黃 權，蘇 琳

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，吉林 長春 130118；2.華中農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)學院，湖北 武漢 430070)

蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體體成分的營養(yǎng)強化作用

黃 權1，2，蘇 琳1

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，吉林 長春 130118；2.華中農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)學院，湖北 武漢 430070)

采用鹵蟲無節(jié)幼體作為研究材料，研究了蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體的營養(yǎng)強化作用，篩選出最適宜的蛋氨酸添加量.結果表明：通過營養(yǎng)強化，蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體的一般營養(yǎng)成分、氨基酸和脂肪酸含量有顯著的影響.蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h和24 h時，1.2 g/L組的粗蛋白質(zhì)含量較高，0.4 g/L處理組的粗脂肪含量較高；蛋氨酸添加量為0.8，1.2 g/L時，對鹵蟲無節(jié)幼體的氨基酸強化效果較好；0.8 g/L時對鹵蟲無節(jié)幼體脂肪酸的強化效果較好.

蛋氨酸；營養(yǎng)強化；鹵蟲無節(jié)幼體；體成分

鹵蟲無節(jié)幼體營養(yǎng)豐富、大小適宜、易消化吸收、適口性好，是世界范圍內(nèi)公認的魚、蝦、蟹幼體的開口餌料[1-8].由于鹵蟲自然資源有限，因此需要進行大量的人工培養(yǎng).但人工培育的鹵蟲存在不飽和脂肪酸缺乏和氨基酸不平衡等營養(yǎng)缺陷問題，需要進行營養(yǎng)強化，以實現(xiàn)營養(yǎng)強化劑—鹵蟲無節(jié)幼體—魚、蝦、蟹幼體間的營養(yǎng)傳遞.近年來人們開始關注蛋氨酸對鹵蟲的營養(yǎng)強化研究.Koven等用同一DHA濃度、不同氨基酸濃度的營養(yǎng)強化劑強化鹵蟲和輪蟲，分別飼喂真鯛(Pagrosomusmajor)后發(fā)現(xiàn)，隨著氨基酸含量的增高，魚苗的成活率逐漸升高[9].Tonheim用晶體蛋氨酸強化鹵蟲，用未添加蛋氨酸的作為對照，研究結果表明，蛋氨酸強化組要比未強化組體內(nèi)蛋氨酸的含量高出20～30倍[10]；Monroig用蛋氨酸強化鹵蟲，鹵蟲體內(nèi)的蛋氨酸含量顯著升高，其中游離蛋氨酸的含量在18～21 h期間緩慢上升，21～24 h期間呈現(xiàn)下降的趨勢[11].

本研究以鹵蟲無節(jié)幼體為對象，用不同質(zhì)量濃度的蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體，分析了蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體的營養(yǎng)強化作用.通過研究蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體體成分的影響，篩選出適宜的蛋氨酸添加量，以為進一步研究開發(fā)蛋氨酸營養(yǎng)強化劑提供基礎.

1 材料與方法

1.1 材料

產(chǎn)于美國大鹽湖的鹵蟲卵；人工配制的2.8%海水；DL-蛋氨酸(含量>98%).

1.2 方法

1.2.1 鹵蟲的孵化，收集和培養(yǎng)

將孵化桶、氣石、氣管洗凈后用高錳酸鉀消毒；再將配置好的海水倒入塑料桶，以1～2 g/L的密度投放鹵蟲卵；充氧使水面翻騰.鹵蟲卵的孵化在光照培養(yǎng)箱中進行，溫度設置為(28±1)℃，光照為1 000 lx，溶解氧>3 mg/L，pH=8～9，鹽度為2.8%，孵化時間為24 h.在鹵蟲卵孵化的過程中保持連續(xù)充氣.鹵蟲卵孵化24 h后，將孵化出的鹵蟲無節(jié)幼體與卵殼分離：在孵化器的上方罩上黑色不透光的黑色塑料袋或者黑色的布，由于鹵蟲的趨光作用和重力作用使得鹵蟲向孵化器的水底下方聚集，而空殼卵由于重量輕，因此漂浮在水面上方.把孵化器下方的閥門打開，收集鹵蟲無節(jié)幼體，并進行計數(shù)(每毫升水體中含有鹵蟲的個數(shù)).將計數(shù)后的鹵蟲無節(jié)幼體被轉移到5 L的透明塑料桶中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)海水的鹽度為2.8%，每個塑料桶內(nèi)放750 000只，即培養(yǎng)密度為150個/mL.

