程雪玲

(山西省陵川縣畜牧獸醫(yī)局,048300)

免疫膠體金快速診斷技術(shù)的起源比較早，最早可以在用以檢測(cè)血清和尿液的HCG(絨毛膜促性腺激素)的免疫滲濾試驗(yàn)這篇報(bào)道中看到，這篇報(bào)道的作者是Valkin，時(shí)間是上個(gè)世紀(jì)80年代。其試驗(yàn)方法和ELISA比較接近，經(jīng)過(guò)計(jì)算持續(xù)的時(shí)間僅僅5分鐘。1989年，用膠體金代替酶作為標(biāo)記物用于滲濾試驗(yàn)由Chun等學(xué)者提出。此外，在檢測(cè)抗人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體的試劑盒方面也取得了不錯(cuò)的成績(jī)，該試劑盒也得到了廣泛的應(yīng)用。免疫膠體金快速診斷技術(shù)目前的使用范圍非常廣，這和其快速簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)有著直接的關(guān)系，其主要的應(yīng)用范圍有：藥物測(cè)定、妊娠試驗(yàn)、檢測(cè)蛋白質(zhì)、檢測(cè)傳染病原抗體。但是，在獸醫(yī)診斷的應(yīng)用由于起步比較晚，因此技術(shù)還不夠成熟，應(yīng)用還不夠廣泛。

1 免疫膠體金快速診斷技術(shù)的基本原理

基本原理是將已知的特異性抗原或抗體固定于硝酸纖維素膜上某一區(qū)帶作為檢測(cè)帶，在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細(xì)作用，樣品泳動(dòng)至玻璃纖維膜，金標(biāo)復(fù)合物溶解，并與樣品進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，繼續(xù)泳動(dòng)至硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)，帶有金標(biāo)記的復(fù)合物被檢測(cè)區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色條帶。如樣品中沒(méi)有待測(cè)抗原或抗體，則不發(fā)生結(jié)合，即不顯色。在硝酸纖維素膜檢測(cè)區(qū)附近一般再固定上針對(duì)金標(biāo)結(jié)合物相應(yīng)的抗原或抗體作為質(zhì)控帶，無(wú)論樣品中有無(wú)待測(cè)物，質(zhì)控線都應(yīng)顯示，如無(wú)，則檢測(cè)失敗。整個(gè)過(guò)程一般在15分鐘內(nèi)完成，操作簡(jiǎn)單、快速，且不需任何儀器。比較常用的免疫膠體金快速診斷技術(shù)主要有免疫滲濾試驗(yàn)、免疫層析試驗(yàn)和滴金免疫滲濾試驗(yàn)。

1.1免疫滲濾試驗(yàn)

免疫滲濾試驗(yàn)的固相載體是微孔濾膜，將已知特異性抗原或抗體固定到微孔濾膜上，制成抗原活抗體寶貝的微孔濾膜并貼置于吸水材料上，依次在濾膜上滴加待檢樣本、免疫膠體金及洗滌液等試劑，并與濾膜上的相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，過(guò)量時(shí)機(jī)很快深入吸水材料中，抗原抗體反應(yīng)后，形成大分子膠體金復(fù)合物，從而使陽(yáng)性結(jié)果在抹上呈現(xiàn)紅色，液體通過(guò)微孔濾膜時(shí)，滲濾液中的抗原或抗體與膜上的抗體或抗原相接觸，起到親和層析的濃縮，達(dá)到快速檢測(cè)的目的，同時(shí)洗滌液的滲入在短時(shí)間內(nèi)即可達(dá)到徹底洗滌的目的。此種檢測(cè)方法簡(jiǎn)化了操作步驟，成為臨床檢驗(yàn)的主要方法之一。本方法除試驗(yàn)盒本身外，不需要任何儀器設(shè)備。

1.2金免疫層析試驗(yàn)

是用膠體金標(biāo)記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)結(jié)合的以微孔濾膜為載體的快速的固相膜免疫分析技術(shù)。本項(xiàng)技術(shù)是將各種反應(yīng)試劑分點(diǎn)固定在試紙條上，檢測(cè)標(biāo)本加在試紙條的一端，通過(guò)毛細(xì)血管作用使樣品溶液在層析材料上泳動(dòng)，樣本中的待測(cè)物與層析材料中的反應(yīng)試劑發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，形成的復(fù)合物被富集或固定在層析條上的特定區(qū)域（檢測(cè)線），通過(guò)標(biāo)記免疫技術(shù)顯色。本項(xiàng)技術(shù)的特點(diǎn)是可進(jìn)行單份標(biāo)本檢測(cè)且簡(jiǎn)便、快速、不需任何儀器設(shè)備，因此，發(fā)展非常迅速。

