李永輝 邢曉春 張 寰

藥物臨床觀察

腺苷及其受體激動劑對不穩(wěn)定型心絞痛患者IL-18的影響

李永輝 邢曉春 張 寰△

目的 觀察腺苷及腺苷受體激動劑對不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）患者白介素（IL）-18的影響，探討腺苷受體的作用機(jī)制。方法選取15例UAP患者（UAP組）及15例健康志愿者（對照組），采用腺苷及腺苷受體激動劑干預(yù)全血標(biāo)本,雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測IL-18。結(jié)果低濃度腺苷(1～100 μmol/L)對UAP組IL-18表達(dá)有增強(qiáng)效應(yīng)，高濃度(1 mmol/L)有抑制效應(yīng)。腺苷A1受體激動劑與A3受體激動劑對IL-18表達(dá)有增強(qiáng)效應(yīng)，而腺苷A2a受體激動劑對IL-18表達(dá)有抑制效應(yīng)，腺苷A2b受體激動劑對IL-18表達(dá)未見明顯效應(yīng)。結(jié)論腺苷在低濃度時(shí)對UAP患者IL-18的表達(dá)有促進(jìn)作用，可能通過腺苷A1和A3受體發(fā)揮效應(yīng)；高濃度時(shí)有抑制作用，可能通過腺苷A2a受體發(fā)揮作用。

心絞痛,不穩(wěn)定型；白細(xì)胞介素18；腺苷；受體,腺苷A1；受體,腺苷A2；受體,腺苷A3

腺苷是一種內(nèi)源性嘌呤核苷酸，機(jī)體遭受炎癥或組織缺血缺氧時(shí)，腺苷局部濃度能增至生理濃度的100倍[1]，腺苷可通過其受體對機(jī)體損傷或組織缺氧等做出適應(yīng)性反應(yīng)，不同腺苷受體可發(fā)揮獨(dú)特甚或重疊效應(yīng)[2]。白介素（IL）-18是一種免疫調(diào)節(jié)因子，研究發(fā)現(xiàn)腺苷對急性冠脈綜合征患者外周血IL-18表達(dá)具有雙向作用[3]，具體受體機(jī)制鮮見報(bào)道。本研究擬通過腺苷受體激動劑模擬腺苷觀察其對不穩(wěn)定型心絞痛患者IL-18表達(dá)的影響，探討其具體的受體機(jī)制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 病例來源于我院2009年6月—2010年6月住院患者。本研究共入選不穩(wěn)定型心絞痛（UAP組）及健康受試者（對照組）各15例。UAP組入選標(biāo)準(zhǔn)：UAP，典型心絞痛癥狀，心絞痛發(fā)作時(shí)，心電圖出現(xiàn)暫時(shí)性ST段缺血性壓低大于1 mm或ST段抬高大于3 mm，發(fā)作緩解后正?；蚪咏＃恍募∶刚?；距末次發(fā)作12 h以內(nèi)；梗死后心絞痛排除在外。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有肝、腎功能障礙，惡性疾病，感染性疾病，風(fēng)濕性、自身免疫疾病，營養(yǎng)不良性疾病，心肌病，心肌炎，心內(nèi)膜炎，近期有手術(shù)史，有炎癥、腫瘤、發(fā)熱、貧血史者等情況均不入選。對照組、UAP組年齡（歲）比較（61.46± 4.42 vs 61.60±4.11，t=0.085，P=0.933）、性別（男/女）比較（8/7 vs 9/6，P=1.0）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 腺苷、腺苷A1受體激動劑（CPA）、腺苷A2a受體激動劑（CGS-21680）、腺苷A2b受體激動劑（NECA）、腺苷A3受體激動劑（IB-MECA）、HEPES、RPMI1640、二甲基亞砜（DMSO）均購自Sigma公司；人IL-18診斷試劑盒購自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司。ELX-800型酶標(biāo)儀為美國BIO-TCK公司產(chǎn)品，CO2孵箱（型號HF-90）為日本三洋科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2.2 標(biāo)本采集 UAP組患者在疼痛發(fā)生后12 h以內(nèi)抽取肘正中靜脈血，對照組于清晨空腹抽取肘正中靜脈血3 mL置于肝素抗凝試管中混勻，室溫下保存＜2 h。將患者外周全血分裝于EP管中，每個(gè)管中加入100 μL全血，再加入100 μL RPMI1640（含有20 mmol/L HEPES使pH維持在7.3）混勻。