1.2.2 蛋氨酸強化

強化餌料為DL-蛋氨酸.蛋氨酸強化的添加量分別為0，0.4，0.8和1.2 g/L，其中0 g/L組為對照組.試驗分為4個水平，每個水平3次重復，共12組.強化飼養(yǎng)在光照培養(yǎng)箱中進行，設置溫度為28℃，光照1 000 lx，保持連續(xù)充氣.在強化0，6，12，18和24 h時，分別取鹵蟲無節(jié)幼體于顯微鏡下測定體長和體重；強化12和24 h后各取一半鹵蟲無節(jié)幼體，用蒸餾水沖洗后，放入-20℃冰箱內(nèi)保存，用于測樣.

1.2.3 體成分的測定

將鹵蟲無節(jié)幼體用光誘法分離，106 μm篩絹濾出后，用蒸餾水沖洗.部分濕樣用于測定水分含量；部分濕樣(60+1)℃烘干24 h，用于測定一般營養(yǎng)成分、氨基酸和脂肪酸含量.粗蛋白質(zhì)含量采用GB/T 6432中粗蛋白質(zhì)的測定方法測定；粗脂肪含量采用GB/T 6433中粗脂肪的測定方法測定；總磷含量參照GB/T 6437中總磷的測定方法測定；鈣含量采用GB/T 6436中鈣的測定方法測定；氨基酸含量采用GB/T 18246中氨基酸的測定方法測定；脂肪酸含量采用GB/T 21514中脂肪酸的測定方法測定.

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用單因素方差分析和Duncan’s多重比較分析組間的差異顯著性(P<0.05)，顯著水平(P)設定為0.05.數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計，均用平均值±標準差表示.

2 結果

2.1 蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體一般營養(yǎng)成分的影響

從表1可見，蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h后，1.2 g/L處理組粗蛋白的含量顯著高于其他3組(P<0.05)，0.4 g/L組粗脂肪含量顯著高于其他3組.試驗組粗灰分的含量均顯著低于對照組(P<0.05).1.2 g/L處理組鈣的含量顯著低于其他3組(P<0.05)，且這3組的差異不顯著(P>0.05).0.4g/L處理組總磷的含量顯著低于其他組(P<0.05)，其他各組之間總磷的含量差異不顯著(P>0.05).

表1 蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h對其一般營養(yǎng)成分的影響 %

注：字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同.

從表2可見，蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h后，1.2 g/L處理組粗蛋白質(zhì)含量顯著高于其他3組(P<0.05)，0.8 g/L處理組粗蛋白質(zhì)的含量顯著高于對照組和0.4 g/L處理組(P<0.05)，0.4 g/L處理組粗蛋白的含量顯著高于對照組(P<0.05).試驗組的粗脂肪含量顯著高于對照組(P<0.05)，0.4 g/L處理組的粗脂肪含量顯著高于其他3組(P<0.05).0.4 g/L處理組粗灰分的含量顯著高于其他3組(P<0.05)；對照組和0.8 g/L組粗灰分含量差異不顯著(P>0.05)，均低于其他兩組.0.8 g/L處理組鈣的含量顯著高于對照組和其他兩組(P<0.05).1.2 g/L處理組總磷的含量顯著高于0.8 g/L組和0.4 g/L組(P<0.05)，這兩組之間差異不顯著(P>0.05).蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h時的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的含量低于強化12 h時的含量.

表2 蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h對其一般營養(yǎng)成分的影響 %

2.2 蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體氨基酸組成的影響

從表3可見，不同質(zhì)量濃度的蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h后，1.2 g/L處理組蛋氨酸(Met)、天冬氨酸(Asp)、絲氨酸(Ser)、組氨酸(His)、纈氨酸(Val)、精氨酸(Arg)、半胱氨酸(Cys)、亮氨酸(Leu)和脯氨酸(Pro)的含量均顯著高于其他3組(P<0.05)；0.8 g/L組蘇氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)和賴氨酸(Lys)的含量顯著高于其他3組(P<0.05)；0.4 g/L組苯丙氨酸(Phe)和異亮氨酸(Ile)的含量顯著低于對照組(P<0.05)；0.8 g/L組總氨基酸含量顯著高于其他3組(P<0.05).

