李前勇 ，張德志 ，徐 蓉 ，吳艷秋 ，詹 飛 ，吳潤(rùn)彪

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市榮昌縣科學(xué)技術(shù)委員會(huì)，重慶 榮昌 402460）

1 四種流產(chǎn)性疾病的流行現(xiàn)狀

1.1 牛布氏桿菌病 布氏桿菌病是一種流行廣泛、危害很大的人畜共患性細(xì)菌性傳染病，我國(guó)對(duì)該病的控制標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定為血清陽(yáng)性率低于0.5%，但因頻繁引種、奶業(yè)生產(chǎn)快速發(fā)展等因素導(dǎo)致該病的發(fā)病率是控制標(biāo)準(zhǔn)的2倍以上，個(gè)別報(bào)道達(dá)到7.73%[1]。奶牛感染布氏桿菌后流產(chǎn)率可達(dá)31.2%。據(jù)報(bào)道，我國(guó)青海省每年因布病流產(chǎn)的犢牛約6萬(wàn)頭，新疆每年因布病流產(chǎn)、空懷等少生幼畜達(dá)100～140萬(wàn)頭[2]，造成的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重，對(duì)奶牛業(yè)的健康發(fā)展影響較大。

1.2 牛傳染性鼻氣管炎（IBR） 牛傳染性鼻氣管炎是由牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）引起的一種接觸性傳染病。我國(guó)奶牛感染較為嚴(yán)重，肖定漢等[3]報(bào)道，1991年至1995年期間北京地區(qū)奶牛IBRV的平均年感染率為8.03%，而1996～1998年的平均年感染率則上升到32.7%；艾玉萍等[4]報(bào)道，貴州省奶牛IBRV的感染率為5.45%；朱海明等[5]對(duì)我國(guó)北京、天津、山東、河北、河南、四川、云南等7個(gè)省市的牛群IBRV的感染狀況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果IBR陽(yáng)性率為29.45%，其中天津、山東、河南、云南4個(gè)地方的IBRV感染率達(dá)到30%以上；石冬梅等[6]報(bào)道，河南省奶牛IBRV抗體陽(yáng)性率為59.29%。

1.3 牛病毒性腹瀉-黏膜病（BVD） 牛病毒性腹瀉-黏膜病是由牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）引起的一種急性、熱性傳染病。本病主要是在上世紀(jì)80年代以后，我國(guó)從德國(guó)、丹麥、美國(guó)、新西蘭等國(guó)家引入種源時(shí)帶入的，多年來(lái)因人們對(duì)該病的重視程度不夠而導(dǎo)致目前呈現(xiàn)廣泛性流行趨勢(shì)。張俊杰等[7]報(bào)道，北京地區(qū)規(guī)?；膛?chǎng)牛群BVD的血清陽(yáng)性率達(dá)到94.1%；黑龍江省規(guī)模化奶牛場(chǎng)自2006年后連續(xù)3年監(jiān)測(cè)到 BVD感染率為54.66%、57.68%、62.09%[8]；湖南省規(guī)?；膛?chǎng)奶牛BVD的血清陽(yáng)性率為92.17%[9]；河南省奶牛BVD感染率為53.8%[10]；上海地區(qū)奶牛場(chǎng)育成牛的BVD血清陽(yáng)性率為43.3%、成年乳牛為37.8%、犢牛為96%[11]。

1.4 牛新孢子蟲病 奶牛新孢子蟲病是由犬新孢子蟲感染引起的一種原蟲病，對(duì)牛的危害嚴(yán)重。廣泛性分布于澳大利亞、美國(guó)、新西蘭、南非、歐洲及亞洲，感染率在10%～40%之間，最高可達(dá)82%。2002年，我國(guó)學(xué)者徐雪平等[12]在對(duì)新疆部分地區(qū)牛群新孢子蟲病的血清學(xué)調(diào)查中，首次檢出該病血清學(xué)陽(yáng)性牛，證明了我國(guó)牛群存在新孢子蟲??；此后，劉群等[13]報(bào)道了北京地區(qū)奶牛新孢子蟲病陽(yáng)性感染率為26.67%；蔡光烈等[14]報(bào)道了吉林省牛新孢子蟲病的感染率為17.32%；閆雙等[15]調(diào)查發(fā)現(xiàn)新疆地區(qū)具有流產(chǎn)病史的奶牛的新孢子蟲感染率為20.4%；吳茂霞等[16]報(bào)道，云南省奶牛新孢子蟲感染率為10.3%。

