【文獻標識碼】 A【文章編號】1002-3763（2014）09-0040-01為了評價該試劑盒的性能指標我們依據(jù)美國國家臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）頒發(fā)的文件對該法測定CysC進行初步評價。

1 材料與方法

1.1 實驗標本：對照組40例無心肝腎等病史男20例，女20例41～59歲。腎臟病組40例，男21例，女20例，年齡16～58歲。

1.2 儀器與方法：血清Cys C采用OLYMPUSAU2700測定血清Cys C試劑采用美國G.cell公司膠乳凝集法檢測試劑盒。主要反應(yīng)參數(shù)為血清3μl，？試劑1180μl，試劑260μl，測定波長570/800nm，固定時間法正反應(yīng)讀點13～27。

1.2.1 方法學(xué)評價：（1）精密度取高低值2個不同水平的混合血清Cys C樣品每天測定2次（2次間隔不少于2h）每次測定均做雙份連續(xù)測定20d按NCCLS EP-5A文件進行精密度評價；（2）線性分析取0.1mg/L和6.00mg/L的混合血清按0/4、1/3、2/2、3/1、4/0比例混合制備5個不同Cys C水平的標本，各測定4次按NCCLS EP-6A文件進行線性分析；（3）干擾試驗將混合血清分成2份，1份加入1/10體積的含膽紅素5730mol/L的高總膽紅素血清，另一份不加。然后將兩標本按照4/0、3/1、2/2、1/3、0/4比例混合成5個不同濃度，每份標本重復(fù)測定10次，計算平均干擾值。用同樣方法加入含血紅蛋白為12g/L的溶血物和含甘油三酯為18mmol/L的脂肪乳 重復(fù)測定10次計算各自的干擾值。干擾值=各組均值-未加干擾物的各組均值。按照NCCLS EP-7文件進行干擾試驗評價；（4）最低檢測濃度以9g/L NaCl溶液作標本測定21次，用x+3s計算最低檢測濃度；（5）回收率取Cys C（0.68？mg/L）樣本分別與標準Cys C溶液（0.524mg/L）等體積混合，測定混合液中Cys C含量，計算出樣本中加入標準Cys C后的測得值（回收值）以求得回收率

1.2.2 試劑和標本的穩(wěn)定性：試劑1和2分別放入AU2700中每5天測定1次試劑空白同時測定高低質(zhì)控血清將混合血清標本分裝后分別置于室溫4℃、-20℃定期測定Cys C濃度。

2 結(jié)果

2.1 精密度評價：采用EP-5A可以對批內(nèi)批間日間及總精密度進行計算高低混合血清批內(nèi)精密度分別為1.25%、1.52%日間精密度分別為1.77%、2.73%

2.2 線性分析：線性范圍內(nèi)不同濃度的稀釋水平重復(fù)4次取均值本法線性回歸方程為Y=0.9966X+0.0183

r=0.9999，表明Cys C在0.1～6.0mg/L范圍內(nèi)線性良好

2.3 最低檢測濃度：21次結(jié)果中11次為0.01mg/L，8次為0mg/L，2次為0.02mg/L。x=0.0071mg/L，s=0.00644。最低檢測限為0.03mg/L。

2.4 回收率在血清：Cys C為0.68 mg/L時加入等體積濃度分別為0.5 mg/L、2 mg/L、4 mg/L。Cys C的標準液加入標準液的濃度分別為1/2原標準液濃度。回收率分別為（96%.97%、99%）

2.5 干擾試驗：總膽紅素正干擾在573mol/L血紅蛋白負干擾6g/L，甘油三酯負干擾12mmol/L以內(nèi)相對偏差﹤5%

2.6 試劑和樣本的穩(wěn)定性：試劑置4℃30d內(nèi)試劑空白保持不變，高低質(zhì)控血清變化值﹤1%，血清標本置于室溫（25℃）6d，4℃ 12d及-20℃ 30d，血清Cys C變化≤5%

3 討論

NCCLS文件對于檢驗醫(yī)學(xué)的標準化具有重要的指導(dǎo)意義[1]，本研究全部試驗過程使用單一批號試劑和校準品。試驗結(jié)果顯示該CysC試劑盒具有較好的精密度，批內(nèi)日間及總變異系數(shù)均﹤5%，檢測線性范圍為0.1～6.00mg/L，基本不受溶血黃疸和脂血的影響，最低檢測限0.03mg/L，平均回收率為97.3%。能夠較好地滿足臨床需要試劑在儀器倉中開蓋長達30d，無需定標，試劑吸光度幾乎無變化。說明本試劑膠乳包被技術(shù)穩(wěn)定液體試劑均勻一致，不會隨著時間的延長出現(xiàn)膠乳沉淀的現(xiàn)象。血清標本置4℃冷藏12d血清Cys C值基本不變，說明樣品易于保存。本研究的方法是臨床實驗室常規(guī)測定血清Cys C的首選方法近年來，國外對Cys C的臨床應(yīng)用報道較多，認為其血濃度能夠較準確地反映GFR[2]，Cys C可以自由通過腎小球濾過，幾乎完全在腎小管重吸收及分解代謝，因此Cys C是反映腎小球濾過率的一個非常好的標志物。

Cys C的濃度不受炎癥反應(yīng)、惡性腫瘤、肌肉、性別及年齡等多種外界因素的影響，更證明Cys C成為優(yōu)于傳統(tǒng)的血尿素、尿酸、肌酐和內(nèi)生肌酐清除率檢測的新的腎功能評價指標。

參考文獻

[1]Laverdiere M， Restieri C， Habel F. Evaluation of the in vitro activity of caspofungin against bloodstream isolates of Candida speciesfrom cancer patients：comparison of Etest and NCCLS reference methods.Int J Antimicrob Agents，2002，20：468-471

[2]Le Bricon T，Thervet E，F(xiàn)roissart M，et al.Plasma cystatin C issuperior to 24 -h creatinine clearance and plasma creatinine for estimation of glomerular filtration rate 3 months after kidney transplantation.Clin Chem，2000， 46：1206-1207