律廣富,李 娜,林 ,曲曉波,楊 擎,王建瑋,林 賀

(長春中醫(yī)藥大學，長春 130117)

鹿角膠的主要成分為蛋白質(zhì)，鹿角膠始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，名為“白膠”，列為上品[1]。鹿角膠的應用有2000多年的歷史，中醫(yī)用之補益氣血、滋腎生精；主治腎氣不足、陽痿羸瘦、精血虛虧、神倦目昏、腰膝無力、婦女血閉不妊、子宮虛冷、崩漏帶下等癥[2]?？诜侵兴幖捌渲苿┳畛Ｒ姷呐R床給藥途徑之一，而吸收是口服制劑發(fā)揮療效的關(guān)鍵[3]。藥物吸收涉及藥物通過胃腸道上皮細胞膜的轉(zhuǎn)運進入血液循環(huán)，是決定口服藥物生物利用度的重要因素。影響藥物吸收的原因很多：藥物的溶解性，滲透性，化學結(jié)構(gòu)及胃腸道生理因素等[4]，小腸是口服制劑的主要吸收部位，藥物腸吸收在某一程度上能反映藥物口服后整體的吸收情況[5]。本實驗采用氨基酸分析儀檢測在不同時間點經(jīng)離體腸吸收后18種氨基酸的含量，探討鹿角膠在離體腸內(nèi)的吸收情況，為進一步研究鹿角膠在體內(nèi)吸收分布提供依據(jù)。鹿角膠中主要成分為蛋白質(zhì),其含量在50%以上，中國藥典2010年版一部“鹿角膠”項下含量測定方法為定氮法，該方法只能測定樣品中總的含氮量，不能準確地反映樣品中各種有效成分的真實情況[6]。本實驗采用氨基酸分析儀檢測18種常見氨基酸的含量，考察經(jīng)鹿角膠在腸道內(nèi)的吸收情況。

1 實驗材料

1.1 藥品 鹿角膠由長春中醫(yī)藥大學研發(fā)中心提供。

1.2 標準品 17種混合氨基酸標準品，購自Sigm公司;L-羥脯氨酸(美國Sigma公司，純度≥99.0%)；苯酚(重蒸)；0.1 mol/L鹽酸；實驗用水為18.2 MΩ。

1.3 儀器 日立835-50氨基酸分析儀，HW-2000氨基酸分析專用色譜工作站等；SJ-4型pH計(上海雷磁儀器廠)；透皮吸收儀(山東泰盟儀器有限公司)；eppendorf-80 ℃冰箱。

1.4 動物 雄性SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，清潔級，由吉林大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXX-(吉)2010-0005。

2 方法

2.1 氨基酸對照品貯備液的制備 精密稱取17種氨基酸混合標準品及L-羥脯氨酸標準品各20 μL至5 mL容量瓶，分別用0.1 mol/L的HCl定容至5 mL，制成標準品溶液。置于-4 ℃冰箱中保存，備用。

2.2 離體腸的制備 取SD大鼠，10%水合氯醛麻醉，打開腹腔，小心分離出小腸，剪斷(長度約2 cm)，縱向剖開，生理鹽水沖洗干凈，備用。

2.3 腸離體吸收實驗 取離體鼠腸，生理鹽水沖洗，將其固定于接收池與擴散池中間，使內(nèi)層面向供給池，供給池中加入鹿角膠樣品(8 mg/mL)釋放液，接受池精密加入10 mL生理鹽水，排除氣泡。有效擴散面積為1.76 cm2。池內(nèi)循環(huán)水溫度為37.5 ℃，恒速磁力攪拌100 r/min。加樣前將鼠腸內(nèi)層表面與接收液接觸，更換全部接收液，再給藥以便降低干擾。加樣平衡30 min開始計時，分別于1、2、4、6 h取樣，每次取樣1mL，同時補充1 mL預溫37 ℃生理鹽水。

2.4 樣品處理[7]稱取經(jīng)腸吸收后的樣品1 mL于蛋白水解管中，加6 mol/L鹽酸適量，滴入幾滴苯酚，充氮后封管，置于110 ℃烘箱中保持24 h，冷卻后經(jīng)濾紙過濾到20 mL容量瓶中，用超純水反復沖洗水解管及濾紙,最后定容至刻度。取1 mL的樣液于蒸發(fā)皿中在蒸氣浴上蒸干，加超純水重復3次，殘留物用0.02 mol/L HCl定容至10 mL，0.45 μm濾膜過濾，備用上機。