1.2.3 藥物干預(yù)裝 有稀釋血液的EP管分為5組：分別加入腺苷、CPA、CGS-21680、NECA、IB-MECA，使其終濃度各分別為0、1、10、100 μmol/L及1mmol/L；將處理后血樣本置于CO2孵箱（37℃，5％CO2）孵育12 h。然后取出待測樣本，700 r/min離心10 min，取上清保存在-20℃冰箱待檢測。待測血漿中無紅細(xì)胞裂解。

1.2.4 檢測方法 IL-18檢測采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，以標(biāo)準(zhǔn)品1 000、500、250、125、62.5、32、16、0 ng/L的OD值在半對數(shù)紙上做圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)人IL-18水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較用LSD法；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度腺苷對IL-18的影響 當(dāng)腺苷濃度0 μmol/L時(shí)，UAP組與對照組IL-18表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.382，P＜0.001）。對照組中，不同濃度腺苷對IL-18的表達(dá)未見明顯差異；UAP組中，腺苷低濃度時(shí)（1～100 μmol/L）可增強(qiáng)IL-18的表達(dá)，達(dá)到一定峰值濃度（1 mmol/L）則抑制IL-18表達(dá),見表1。

2.2 不同受體激動劑對IL-18的影響 腺苷A1受體激動劑及腺苷A3受體激動劑隨濃度升高促進(jìn)IL-18表達(dá)的效應(yīng)增強(qiáng)；而A2a受體激動劑隨濃度升高則抑制IL-18表達(dá)的效應(yīng)增強(qiáng)；A2b受體激動劑對IL-18的表達(dá)未見明顯作用，見表2。

3 討論

腺苷受體親和力的差異導(dǎo)致其發(fā)揮不同的生理效應(yīng)[4]，臨床研究發(fā)現(xiàn)腺苷及腺苷擬似物在高濃度時(shí)可縮小梗死面積，提高心肌梗死患者的遠(yuǎn)期生存率，但在濃度較低時(shí)未見明顯作用[5-6]。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)腺苷對急性冠脈綜合征患者外周血IL-18表達(dá)具有雙向作用，高濃度腺苷對IL-18呈抑制作用，進(jìn)一步探討腺苷對IL-18的具體受體機(jī)制可能為治療UAP提供新的思路[3]。IL-18是一種多效能炎癥因子，能導(dǎo)致動脈粥硬化斑塊增大，與動脈粥樣硬化斑塊脆性有關(guān)，敲除小鼠的IL-18基因可延緩動脈粥樣硬化的進(jìn)程[7]。Li等[8]研究發(fā)現(xiàn)：IL-18與急性冠脈綜合征發(fā)生密切相關(guān)，Bouki等[9]采用光學(xué)相干斷層成像（OCT）對急性冠脈綜合征（ACS）患者的斑塊進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)IL-18與冠脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性密切相關(guān)。其機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)干擾素（IFN）-γ的產(chǎn)生及提高基質(zhì)金屬蛋白酶的活性使膠原蛋白降解增多等多個(gè)途徑，促使斑塊的不穩(wěn)定[10]。大量研究證實(shí)IL-18可預(yù)測冠脈事件的發(fā)生，可能是穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊的治療靶點(diǎn)[11]。

Tab.1 Effects of different concentrations of adenosine on the expression of IL-18 in UAP group and control group表1 不同濃度腺苷對UAP和正常人IL-18的影響 (ng/L，±s)

