黃志勇， 黃偉煌

（1.福建省南平出入境檢驗(yàn)檢疫局，福建南平353000；2.中山比克生物科技有限公司，廣東中山528427）

哺乳仔豬腹瀉是當(dāng)前眾多豬場(chǎng)的棘手問(wèn)題，是制約仔豬生長(zhǎng)性能的一個(gè)重要制約瓶頸，因此對(duì)應(yīng)用中藥制劑來(lái)降低仔豬腹瀉的研究意義重大。中獸醫(yī)辨證施治從整體觀念出發(fā)，以平衡陰陽(yáng)、協(xié)調(diào)臟腑功能、健脾消食為治則，采用的方劑多以提高免疫、增強(qiáng)體質(zhì)為主，對(duì)降低仔豬的腹瀉率有一定的作用。中藥對(duì)促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)發(fā)育的配方主要原則是補(bǔ)脾益氣、消食和胃[1]，以此降低腹瀉率。本研究采用復(fù)方中藥制劑作為母豬的飼料添加劑，防治哺乳仔豬腹瀉，并通過(guò)對(duì)仔豬相關(guān)血液生化指標(biāo)的分析進(jìn)行效果確定，以期為中藥制劑替代抗生素，生產(chǎn)無(wú)藥物殘留、健康生態(tài)的動(dòng)物食品開(kāi)辟一條新的用藥途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 長(zhǎng)大二元母豬所產(chǎn)的9窩哺乳仔豬，選擇的母豬按照年齡體重胎次相似的原則進(jìn)行挑選，采取血清所挑選的仔豬也按照體況相似的原則進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)藥品與試劑 復(fù)方中藥添加劑：主要原料為黃芪、黨參、茯苓、蒼術(shù)、龍膽草、魚(yú)腥草、半枝蓮、神曲、山楂、柴胡、甘草等[2]。購(gòu)于福州回春醫(yī)藥公司，按一定的比例配合，烘干，300目粉碎備用。試驗(yàn)試劑：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙二醛（MDA） 及超氧化物歧化酶（MDA） 試劑盒，購(gòu)置南京建成生物試劑盒有限公司；豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒，IDEXX公司產(chǎn)品。

主要儀器：安科Anke臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；電子天平，上海精密儀器儀表公司；恒溫水浴鍋，上海羌強(qiáng)儀器設(shè)備有限公司；UV-3200紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海精密儀器儀表公司；移液槍，Eppendorf；酶標(biāo)儀及洗板機(jī)，美國(guó)寶特。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)分組 選擇胎次年齡相同的長(zhǎng)大母豬所產(chǎn)的9窩仔豬供試驗(yàn)，試驗(yàn)分為中藥制劑試驗(yàn)組、抗生素對(duì)照組和空白對(duì)照組,各組采取血清20份，共計(jì)60份。

1.3.2 血液指標(biāo)測(cè)定 于斷奶前(未進(jìn)行豬瘟免疫，22日齡)采集仔豬血清，每頭母豬對(duì)應(yīng)仔豬采集血液，每組采集20份血樣，共計(jì)60份。血液采集完畢后，室溫放置2 h，3000r/min離心10min，得高質(zhì)量血清，4℃保存，按ALT、AST、MDA、SOD試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定；豬瘟抗體的按IDEXX公司豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

表1 腹瀉評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 中藥制劑對(duì)母豬產(chǎn)仔數(shù)及仔豬增重的影響

表3 中藥制劑對(duì)哺乳仔豬的腹瀉率和腹瀉指數(shù)的影響

表4 中藥制劑對(duì)仔豬血清中ALT 和AST 活性的影響

表5 中藥制劑對(duì)仔豬血清中MDA、 SOD 含量的影響

表6 中藥制劑對(duì)仔豬豬瘟抗體的影響

1.3.3 日常操作 試驗(yàn)組1組為中草藥飼料添加劑與營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑復(fù)合制成的4%母豬預(yù)混料，中草藥飼料添加劑按母豬飼料的0.5%添加。試驗(yàn)組2組為西藥抗菌素桿菌肽鋅與營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑復(fù)合制成的4%母豬預(yù)混料。試驗(yàn)組3組為營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑復(fù)合制成的4%母豬預(yù)混料，不含任何抗菌素和其他藥物[3]。