2 免疫膠體金快速診斷技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

免疫膠體金快速診斷技術(shù)的優(yōu)勢(shì)主要有以下幾個(gè)方面：（1）操作簡(jiǎn)單，方便。在進(jìn)行診斷時(shí)，除試劑盒外，不需要任何的儀器設(shè)備。且樣品僅需要一些簡(jiǎn)單的處理即可。（2）結(jié)果易于判定。檢驗(yàn)結(jié)果僅需肉眼即可判定陰、陽(yáng)性，不需要借助儀器。（3）特異性好，此種檢測(cè)方法應(yīng)用單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，特異性強(qiáng)。（4）快捷迅速。等待結(jié)果僅僅需要幾分鐘就可以了，但是使用其他方法需要等待的時(shí)間就比較長(zhǎng)，比如：使用ELISA需要一個(gè)小時(shí)左右、PCR的時(shí)間更長(zhǎng)。（5）靈敏度高。雖然免疫膠體金快速診斷技術(shù)非常迅速，但是其靈敏度絲毫沒(méi)有受到影響。

3 免疫膠體金快速診斷技術(shù)在獸醫(yī)診斷中的應(yīng)用

免疫膠體金快速診斷技術(shù)具有上述諸多優(yōu)點(diǎn)，因此獲得了廣泛的應(yīng)用，尤其是在一些缺乏專業(yè)人才以及設(shè)備的獸醫(yī)診斷單位之中。目前，市場(chǎng)上的快速診斷試劑主要是用來(lái)檢測(cè)以下疾?。何翢?、犬細(xì)小病毒、雞傳染性法氏囊病、豬繁殖與呼吸綜合癥、禽流感以及豬口蹄疫等。該技術(shù)可以使用不同的試劑盒實(shí)現(xiàn)對(duì)病原或抗體的檢測(cè)。

3.1免疫金快速診斷技術(shù)在抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

該方法一般是在NC膜上包被相應(yīng)的抗原,使用SPA或者膠體金標(biāo)記相應(yīng)抗原。假如樣品呈現(xiàn)出陽(yáng)性，就說(shuō)明樣品中的抗體和SPA或者膠體金標(biāo)記的特異性抗原結(jié)合，也就會(huì)看到紅色的點(diǎn)或者線；假如是陰性，就看不到紅色的點(diǎn)或者線。

有關(guān)研究人員構(gòu)建檢測(cè)豬瘟抗體水平的斑點(diǎn)免疫金滲濾法，對(duì)以下疾病進(jìn)行檢測(cè)：新城疫、禽流感、豬偽狂犬病、豬蘭耳病，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有交叉反應(yīng)。此外，針對(duì)200份豬血清使用了間接血凝試驗(yàn)與ELISA法開(kāi)展豬瘟抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)符合率分別為98.9%和98.4%。

3.2應(yīng)用免疫金快速診斷技術(shù)檢測(cè)病原

目前大多采用雙抗體夾心法。用兩種抗該病原的抗體用來(lái)包被NC膜和標(biāo)記膠體金。假如樣品呈現(xiàn)的是陽(yáng)性，那么樣品中的病原會(huì)和金標(biāo)抗體以及NC膜上的抗體結(jié)合，這樣我們就可以在NC膜上發(fā)現(xiàn)紅色的線或者點(diǎn)。假如時(shí)陰性，就看不到紅色的點(diǎn)或者線。有關(guān)研究人員構(gòu)建了檢測(cè)犬細(xì)小病毒的膠體金免疫層析法。通過(guò)對(duì)120份犬糞便樣品，發(fā)現(xiàn)結(jié)果和HA結(jié)果對(duì)比和分析之后，HA效價(jià)大于1：40，結(jié)果判定為陽(yáng)性。使用試紙條進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果也均為陽(yáng)性，且和犬瘟熱病毒及犬傳染性肝炎病毒并沒(méi)有交叉反應(yīng)。此外，在樣本保存半年之后再用該試紙進(jìn)行檢驗(yàn)，重復(fù)性也高達(dá)100%。

結(jié)束語(yǔ)：

作為一種新的診斷技術(shù)，免疫膠體金快速診斷技術(shù)是基于免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)建立起來(lái)的，最早產(chǎn)生于上個(gè)世紀(jì)80年代。免疫膠體金快速診斷技術(shù)主要被應(yīng)用在抗原抗體反應(yīng)之中，作為第四大免疫標(biāo)記技術(shù)，其和放射免疫技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)以及免疫熒光技術(shù)相比，具有很大的優(yōu)勢(shì)。目前，該技術(shù)在人醫(yī)的診斷方面應(yīng)用比較廣，例如：艾滋病、流行性出血熱、旋毛蟲(chóng)、瘧疾、乙型肝炎表面抗原等。其發(fā)展方向是實(shí)現(xiàn)定量或半定量檢測(cè)，這樣才能提高其敏感性與特異性，以及實(shí)現(xiàn)多元檢測(cè)。

[1]孔繁德.免疫膠體金滲濾法檢測(cè)豬溫抗體的試驗(yàn)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫.2011（23）.

[2]金顏輝.應(yīng)用金免疫層析技術(shù)檢測(cè)豬瘟抗體的研究[J]..中國(guó)動(dòng)物檢疫.2013(4).