2 四種流產(chǎn)性疾病對(duì)奶牛生殖器官及功能的損害

2.1 布氏桿菌病 奶牛布氏桿菌病的病原主要是牛種布氏桿菌，其中1型、2型或3型布氏桿菌是引起奶牛流產(chǎn)的主要致病菌類型。懷孕奶牛感染后，因引發(fā)胎盤炎而導(dǎo)致妊娠后5～6個(gè)月內(nèi)流產(chǎn)，甚至產(chǎn)生子宮炎、敗血性全身感染，不少情況下還可引起奶牛多次流產(chǎn)。成年公牛感染后可引起睪丸炎和關(guān)節(jié)炎，是引起奶牛兩性不育的重要因素。

2.2 IBR 奶牛感染IBRV后，可經(jīng)血液循環(huán)進(jìn)入胎膜、胎兒，引起胎兒感染發(fā)病，呈現(xiàn)急性死亡，繼而導(dǎo)致奶牛流產(chǎn)。生產(chǎn)中調(diào)查發(fā)現(xiàn)，IBRV感染懷孕奶牛后多數(shù)在妊娠4～6月齡出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)第1、2胎次的母牛發(fā)病較多見[5]。

2.3 BVD BVDV感染后，影響母牛卵巢卵泡的發(fā)育，引起母牛發(fā)情紊亂、受精障礙；還可造成母牛子宮、卵巢上皮細(xì)胞呈現(xiàn)空泡樣變性、腫脹，甚至壞死，進(jìn)而導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)、死胎。

2.4 新孢子蟲病 犬是新孢子蟲的中間宿主和終末宿主，奶牛通過(guò)采食新孢子蟲孢子化卵囊污染過(guò)的草料和飲水后引起感染。進(jìn)入牛體內(nèi)的孢子化卵囊形成速殖子后，可通過(guò)胎盤垂直傳播，進(jìn)而感染胎牛，引起母牛流產(chǎn)、死胎，新生犢牛運(yùn)動(dòng)障礙、腦炎等。

3 四種流產(chǎn)性疾病的疫苗研究進(jìn)展

3.1 牛布氏桿菌疫苗 到目前為止，世界上大約有200多種布氏桿菌疫苗，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織與衛(wèi)生組織推薦牛使用的有流產(chǎn)布氏桿菌19號(hào)弱毒苗（S19號(hào)弱毒苗）、馬爾他布氏桿菌Rev·1號(hào)弱毒活苗（Rev·1菌苗）及流產(chǎn)布氏桿菌45/20號(hào)菌滅活佐劑苗（45/20菌苗）。在我國(guó)，主要推廣使用的布氏桿菌苗有豬布氏桿菌2號(hào)弱毒苗和馬耳他布氏桿菌5號(hào)弱毒苗，此兩種疫苗均為我國(guó)自主研制的優(yōu)良布魯氏菌苗，具有毒力穩(wěn)定、使用安全、免疫力好、免疫譜寬等優(yōu)點(diǎn)[17]。但各種傳統(tǒng)牛布氏桿菌病弱毒苗均存在不能用于懷孕母牛、免疫接種后產(chǎn)生的血清學(xué)反應(yīng)與野毒菌感染相似，臨床難于區(qū)分等缺點(diǎn)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者運(yùn)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在牛布氏桿菌新型疫苗方面進(jìn)行了許多探索。Tibor等[18]用抗卡那霉素基因置換B.abortus S19菌和B.melitensis Rev-1的p39基因，獲得了兩株布氏桿菌p39缺失的工程菌苗，兩株基因缺失工程菌苗消除了變態(tài)反應(yīng)源，既保存了傳統(tǒng)苗的免疫原性和保護(hù)率，又提高了疫苗使用的安全性；HeY.Q.等[19]用重組蒼白桿菌表達(dá)了流產(chǎn)布魯氏菌Cu-Zn SOD蛋白，小鼠實(shí)驗(yàn)表明該蛋白免疫原性較好，對(duì)流產(chǎn)布魯氏菌感染有一定的免疫保護(hù)力。

