楊玉芳劉華鋼 席加喜 劉新文

作者單位：530021 南寧△廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部；廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院

基礎(chǔ)研究

三七總皂苷對(duì)順鉑腎損害大鼠腎組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)的影響

楊玉芳△劉華鋼 席加喜 劉新文

作者單位：530021 南寧△廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部；廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院

目的 探討三七總皂苷（panax notoginsenosides，PNS）對(duì)順鉑腎損害大鼠腎組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)的影響。方法 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、順鉑模型組和PNS治療組，對(duì)大鼠給藥處理10 d后，檢測(cè)大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）和尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的水平，并做腎臟病理檢查；采用SELDI-TOF-MS技術(shù)篩選大鼠腎組織的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，并通過MALDI-TOF-MS/MS、Western blot實(shí)驗(yàn)予以鑒定。結(jié)果 順鉑模型組大鼠血清BUN、Scr和尿NAG的水平均顯著高于正常對(duì)照組（P均＜0.05）。電鏡下可見腎小管上皮細(xì)胞的線粒體明顯損傷，說明順鉑腎損害大鼠模型制作成功。PNS干預(yù)可使大鼠血清BUN、Scr和尿NAG的水平顯著低于順鉑模型組（P＜0.05），腎小管上皮細(xì)胞的線粒體損害程度較順鉑模型組明顯改善，提示PNS對(duì)其有保護(hù)作用。篩選出順鉑模型組與正常對(duì)照組腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)20個(gè)，其中7個(gè)蛋白質(zhì)在順鉑模型組中的表達(dá)下調(diào)2倍以上；順鉑模型組與PNS治療組腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)18個(gè)，其中11個(gè)蛋白質(zhì)在PNS治療組中的表達(dá)下調(diào)；有6個(gè)共同的差異表達(dá)蛋白質(zhì)在順鉑模型組較正常對(duì)照組的表達(dá)上調(diào)或下調(diào)，在PNS治療組可回調(diào)到接近正常對(duì)照組水平。差異表達(dá)蛋白質(zhì)m/z 10815.42被鑒定為線粒體熱休克蛋白，m/z 16021.67被鑒定為血紅蛋白β1亞基、血紅蛋白β2亞基。結(jié)論 順鉑腎損害可伴隨多種蛋白質(zhì)的表達(dá)變化，這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)可能與順鉑損害腎臟以及PNS的保護(hù)作用有關(guān)。通過對(duì)其分離和鑒定，進(jìn)一步了解其性質(zhì)，將有助于全面、系統(tǒng)地探討順鉑腎損害以及PNS保護(hù)作用的機(jī)制。

三七總皂苷；順鉑腎損害；差異表達(dá)蛋白質(zhì)；SELDI-TOF-MS；線粒體熱休克蛋白

順鉑對(duì)多種實(shí)體腫瘤均有效［1］，是臨床上最常用的化療藥物之一。然而順鉑腎毒性、治療的療效均與其劑量呈正相關(guān)，因此腎損害是限制順鉑臨床應(yīng)用劑量的主要不良反應(yīng)。目前順鉑腎損害的機(jī)制尚未完全闡明。順鉑腎損害的發(fā)生、發(fā)展可能涉及多種機(jī)制、多種信號(hào)途徑的復(fù)雜過程，并伴隨多種蛋白質(zhì)的表達(dá)變化［2，3］。而以往對(duì)順鉑腎損害的研究多停留在生化、免疫學(xué)等檢測(cè)指標(biāo)上，且缺乏聯(lián)系性和系統(tǒng)性。

目前臨床上多采用水化療法輔以利尿藥物和脫水劑防治順鉑腎損害，雖有一定效果，但腎功能損害仍然時(shí)有發(fā)生，而且該法并不適于所有患者，因此臨床上急需尋找既不影響順鉑療效又能降低順鉑腎毒性的藥物。三七總皂苷（panax notoginsenosides，PNS）可降低順鉑腎損害小鼠的肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平，增加腎小管上皮細(xì)胞的存活率［4］，同時(shí)PNS具有提高機(jī)體免疫功能以及抑制腫瘤生長的作用［5，6］，因此PNS對(duì)順鉑腎損害既有保護(hù)作用又不抑制其抗腫瘤效應(yīng)。PNS含有多種有效成分和具有多種藥理作用，其對(duì)順鉑腎損害的保護(hù)作用可能涉及多個(gè)途徑和多種機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)采用敏感、高通量的差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，即以CM10蛋白芯片結(jié)合SELDI-TOF-MS技術(shù)，對(duì)大鼠順鉑腎損害的腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行篩選，并用PNS干預(yù)處理，從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度探討順鉑腎損害及PNS保護(hù)作用的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