3 結(jié)果

3.1 采用氨基酸分析儀檢測鹿角膠腸吸收后樣品中氨基酸含量,結(jié)果見表1,圖1～6。

Q為T時間的累積滲透量(μg/cm2)，Cn為第n個取樣點的濃度(μg/μL)，A為滲透面積(本實驗中儀器釋放面積為1.76 cm2),V為接受液的總體積(10 mL)。結(jié)果見表2。

表1 鹿角膠腸吸收后樣品中氨基酸含量

圖1 混合氨基酸標準品

圖2 給藥前原液中氨基酸含量

圖3 腸吸收1 h后含量

圖4 腸吸收2 h后含量

圖5 腸吸收4 h后含量

圖6 腸吸收6 h后含量

氨基酸1 h(ng/20 μL)2 h(ng/20 μL)4 h(ng/20 μL)6 h(ng/20 μL)天冬氨酸(Asp) 185.730237.510261.145270.818蘇氨酸(Thr) 104.545125.575224.545294.537絲氨酸(Ser) 151.300172.235180.355236.115谷氨酸(Glu) 357.740440.180453.436511.205甘氨酸(Gly) 727.955914.950993.4051 132.765丙氨酸(Ala) 321.615401.325433.624485.555半胱氨酸(Cys) 136.075144.115145.612208.442纈氨酸(Val) 173.100177.595193.395226.465蛋氨酸(Met) 60.97561.39563.89663.325異亮氨酸(Ile) 54.33564.45186.23594.545亮氨酸(Leu) 146.920169.882178.635189.225酪氨酸(Tyr) 13.93513.98515.36119.945苯丙氨酸(Phe) 675.850574.297936.445996.766賴氨酸(Lys) 236.600260.720274.122300.675組氨酸(His) 53.48061.37569.06877.541精氨酸(Arg) 270.820344.165398.885434.385脯氨酸(Pro) 817.4151 046.9751077.1051161.328L-羥脯氨酸(Hyd) 46.52056.33593.895101.337總滲透量 4 534.9105 267.0556 079.1216 804.952

3.3 鹿角膠腸吸收速率常數(shù) 以總氨基酸的累積滲透量(Q)對時間T進行線性回歸，所得斜率即為鹿角膠的腸吸收的速率常數(shù)J(ng/cm2·h)。結(jié)果見圖7。

圖7 鹿角膠腸吸收速率常數(shù)

由圖7可知鹿角膠腸吸收的累積滲透回歸方程為：y=762.2x+3 766；其吸收速率常數(shù)為：762.2 ng/cm2·h。

4 討論

鹿角膠是用雄鹿已經(jīng)骨化的鹿角經(jīng)過水煮熬，去除渣質(zhì)后濃縮制成固體膠。該品顏色呈現(xiàn)出黃棕或紅棕色，膠質(zhì)半透明，上部分帶有黃白色泡沫層。質(zhì)地硬而脆，容易破碎，劈開斷面光潔，透過光照發(fā)現(xiàn)不混濁[8]。氣無，味微甜。鹿角膠入藥已經(jīng)有2000多年的歷史，最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。鹿角膠的作用具有滋肝補腎，增精止血的功效，治療青年人的虛勞羸弱，中老年人的腰膝酸痛，男子夜夢遺精，女子崩漏帶下等都有功效，用藥范圍針對各種人群極其廣泛[9]。近年來研究還發(fā)現(xiàn),鹿角膠有增加白細胞，治療大腦水腫的作用，特別是用于治療癌癥患者化療后的后遺癥療效更好?，F(xiàn)研究可入丸、散、膏劑[10]。鹿角膠作用廣泛，可作為藥材與其他類藥配伍應用，也可作為補益之品延年益壽，關(guān)于鹿角膠的研究已成為現(xiàn)代研究的熱點。

本實驗采用氨基酸分析儀定時測定鹿角膠經(jīng)腸吸收后接受液中各種氨基酸的含量，并計算其總氨基酸的累積滲透量、擴散速率等參數(shù)，結(jié)果顯示,鹿角膠經(jīng)腸吸收后4個時間點的接收液中18種常見氨基酸全部檢出，且6 h的總氨基酸的吸收率達到5.3%。其吸收速率為762.2 ng/cm2·h。結(jié)果表明，鹿角膠在離體腸內(nèi)有很好的透過性能，在體內(nèi)能夠迅速的被吸收利用。

鹿角膠不僅是名貴的中藥材，而且還是補益佳品，其作用廣泛，可與其他藥材配伍使用，也可單味入藥。本文在鹿角膠藥理藥效研究的基礎上，對鹿角膠的吸收情況做一探討，結(jié)果表明，鹿角膠在離體腸內(nèi)有很好的透過性能，在體內(nèi)能夠迅速的被吸收利用。為合理的利用和開發(fā)鹿產(chǎn)品提供參考。

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