從表4可見，不同質(zhì)量濃度蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h后，1.2 g/L處理組蛋氨酸(Met)、天冬氨酸(Asp)、組氨酸(His)、色氨酸(Tyr)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)和賴氨酸(Lys)含量顯著高于其他3組(P<0.05)；0.8 g/L組的亮氨酸(Leu)和脯氨酸(Pro)含量顯著高于其他3組(P<0.05)；0.8 g/L組蘇氨酸的含量顯著低于對照組(P<0.05)；1.2 g/L組精氨酸(Arg)含量和對照組差異不顯著(P>0.05)，顯著高于其他兩組(P<0.05)；0.4 g/L組谷氨酸(Glu)和絲氨酸(Ser)的含量顯著高于其他3組(P<0.05).各試驗組丙氨酸(Ala)和半胱氨酸(Cys)的含量均顯著低于對照組(P<0.05)，賴氨酸(Lys)含量和對照組接近差異不顯著(P>0.05).1.2 g/L組的總氨基酸含量顯著高于其他3組(P<0.05).

表3 蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h對其氨基酸組成的影響 %

2.3 蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體脂肪酸組成的影響

從表5可見，蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h后，添加蛋氨酸的試驗組對脂肪酸的含量影響差異顯著(P<0.05).0.4 g/L組C12：0(月桂酸) 的含量顯著高于其他組(P<0.05)；0.8 g/L組C16：0(棕櫚酸)的含量顯著高于其他組(P<0.05)；0.8 g/L組C18：3n6(α-亞麻酸)的含量顯著高于其他試驗組和對照組(P<0.05)；試驗組C18：0(硬脂酸)、C20：4n6(花生四烯酸)和EPA(C20：5n3)的含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于對照組(P<0.05)；對照組和1.2 g/L組C14：0(豆蔻酸)的含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于其他兩組(P<0.05)；1.2 g/L組C16：1(棕櫚烯酸)的含量顯著高于對照組(P<0.05)；0.4 g/L組C18：1n9(油酸)的含量顯著高于其他3組(P<0.05)；C18：2n6(亞油酸)、C22：5n3(DPA)和C22：6n3(DHA) 的含量各組間差異不顯著(P>0.05).

從表6可見，蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h后，對脂肪酸的含量影響差異顯著(P<0.05).試驗組C16：0(棕櫚酸)和C16：1(棕櫚烯酸)的含量均顯著低于對照組 (P<0.05)；試驗組C18：1n9(油酸)的含量在0.8 g/L和1.2 g/L組差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于0.4 g/L組 (P<0.05)；0.8 g/L組C18：0(硬脂酸)和C20：4n6(花生四烯酸)的含量顯著高于對照組和其他試驗組(P<0.05)；1.2 g/L組和0.8 g/L組的C18：3n3(r-亞麻酸)和C20：5n3(EPA)的含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于0.4 g/L組(P<0.05)；0.8 g/L組C18：3n6(α-亞麻酸)的含量顯著高于0.4 g/L組(P<0.05).

表4 蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h對其氨基酸組成的影響 %

表5 蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h對其脂肪酸組成的影響 %

注：“—”示未檢出，下同.

表6 蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體24 h對其脂肪酸組成的影響 %

3 討論

3.1 蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體一般營養(yǎng)成分的影響

本試驗中，添加蛋氨酸能夠對鹵蟲無節(jié)幼體粗蛋白質(zhì)、粗脂肪及粗灰分含量產(chǎn)生顯著影響.強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h和24 h，1.2 g/L蛋氨酸添加組的粗蛋白含量顯著高于其他3組(P<0.05)，并且隨著蛋氨酸濃度水平的增加，鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)粗蛋白質(zhì)的含量呈顯著升高的趨勢.強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h和24 h，添加蛋氨酸的試驗組粗脂肪含量顯著高于對照組(P<0.05)，這與Koven[9]，彭艷等[12]和Schwarz等[13]的研究結果相似.本文的研究結果表明，添加不同濃度水平的蛋氨酸可以提高鹵蟲無節(jié)體內(nèi)蛋白質(zhì)的含量，且隨著添加濃度的增加而升高；大量的蛋氨酸參與蛋白質(zhì)的合成，增加了鹵蟲無節(jié)幼體體蛋白的沉積量.