免疫程序按豬場(chǎng)正常免疫程序接種疫苗（7日齡注射肺炎支原體兔化弱毒凍干疫苗；14日齡藍(lán)耳病弱毒疫苗、25日齡接種豬瘟細(xì)胞苗），7日齡開(kāi)始補(bǔ)料，試驗(yàn)期間，自由采食，自由飲水。記錄好每組每天飼料的飼喂量，按公式(1)和(2)進(jìn)行仔豬腹瀉情況統(tǒng)計(jì)。

(1)腹瀉率=∑（腹瀉頭數(shù)×腹瀉天數(shù)） ÷（仔豬頭數(shù)×天數(shù)） ×100%

(2)腹瀉指數(shù)=糞便評(píng)分之和÷試驗(yàn)仔豬頭數(shù)

1.3.4 數(shù)據(jù)處理與分析 對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS13.0單因子方差(One-Way ANOVA)分析統(tǒng)計(jì)軟件包和Excell軟件統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中藥制劑對(duì)仔豬增重的影響 對(duì)仔豬增重情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并根據(jù)公式：平均日增重=(仔豬斷奶窩重-仔豬出生窩重)÷試驗(yàn)天數(shù)，來(lái)計(jì)算仔豬平均日增重，結(jié)果詳見(jiàn)表2。從表中可知，仔豬平均日增重中藥制劑組、抗生素組與空白對(duì)照組差異顯著(P≤0.05)；中藥制劑組與抗生素組差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 中藥制劑對(duì)仔豬腹瀉情況的影響 對(duì)仔豬的腹瀉情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，中藥制劑添加組與抗生素組的腹瀉率和腹瀉指數(shù)低于對(duì)照組且差異顯著(P≤0.05)；中藥制劑組與抗生素組間差異不顯著，說(shuō)明中藥制劑對(duì)降低哺乳仔豬的腹瀉情況有一定的作用，與使用抗生素作用相當(dāng)。

2.3 中藥制劑對(duì)仔豬血液生化指標(biāo)的影響

2.3.1 中藥制劑對(duì)仔豬血清中ALT和AST活性的影響按試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)仔豬血清進(jìn)行ALT和AST活性的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。從表中可知，中藥制劑組與抗生素組的ALT和AST活性均低于對(duì)照組，且差異顯著（P＜0.05）；其中抗生素組AST活性與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01），但中藥制劑組與抗生素組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3.2 中藥制劑對(duì)抗氧化指標(biāo)MDA、SOD的影響 從表5可知，中藥制劑組與抗生素組的MDA活性均高于對(duì)照組，且差異顯著（P＜0.05）；中藥制劑組SOD活性均高于對(duì)照組，且差異極顯著（P＜0.05），抗生素組SOD活性與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）；但中藥制劑組與抗生素組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3.3 中藥制劑對(duì)仔豬豬瘟抗體的影響 采用IDEXX豬瘟抗體試劑盒對(duì)仔豬血清豬瘟抗體進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑盒說(shuō)明，把阻斷率值≥40%判定為陽(yáng)性，＜40判定為陰性，結(jié)果詳見(jiàn)表6。從表中可知，中藥制劑組的陽(yáng)性率最高，其阻斷率與空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）；從變異系數(shù)（CV） 來(lái)看，中藥制劑組的CV值最小，即變幅較小，空白對(duì)照組CV值最大，即變幅較大，說(shuō)明中藥制劑組的哺乳仔豬獲得的母源抗體水平較充足且整齊度較好，對(duì)豬群生產(chǎn)的穩(wěn)定有一定的作用。