三七總皂苷注射劑（批號(hào)20110115）購自廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司。順鉑粉注射劑（批號(hào)0070152DB）購自齊魯制藥有限公司。CM10蛋白芯片為美國 Cuphergen公司產(chǎn)品，Protein Chip Biology System（PBSⅡC）型蛋白芯片閱讀機(jī)為美國Cuphergen公司，5800 MALDI-TOF-MS/MS質(zhì)譜儀為美國ABSCIX公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

48只SD雄性大鼠6周齡，體重（200±20）g，SPF級(jí)，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)GX MU2010032418。飼料、飲水和籠具等均經(jīng)高壓滅菌和紫外線消毒后使用。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥處理

實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組，每組16只，自然晝夜條件下自由進(jìn)食、飲水。3組均為腹腔注射給藥。⑴正常對(duì)照組：d1～d10給予與PNS等容量的生理鹽水，每天1次；⑵順鉑模型組：d1給予順鉑（5 mg/kg），d2～d10給予與PNS等容量的生理鹽水，每天1次；⑶PNS治療組：d1給予順鉑（5 mg/kg）后，再給予PNS（31.35 mg/kg）1次，d2～d10給予PNS（31.35 mg/kg），每天1次。順鉑、PNS給藥劑量參照魏偉等［7］主編的《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，由成人的臨床常用劑量換算為大鼠的給藥劑量。

1.4 標(biāo)本的采集及檢測(cè)

于實(shí)驗(yàn)第10天給予PNS后用代謝籠收集大鼠尿液留作N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）檢測(cè)，之后麻醉大鼠，切開腹腔行腹主動(dòng)脈采血，EDTA抗凝取血清，分別采用氧化酶法、速率法測(cè)定大鼠血清Scr、BUN的水平，用對(duì)硝基酚比色法測(cè)定大鼠尿中NAG含量。用預(yù)冷生理鹽水原位灌洗腎臟后，取部分腎組織作差異表達(dá)蛋白質(zhì)的篩選與鑒定，另取部分腎組織送電鏡室，觀察腎組織病理學(xué)改變。

1.5 腎臟組織差異表達(dá)蛋白的檢測(cè)

用組織裂解液將腎組織徹底裂解，以12 000 r/min、4℃離心1 h，上清液用Narodrop 2000（ND-2000）儀進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，取50 μl上清液，加入80 μl CM10 buffer，立刻充分混合，以10 000 r/min、4℃離心5 min，在CM-10型芯片上樣。采用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)質(zhì)譜。用標(biāo)準(zhǔn)芯片校正質(zhì)譜儀，儀器參數(shù)設(shè)定為：最高分子量為50 000道爾頓，優(yōu)化范圍為2 000～20 000道爾頓；激光強(qiáng)度為190，檢測(cè)敏感性為8，每個(gè)樣本取130個(gè)點(diǎn)的平均值。使用軟件Ciphergen Protein Chip 3.2自動(dòng)采集芯片上數(shù)據(jù)并繪制蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖。信號(hào)噪聲（signal-to-noise ratio，S/N）大于5為有效波峰。蛋白質(zhì)質(zhì)荷比以m/z值表示，采用Biomarker Wizard軟件計(jì)算 m/z相同的蛋白在各組之間峰值差異含量，P＜0.05者為差異蛋白峰。

1.6 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的分離、純化和鑒定

將含有候選差異表達(dá)蛋白質(zhì)的腎組織標(biāo)本以10 000 r/min、4℃離心3 min，采用Tricine-SDS-PAGE電泳凝膠分離、純化部分差異表達(dá)蛋白質(zhì)。電泳后的凝膠經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色，將目標(biāo)蛋白質(zhì)相應(yīng)的凝膠條帶切下，加入適量胰蛋白酶工作液，在37℃烘箱中孵育過夜（12～16 h）。洗膠粒3次，吸取及合并酶解液體，離心取上清液在384靶盤上點(diǎn)靶，以校正標(biāo)準(zhǔn)品作為校正，采用MALDI-TOF-MS/MS質(zhì)譜儀獲取蛋白質(zhì)的肽圖譜，通過Mascot軟件查詢NCBI、SWISSPROT數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索比對(duì)，得出目標(biāo)蛋白質(zhì)的相關(guān)信息。