3.2 蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體氨基酸含量的影響

Tonheim等的研究表明，添加蛋氨酸能提高鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)的蛋氨酸含量[10].本試驗表明，添加蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h和24 h后，鹵蟲體內(nèi)蛋氨酸的含量顯著升高，同時其他游離的必需氨基酸含量也顯著增加(P<0.05).

不同濃度水平蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h時，除了苯丙氨酸(Phe)和異亮氨酸(Ile)的含量試驗組低于對照組外，其他必需和非必需氨基酸的含量都有提高的趨勢；強化24 h時，除了蘇氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)和半胱氨酸(Cys)的含量低于對照組外，其他氨基酸的含量顯著增加(P<0.05).此結果與馬靜等的研究結果相似[14].鹵蟲無節(jié)幼體以體表滲透吸收方式吸收營養(yǎng)，其在單獨添加蛋氨酸強化條件下的營養(yǎng)吸收、合成和代謝機制等與大動物消化吸收及代謝機制明顯不同.

3.3 蛋氨酸對鹵蟲無節(jié)幼體脂肪酸含量的影響

添加不同濃度水平的蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體，對鹵蟲無節(jié)幼體脂肪酸組成有顯著的影響.在強化鹵蟲無節(jié)幼體12 h時，添加蛋氨酸能顯著提高鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)C18：3n6，C18：3n3，C20：4n6 和C20：5n3的含量，但在不同試驗組之間差異不顯著(P>0.05)；并且不同濃度水平的蛋氨酸對幼體體內(nèi)的DPA和DHA含量沒有顯著影響(P>0.05).強化24 h時，添加蛋氨酸能顯著提高鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)C18：3n6，C18：3n3，C20：4n6 和C20：5n3的含量，但0.8 g/L組和1.2 g/L組間差異不顯著(P>0.05).蛋氨酸強化鹵蟲無節(jié)幼體時其體內(nèi)脂肪酸含量變化情況與Evjemo的研究結果[15]相似，這可能是由于隨著時間的延長，鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)脂肪酸的損失增加所致.

4 結論

添加不同濃度水平的蛋氨酸強化12 h和24 h后，鹵蟲無節(jié)幼體體內(nèi)成分發(fā)生明顯變化.

(1) 鹵蟲無節(jié)幼體粗蛋白質(zhì)的含量隨著蛋氨酸添加水平的增加呈遞增的趨勢，1.2 g/L添加組粗蛋白質(zhì)的含量最高；所有試驗組鹵蟲無節(jié)幼體的粗脂肪含量均高于對照組，0.4 g/L添加組鹵蟲無節(jié)幼體粗脂肪的含量最高.

(2) 試驗組鹵蟲無節(jié)幼體大部分必需氨基酸和非必需氨基酸的含量呈遞增的趨勢，均較對照組要高，0.8 g/L和1.2 g/L添加組對鹵蟲無節(jié)幼體氨基酸含量的影響顯著(P<0.05).

(3) 0.8 g/L添加組的鹵蟲無節(jié)幼體脂肪酸(C16：0，C18：0，C18：3n6和C20：4n6)含量最高(P<0.05).

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(責任編輯：方 林)

Nutrition enhancing effect of methionine on body composition ofArtemianauplii

HUANG Quan1，2，SU Lin1

(1.College of Animal Science and Technology，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China；2.College of Fisheries，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China)

UsingArtemianaupliias research material，studied the effect of nutrition enhancing methionine onArtemianauplii，screening out the most suitable addition amount of methionine. The results showed that：through strengthening nutrition，have significant effect of methionine onArtemianaupliigeneral nutrients，amino acid and fatty acid content. Methionine enrichment ofArtemianaupliiof 12 h and 24 h，the content of crude protein is high in methionine group 1.2 g/L，higher fat content of methionine group 0.4 g/L；good strengthening effect of amino acids in methionine 0.8，1.2 g/L onArtemianauplii；methionine group 0.8 g/L onArtemianaupliifatty acid good strengthening effect.

methionine；nutrition enhancing；Artemianauplii；body composition

1000-1832(2014)04-0110-06

10.11672/dbsdzk2014-04-021

2014-06-12

國家自然科學基金資助項目(30671621).

黃權(1964—)，男，碩士，副教授，主要從事水生生物學研究.

S 963.21+4 [學科代碼] 240·20

A