Tab.1 Effects of different concentrations of adenosine on the expression of IL-18 in UAP group and control group表1 不同濃度腺苷對UAP和正常人IL-18的影響 (ng/L，±s)

＊＊P＜0.01；a與0 μmol/L組比較，b與1 μmol/L組比較，c與10 μmol/L組比較，d與100 μmol/L組比較，P＜0.05；表2同

組別對照組UAP組0 μmol/L 3.74±0.87 18.96±4.01 1 μmol/L 3.81±0.66 24.47±3.81a10 μmol/L 4.16±0.55 35.11±4.16ab100 μmol/L 4.31±0.71 46.04±4.31abc1 mmol/L 3.87±0.62 18.96±3.87bcdF 1.871 101.364＊＊

Tab.2 Effects of different concentrations of adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 in UAP group表2 不同濃度腺苷受體激動劑對UA患者IL-18的影響(ng/L，±s)

Tab.2 Effects of different concentrations of adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 in UAP group表2 不同濃度腺苷受體激動劑對UA患者IL-18的影響(ng/L，±s)

組別0 μmol/L 1 μmol/L 10 μmol/L 100 μmol/L 1 mmol/L F CPA 18.961±3.869 20.711±4.209 26.136±3.481ab36.513±3.955abc36.909±3.518abc69.696＊＊CGS-21680 18.961±3.869 15.130±2.007a12.180±1.997ab9.839±1.608abc6.827±1.316abcd56.381＊＊NECA 18.961±3.869 18.269±1.849 18.874±1.628 18.106±1.798 18.227±2.063 0.100 IB-MECA 18.961±3.869 21.844±3.711 27.669±4.095ab36.980±4.008abc38.843±3.731abc72.842＊＊

本研究發(fā)現(xiàn)，UAP組IL-18表達(dá)明顯高于對照組，提示炎癥和免疫學(xué)機(jī)制可能參與了動脈粥樣斑塊破裂的病理生理學(xué)過程。腺苷對正常對照組外周血IL-18表達(dá)未見明顯影響，而對UAP組發(fā)揮明顯作用，提示斑塊破裂時(shí)患者單核細(xì)胞活化，從而增強(qiáng)IL-18的表達(dá)，進(jìn)而加劇疾病進(jìn)程。采用不同濃度腺苷對UAP患者外周血進(jìn)行干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，腺苷可對IL-18表達(dá)發(fā)揮雙向作用，在腺苷濃度100 μmol/L以內(nèi)，隨濃度增高而表達(dá)增加，而腺苷濃度達(dá)到一定峰值（1 mmol/L）后，IL-18表達(dá)降低，提示腺苷在臨床治療時(shí)，應(yīng)采用較大濃度。這與AMISTAD-Ⅱ研究結(jié)果一致[6]。腺苷A1受體、A3受體激動劑可促使UAP患者IL-18表達(dá)增加，而腺苷A2a受體激動劑可促使IL-18表達(dá)降低，腺苷在低濃度對IL-18表達(dá)的增強(qiáng)效應(yīng)可能是通過腺苷A1及A3受體發(fā)揮作用，而高濃度時(shí)對IL-18表達(dá)的抑制效應(yīng)可能是通過腺苷A2a受體發(fā)揮作用，而腺苷A2b受體與此無關(guān)。腺苷A2a受體在改善心肌缺血、穩(wěn)定易損斑塊、改善預(yù)后方面發(fā)揮重要作用，可能為臨床治療提供新的思路。

[1]Barletta KE,Ley K,Mehrad B.Regulation of neutrophil function by adenosine[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2012,32(4):856-864．

[2]Headrick JP,Ashton KJ,Rose'meyer RB,et al.Cardiovascular adenosine receptors:expression,actions and interactions[J].Pharmacol Ther,2013,140(1):92-111.