3 討論

3.1 中草藥飼料添加劑防治仔豬腹瀉的作用原理 本試驗(yàn)中采用的中草藥飼料添加劑主要作為免疫增強(qiáng)劑，目的在于篩選出能增強(qiáng)免疫作用的中草藥，兼有助消化和調(diào)味作用。方中采用的黃芪是最常用的中草藥免疫增強(qiáng)劑、黨參補(bǔ)脾益氣，蒼術(shù)燥濕健脾，與黃芪、黨參共顯健補(bǔ)脾胃、保護(hù)胃腸道功能的作用；龍膽草、魚(yú)腥草、半枝蓮是常用的抗菌增強(qiáng)免疫中草藥，藥理研究證明，半枝蓮對(duì)金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌等多種細(xì)菌和病毒都有抑制作用[4]；魚(yú)腥草除了對(duì)京科68-1株病毒有抑制作用以外，還能延緩?？?1株病毒引起的細(xì)胞病變，對(duì)多種致病菌都有抑制和殺滅作用，甚至在1：40000的濃度時(shí)仍有抑菌作用，魚(yú)腥草素能提高血清備解素的水平，而血清備解素是一種非特異性免疫因素，是存在于人和動(dòng)物血清內(nèi)的一種β 球蛋白，它在補(bǔ)體和鎂離子的參與下，能裂解含有多糖體的革蘭氏陰性桿菌，也能使某些病毒滅活[5]。所以采用魚(yú)腥草和半枝蓮在生態(tài)豬養(yǎng)殖中能起免疫殺菌和抗病毒作用。柴胡除了有抗炎、退熱和鎮(zhèn)靜作用外，還具有很強(qiáng)的抗菌、抗病毒作用，實(shí)驗(yàn)證明，柴胡對(duì)溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、結(jié)核桿菌和鉤端螺旋體有較強(qiáng)的抑制作用，并且對(duì)流感病毒、肝炎病毒等都有很強(qiáng)的抑制作用。除此之外，柴胡還有明顯的舒肝利膽降血脂作用。茯苓和山楂是常用的健脾消食藥，也是常用的免疫降血脂中草藥，藥理實(shí)驗(yàn)證明，茯苓還有保肝、促進(jìn)造血功能和抗菌作用；山楂能健胃消食、活血散瘀、降血壓和降血脂，并且還有調(diào)味作用。而且從豬的生理生化檢驗(yàn)指標(biāo)可見(jiàn)，其結(jié)果與中草藥飼料添加劑的作用機(jī)理相符合[6]。中藥制劑添加組與抗生素組的腹瀉率和腹瀉指數(shù)低于對(duì)照組且差異顯著(P≤0.05)；中藥制劑組與抗生素組間差異不顯著，說(shuō)明中藥制劑對(duì)降低哺乳仔豬的腹瀉情況有一定的作用，與使用抗生素作用相當(dāng)。

3.2 中藥制劑對(duì)仔豬血液生化指標(biāo)的影響 丙二醛（MDA） 是機(jī)體內(nèi)氧自由基代謝中產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物，MDA的含量與機(jī)體抗氧化性能密切相關(guān)，是衡量機(jī)體脂質(zhì)氧化程度的一個(gè)重要指標(biāo)[7]；超氧化歧化酶（SOD） 是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，作為活性氧清除劑參與清除體內(nèi)自由基，在防止機(jī)體衰老和生物分子損傷等方面具有重要的作用[8]；在正常情況下，血清中ALT和AST活性值較小，當(dāng)動(dòng)物機(jī)體發(fā)病或受損傷的組織范圍較大，肝臟損傷、病變，大量ALT和AST滲入血液，使得血液中ALT和AST活性升高[9]。本研究對(duì)仔豬血清相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，得出中藥制劑組與抗生素組的ALT和AST活性均低于對(duì)照組，與抗生素組間差異不顯著；中藥制劑組的MDA、SOD活性均高于對(duì)照組；與抗生素組間差異不顯著，說(shuō)明中藥制劑在改善仔豬的血液指標(biāo)ALT、AST和抗氧化指標(biāo)MDA、SOD均有一定的效果，而按照中草藥的藥理作用，黃芪本身就是一種雙向調(diào)節(jié)劑，。