1.7 Western blot（WB）法對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證

含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的標(biāo)本經(jīng)Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳，并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。接著將膜脫色后，用HSP10的單克隆一抗（1∶1 000）4℃孵育過夜，Tublin為內(nèi)參。次日取出PVDF膜，以紅外二抗（1∶25 000）室溫下避光孵育2 h，最后采用美國LI-COR公司的Odyssey紅外熒光掃描成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描和分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。計(jì)量資料采用（χ±s）表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 順鉑腎損害大鼠模型以及PNS干預(yù)結(jié)果

順鉑模型組大鼠血清BUN、Scr和尿NAG的水平均顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。電鏡下可見腎小管上皮細(xì)胞的線粒體明顯損傷，說明順鉑腎損害大鼠模型制作成功。PNS干預(yù)可使大鼠血清BUN、Scr和尿NAG的水平顯著低于順鉑模型組（P＜0.05），腎小管上皮細(xì)胞的線粒體損害程度較順鉑模型組明顯改善，提示PNS對(duì)順鉑腎損害有保護(hù)作用。

2.2 差異表達(dá)的蛋白質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

從CM10蛋白芯片上獲得的蛋白質(zhì)峰中（圖1-A）篩選出順鉑模型組與正常對(duì)照組之間的差異表達(dá)蛋白峰20個(gè)（P＜0.05），其中7個(gè)蛋白質(zhì)在順鉑模型組中的表達(dá)較正常對(duì)照組下調(diào)，且下調(diào)2倍以上。蛋白質(zhì)m/z 16021.67、m/z 12151.56分別在順鉑模型組、正常對(duì)照組中的表達(dá)量最大。表1為部分差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。

從CM10蛋白芯片上獲得的蛋白質(zhì)峰中（圖1-B）篩選出順鉑模型組與PNS治療組之間的差異表達(dá)蛋白峰18個(gè)（P＜0.05），其中11個(gè)蛋白質(zhì)在PNS治療組的表達(dá)下調(diào)。蛋白質(zhì)m/z3763.05在PNS治療組中的表達(dá)量最大。表2為部分差異表達(dá)蛋白質(zhì)。

圖1 從CM10蛋白芯片捕獲的蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖

在表1、表2中，有6個(gè)為共同的差異表達(dá)蛋白質(zhì)（表3），其中4個(gè)蛋白質(zhì)在順鉑模型組的表達(dá)較正常對(duì)照組上調(diào)，而在PNS治療組的表達(dá)較順鉑模型組下調(diào)；2個(gè)蛋白質(zhì)在順鉑模型組較正常對(duì)照組下調(diào)，在PNS治療組的表達(dá)較順鉑模型組上調(diào)。

2.3 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的鑒定結(jié)果

目前鑒定出以下兩個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)的相關(guān)信息。m/z 10815.42差異表達(dá)蛋白質(zhì)與線粒體熱休克蛋白（mitochondrial heat shock protein，mHSP或HSP10）（P26772）匹配上8個(gè)肽段，得分為96分（圖2-A）；蛋白質(zhì)m/z 16021.67與血紅蛋白β1亞基（P02091）和血紅蛋白β2亞基（P11517）分別匹配上13個(gè)肽段、10個(gè)肽段，得分分別為256分、97分（圖2-B）。

圖2 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定結(jié)果

圖3 各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎組織中HSP10的電泳及WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 Western blot（WB）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)m/z 10815.42為蛋白質(zhì)HSP10，而且PNS治療組大鼠腎組織HSP10的表達(dá)高于順鉑模型組。見圖3。

表1 正常對(duì)照組與順鉑模型組的部分腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)（s）

表1 正常對(duì)照組與順鉑模型組的部分腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)（s）

?

表2 順鉑模型組與PNS治療組的部分腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)（s）

表2 順鉑模型組與PNS治療組的部分腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)（s）

?

表3 各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎組織中共同存在的差異表達(dá)蛋白質(zhì)（s）

表3 各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎組織中共同存在的差異表達(dá)蛋白質(zhì)（s）

*與正常對(duì)照組比較；#與順鉑模型組比較。

m/z 正常對(duì)照組 順鉑模型組 表達(dá)情況*P PNS治療組 表達(dá)情況#P 1088.62 0.01±0.69 2.05±1.79 ↑ 0.019 0.12±1.17 ↓ 0.010 1227.54 1.75±1.09 6.50±4.27 ↑ 0.019 1.84±1.39 ↓ 0.021 1234.96 2.57±1.78 20.01±15.08 ↑ 0.037 4.53±3.38 ↓ 0.021 1402.78 0.86±1.73 4.32±2.17 ↑ 0.037 1.71±1.08 ↓ 0.006 12256.24 8.44±4.03 2.74±4.05 ↓ 0.026 7.30±6.48 ↑ 0.042 18695.15 0.28±0.05 0.07±0.09 ↓ 0.004 0.22±0.13 ↑ 0.016