[3]Wang X,Li YH.Effects of AMP579 and adenosine on expression of interleukin-18 and platelet aggregation in patient with coronary heart disease[J].The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2008,1(24):59-62.[王雄,李永輝.AMP579與腺苷對冠心病患者白介素-18表達(dá)及血小板聚集的影響[J].中國臨床藥理學(xué)雜志, 2008,1(24):59-62.]

[4]Schepp CP,Reutershan J.Bench-to-bedside review:adenosine receptors-promising targets in acute lung injury[J]?Crit Care,2008,12 (5):226.

[5]Mahuffey KW,Puma JA,Barbagelata NA,et al.Adenosione as an adjunct to thrombolytic therapy for acute myocardial infarction:results of a multicenter,randomized,placebo-conrtolledtrail:the Acute Myocardial Infartion Study of denosine(AMISTAD)trial[J].J AM Coll Cardiol,1999,34(6):1711-1720.

[6]Ross AM,Gibbons RJ,Stone GW，et al.Arandomized,double-blinded,placebo-controlled multicenter trial of adenosineas an adjunct to reperfusion in the treatment of acute myocardial infarction(AMISTAD-Ⅱ)[J].J Am Coll Cardiol,2005,45(11):1775-1780.

[7]Badimon L.Intelfeukin-l8:a potent por-inflammatory cytokine in atherosclerosis[J].Cardiovasc Rse,2012,96(2):172-175.

[8]Li Q,Li Z,Zhang X,et al.Evaluated plasma interleukin-18/interleukin-10 ratio is a risk factor for acute coronary syndromes in patients with stable angina pectoris[J].Cardiol J,2014,21(1):83-88.

[9]Bouki KP,Katsafados MG,Chatzopoulos DN,et al.Inflammatory markers and plaque morphology:an optical coherence tomography study[J].Int J Cardiol.2012,154(3):287-292.

[10]Mallat Z,Corbaz A,Scoazec A,et al.Expression of interleukin-18 in human atherosclerotic plaques and relation to plaque instability[J].Circulation,2001,104(14):1598-1603.

[11]Jefferis BJ,Papacosta O,Owen CG,et al.Interleukin18 and coronary heart disease:Prospective study systematic review[J].Atherosclerosis,2011,217(1):227-233.

（2014-02-09收稿 2014-07-07修回）

（本文編輯 李國琪）

Effects of Adenosine and the Selective Adenosine Receptor Agonist on the Expression of Interleukin-18 in Patient with Unstable Angina

LI Yonghui,XING Xiaochun,ZHANG Huan△
Department of Cardiology,Fourth Central Hospital of Tianjin,Tianjin 300140,China
△

E-mail:huan_cn@126.com

ObjectiveTo observe the effects of adenosine and adenosine receptor agonist on the expression of interleukin-18(IL-18)in patients with unstable angina(UAP),and the mechanism of adenosine receptor agonists thereof.MethodsFifteen UAP and 15 healthy volunteers were included in this study.The effects of adenosine and the selective adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).ResultsThe lower concentration of adenosine(1-100 μmol/L)increased the expression of IL-18 in UAP group;whereas the higher concentration of adenosine(1 mmol/L)inhibited the expression of IL-18.The adenosine A1receptor agonist and A3receptor agonist increased the expression of IL-18,while the adenosine A2areceptor agonist inhibited the expression of IL-18.There was no significant effect for A2breceptor agonist on the expression of IL-18.ConclusionThe lower concentrations of adenosine can enhance the expression of IL-18 through adenosine A1and A3receptors in UAP.The higher concentrations of adenosine can inhibit the expression of IL-18 through adenosine A2areceptors.Adenosine can promote IL-18 expression in lower concentrations.

angina,unstable;interleukin-18;adenosine;receptor,adenosine A1;receptor,adenosine A2;receptor, adenosine A3

R541.42

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.11.024

天津市衛(wèi)生局科技基金資助項(xiàng)目（09KZ21）

天津市第四中心醫(yī)院心內(nèi)科CCU（郵編300140）△

E-mail:huan_cn@126.com