3.3 中藥制劑對(duì)仔豬豬瘟抗體的影響 哺乳仔豬豬瘟抗體水平不合格的主要由以下原因造成的。第一，母源抗體的不足：王波[63]等對(duì)仔豬豬瘟抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行研究，研究發(fā)現(xiàn)仔豬的豬瘟抗體平均效價(jià)在1-7日齡基本上是高于母豬的抗體效價(jià)的，說(shuō)明仔豬在1日齡吮乳后對(duì)于母源抗體的吸收效率非常高；在7日齡之后，仔豬體內(nèi)的抗體卻開(kāi)始逐漸下降，說(shuō)明此時(shí)仔豬已經(jīng)不能再?gòu)哪溉橹形漳冈纯贵w進(jìn)入血液；在14-20日齡，雖然仔豬仍然吮食母乳，但體內(nèi)豬瘟抗體效價(jià)下降最為明顯。第二，傳染病是引起豬免疫抑制的主要原因，傳染病的發(fā)生可使豬對(duì)其他病原的易感性增強(qiáng)，甚至有些病毒直接侵襲豬的淋巴器官和免疫細(xì)胞，造成豬瘟抗體不合格。第三，種公豬精液的帶毒與母豬的帶毒，通過(guò)水平途徑或垂直途徑傳播給仔豬，導(dǎo)致仔豬帶毒，從而使仔豬豬瘟抗體水平不合格。本研究通過(guò)對(duì)未進(jìn)行免疫的哺乳仔豬（22日齡） 豬瘟抗體進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中藥制劑組的豬瘟抗體水平合格率最高，變異系數(shù)最小，推測(cè)可能是由于中藥制劑組母豬的泌乳力、母源抗體水平較高；或是因?yàn)閷?duì)哺乳仔豬采食了中藥制劑組，激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)了仔豬的免疫功能；或是共同作用導(dǎo)致的。而中草藥黃芪、魚(yú)腥草、半枝蓮、黨參、柴胡、甘草本身就是很好的免疫增強(qiáng)劑，這幾年來(lái)在動(dòng)物免疫過(guò)程或疫苗應(yīng)用過(guò)程中充當(dāng)了很重要的免疫佐劑的作用[10]。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明復(fù)方中藥制劑對(duì)降低哺乳仔豬的腹瀉率有一定的效果；同時(shí)對(duì)血清相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，得出中藥制劑可以不同程度改善哺乳的血清AST、ALT指標(biāo)及其抗氧化指標(biāo)SOD、MDA指標(biāo)，并且能夠提高豬瘟抗體合格率和整齊度，為中藥制劑逐步替代抗生素提供一條新的途徑。

[1]劉仲杰,許劍琴.中獸醫(yī)學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2011:35-280.

[2]金嶺梅,江立方.抗熱應(yīng)激中草藥飼料添加劑對(duì)豬血液生理常數(shù)的影響[J].家畜生態(tài),1999,(1):10-12.

[3]陳奇.中草藥藥理研究方法學(xué).[M].北京.人民衛(wèi)生出版社.1993.315-322.

[4]孫健,吳國(guó)娟.抗菌中藥的作用機(jī)理研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2007,43(2):42-43.

[5]李晶.中草藥免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1996(3):290-291.

[6]付秀花,王恬,顧宏偉.中草藥的免疫增強(qiáng)作用[J].畜牧與獸醫(yī),2002,34(8):41-42.

[7]李興國(guó),劉興金,魏恒,等.中藥免疫增效劑的研究應(yīng)用[J].2010(3):15-16.

[8]劉麗寧.傳統(tǒng)中藥臨床用藥優(yōu)勢(shì)之一多靶點(diǎn)探討[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(3):745-746.

[9]何士敏,方平,郭利佳.魚(yú)腥草抗氧化成份的研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2009,22(3):625-631.

[10]何正義,李福寶,吳翠娟,等.中藥復(fù)方制劑對(duì)生長(zhǎng)肥育豬生長(zhǎng)性能及血清免疫球蛋白的影響[J].養(yǎng)豬,2008(5):13-14.