3 討論

順鉑腎損害的發(fā)生、發(fā)展是涉及多種機(jī)制［2，3］、多種信號(hào)途徑的復(fù)雜過程，且伴隨多種蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。PNS含有三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1、Re等多種活性成分，具有抗氧化、抗增殖、促凋亡等多種藥理作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)［8］，PNS可能通過抗氧化損傷對(duì)順鉑腎損害起保護(hù)作用。另有報(bào)道，PNS可通過降低順鉑導(dǎo)致的DNA鏈間交聯(lián)、DNA-蛋白交聯(lián)和鈣離子超載［4］等機(jī)制發(fā)揮預(yù)防順鉑腎毒性的作用。因此推測(cè)PNS對(duì)順鉑腎損害的保護(hù)作用可能涉及多種機(jī)制和位點(diǎn)。順鉑腎損害和PNS的保護(hù)作用均可體現(xiàn)在腎組織蛋白質(zhì)種類、數(shù)量或性質(zhì)的改變。

SELDI-TOF-MS技術(shù)為一種敏感、高通量的差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，由蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)、質(zhì)譜儀和分析軟件構(gòu)成，可選擇性地捕獲標(biāo)本中與其特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，為診斷、預(yù)防和治療疾病提供重要線索［9］。本實(shí)驗(yàn)采用CM10蛋白芯片結(jié)合SELDI-TOFMS技術(shù)篩選順鉑腎損害大鼠腎組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，可以很好地檢測(cè)到CM10芯片捕獲的蛋白質(zhì)質(zhì)譜峰，蛋白質(zhì)質(zhì)譜峰主要集中在分子量20 000 Da以內(nèi)，并在各實(shí)驗(yàn)組之間篩選出多個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，說明SELDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)篩選低分子量蛋白質(zhì)有效、可行。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠順鉑腎損害的腎組織篩選出差異表達(dá)蛋白質(zhì)，這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)可能是順鉑損害腎臟的結(jié)果或者是導(dǎo)致腎臟損害的原因，亦可能是PNS保護(hù)順鉑腎臟損害的結(jié)果，或是通過改變這些蛋白質(zhì)而發(fā)揮保護(hù)腎臟的作用。其中有6個(gè)共同的差異表達(dá)蛋白質(zhì)在順鉑模型組較正常對(duì)照組的表達(dá)上調(diào)或下調(diào)，而PNS均能使其表達(dá)回調(diào)到接近正常對(duì)照組的水平。部分差異表達(dá)蛋白質(zhì)的m/z相差小于100 Da，如表1中m/z分別為12 256.24、12 356.94、12 453.41等蛋白質(zhì)，推測(cè)其來源、性質(zhì)等相似，可能是同源蛋白。因此，對(duì)以上差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、鑒定，了解其性質(zhì)與作用，將有助于闡明順鉑腎損害和PNS保護(hù)作用的機(jī)制。

HSP在各種因素引起的腎損傷中發(fā)揮重要作用［10，11］，包括腎缺血再灌注損傷、腎間質(zhì)纖維化、糖尿病腎病等。HSP70在環(huán)孢素、慶大霉素誘導(dǎo)的急性腎損害早期大鼠腎組織的表達(dá)顯著升高［12，13］，可能與細(xì)胞啟動(dòng)自我保護(hù)的機(jī)制有關(guān)。另外，不少研究表明HSP與腎臟細(xì)胞線粒體功能密切相關(guān)［14，15］。HSP70可降低線粒體bax的積累，對(duì)缺血性急性腎損傷起到保護(hù)作用［10］。HSP10屬于小分子HSP家族。HSP60和HSP10組合在維持線粒體的完整性和ATP產(chǎn)生的能力方面發(fā)揮重要作用［16］。目前尚未見HSP10在順鉑腎損害中作用的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)順鉑腎組織病理檢查發(fā)現(xiàn)，順鉑模型組腎小管上皮細(xì)胞的線粒體有明顯損傷，PNS能減輕腎小管上皮細(xì)胞線粒體的損傷；腎組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)HSP10在PNS治療組較順鉑模型組的表達(dá)上調(diào)2倍以上。綜上所述，PNS是否通過上調(diào)HSP10對(duì)順鉑腎損害發(fā)揮保護(hù)作用，以及該蛋白質(zhì)在其中的具體作用、調(diào)節(jié)機(jī)制等均有待進(jìn)一步研究。

腎臟對(duì)紅細(xì)胞的生成起重要作用。本實(shí)驗(yàn)中，血紅蛋白β1亞基和血紅蛋白β2亞基在順鉑模型組較正常對(duì)照組的表達(dá)上調(diào)。血紅蛋白是由4個(gè)亞基通過共價(jià)鍵結(jié)合而成為α2β2結(jié)構(gòu)的寡聚蛋白質(zhì)，在生物體內(nèi)起存儲(chǔ)和運(yùn)輸氧氣的作用，參與維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的酸堿穩(wěn)定。Johnson等［17］研究發(fā)現(xiàn)GSHPx.1基因缺陷的大鼠血紅蛋白自動(dòng)氧化率很低，但是產(chǎn)生活性氧的能力很強(qiáng)，這可能與超氧化物岐化酶的活性有關(guān)；血紅蛋白中α1β1亞基和α1β2亞基的接合部位能明顯影響血紅蛋白的氧親和力和協(xié)同氧化過程［18］。血紅蛋白β1亞基、β2亞基與順鉑腎損害之間的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)采用CM10芯片結(jié)合SELDI-TOF-MS技術(shù)篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì)。由于不同類型的蛋白質(zhì)芯片所捕獲到的蛋白質(zhì)可能有所不同，因此只采用一種類型的芯片篩選蛋白質(zhì)，可能導(dǎo)致一些差異表達(dá)蛋白質(zhì)丟失。同時(shí)，蛋白質(zhì)芯片上的標(biāo)本經(jīng)過篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì)后，不能回收進(jìn)行鑒定，因此篩選出來的差異表達(dá)蛋白質(zhì)的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能等仍未明確，需要純化鑒定和進(jìn)行功能研究。另外，SELDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)于篩選小分子的差異表達(dá)蛋白質(zhì)很有效，與傳統(tǒng)的二維電泳篩選技術(shù)對(duì)極小、極大及低豐度蛋白質(zhì)等無法分離、鑒定可互補(bǔ)不足；但由于其篩選出的差異表達(dá)蛋白質(zhì)多集中在20 000 Da以下，有的甚至在2 000 Da以下，且表達(dá)量低，在分離、純化過程中容易損失，因此分離、鑒定工作難度增大［19］。有關(guān)方面值得深入研究和探討。

綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，順鉑腎損害大鼠腎組織可伴隨多種蛋白質(zhì)的變化，這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)可能與順鉑損害腎臟及PNS的保護(hù)作用有關(guān)。分離、鑒定這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)可為研究順鉑腎損害及PNS保護(hù)作用的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)佐證。

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［2014-11-10收稿］［2014-12-04修回］［編輯 阮萃才］

Effect of Panax Notoginsenosides on renal proteins differentially expressed in rats experiencing cisplatin-induced nephrotoxicity

YANG Yu-fang△，LIU Hua-gang，XI Jia-xi，LIU Xin-wen（△Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University；Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R.China）

LIU Hua-gang.E-mail：hgliu@263.net

Objective To understand the effects of Panax Notoginsenosides（PNS）on renal proteins differentially expressed in rats experiencing cisplatin-induced nephrotoxicity.Methods Rats were randomly divided into three groups and treated with saline，cisplatin alone or cisplatin with PNS.At 10 days after treatment，renal tissue was examined for pathology，and levels of serum BUN，Scr，and urine NAG were determined.Renal proteins for which expression levels changed in response to cisplatin treatment were screened using SELDI-TOF-MS and identified using MALDI-TOF-MS/MS and Western blotting.Results We successfully created a rat model of cisplatin-induced nephrotoxicity，and PNS reduced the drug-induced damage.Mass spectrometry identified 20 renal proteins differentially expressed between the saline and cisplatin groups，as well as 18 proteins differentially expressed between the cisplatin and cisplatin+ PNS groups.Of these proteins，6 were up-or down-regulated by cisplatin treatment，and PNS returned their expression close to the levelsin the saline group.One of these proteins（m/z 10815.42）was identified as mitochondrial heat shock protein，while another（m/z 16021.67）was identified as hemoglobin subunit beta-1 and beta-2.Conclusions These differentially expressed renal proteins may mediate cisplatin-induced nephrotoxicity as well as the protective effects of PNS.Further studies should verify these leads and examine the cellular pathways involved.

Panax notoginseng saponins；Cisplatin-induced nephrotoxicity；Differentially expressed proteins；SELDI-TOF-MS；Mitochondrial heat shock protein

R282.7

A

1674-5671（2014）04-06

10.3969/j.issn.1674-5671.2014.04.07

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30850010、81260598）

劉華鋼。E-mail：hgliu@263.net