3.2 牛傳染性鼻氣管炎疫苗 早在1957年美國(guó)獸醫(yī)學(xué)家就用牛腎細(xì)胞傳代的方法獲得了牛IBR免疫原性好的弱毒疫苗，給牛肌肉注射后可以獲得較強(qiáng)的免疫力，但妊娠6～8月的母牛接種后極易引起流產(chǎn)；20世紀(jì)80年代，美國(guó)與比利時(shí)又研制成功了改良型的牛IBR弱毒疫苗，該苗采用滴鼻法接種，接種72h后即可獲得保護(hù)力，妊娠母牛也可安全使用。我國(guó)于20世紀(jì)90年代從匈牙利引進(jìn)牛IBR Bartna-Nu/8毒株，中國(guó)獸醫(yī)監(jiān)察所在此基礎(chǔ)上成功研制出了適合我國(guó)奶牛的IBR弱毒疫苗[5]；此后，我國(guó)自主分離致弱的IBRV LNM疫苗株獲得成功，并研制成了具有良好保護(hù)力的IBR疫苗[29]。與弱毒疫苗比較，滅活疫苗相對(duì)比較安全。用乙醇或皂角苷使IBRV強(qiáng)毒滅活，制成的滅活苗可使動(dòng)物獲得預(yù)防強(qiáng)毒攻擊的免疫能力；俄羅斯科學(xué)家采用細(xì)胞單層傳代培養(yǎng)法獲得了IBRV半制品制備的滅活疫苗，該疫苗免疫原性保持期可長(zhǎng)達(dá)4年[21]。

3.3 牛病毒性腹瀉-黏膜病疫苗 Oregon C24V株弱毒疫苗是世界上首個(gè)成功研發(fā)并用于奶牛生產(chǎn)的BVD疫苗[22]；我國(guó)青海省畜牧科學(xué)研究院自行研制的牛BVD弱毒疫苗在牦牛生產(chǎn)中使用后，能明顯降低牦牛BVD的發(fā)病率，疫苗安全無(wú)副作用[23]。此后，我國(guó)學(xué)者對(duì)BVD疫苗的研究報(bào)道十分活躍，侯衛(wèi)東等[24]研制出了BVD囊素油乳劑滅活苗，李海濤等[25]研制出了含BVD 2個(gè)血清型的弱毒疫苗。在牛BVD新型疫苗方面，王楠等[26]構(gòu)建了BVD pVAXI/E0重組質(zhì)粒疫苗，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)可產(chǎn)生較好的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答；吳明福等[27]構(gòu)建了含有BVD Oregon C24V株結(jié)構(gòu)蛋白P14、E2和非結(jié)構(gòu)蛋白NS33種基因的DNA疫苗。

3.4 新孢子蟲病疫苗 目前，國(guó)外牛新孢子蟲病唯一可靠的商品苗是Neoguard?牛新孢子蟲速殖子滅活蟲苗，該苗可在奶牛配種前或妊娠后前3個(gè)月注射，每次注射5mL，間隔半個(gè)月注射1次，共注射2次，每年免疫1～2次，注射該苗后可通過(guò)體液免疫和細(xì)胞免疫途徑使牛只獲得堅(jiān)強(qiáng)的抵抗力[28-29]；RomeroJ.J.等[30]研究證實(shí)，新孢子蟲速殖子滅活蟲苗接種奶牛后，流產(chǎn)的百分率下降了一半。在活疫苗研究方面，科學(xué)家分別采用改變培養(yǎng)溫度、γ射線誘導(dǎo)等方式篩選出了新孢子蟲弱毒株[31-32]，由此制成的弱毒苗免疫小鼠后均能減輕攻毒小鼠的大腦病理性變化，誘導(dǎo)小鼠機(jī)體產(chǎn)生免疫力。載體疫苗方面，Nishikawa等[33]構(gòu)建了含NcSRS2的病毒載體，運(yùn)用該載體免疫小鼠后能促進(jìn)γ-干擾素的產(chǎn)生，降低新孢子蟲在小鼠大腦中的定植，阻止新孢子蟲在小鼠子宮內(nèi)經(jīng)胎盤傳播；高建偉等[34]構(gòu)建了含新孢子蟲P0基因的真核表達(dá)載體pVAXI-NcP0，用該重組載體免疫沙鼠后，能促進(jìn)沙鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫。

4 小結(jié)

綜上所述，牛布氏桿菌病、傳染性鼻氣管炎、病毒性腹瀉-黏膜病及新孢子蟲病等感染奶牛后均可引起流產(chǎn)，而這四種疾病在我國(guó)奶牛群中的陽(yáng)性感染率多數(shù)較高，是導(dǎo)致我國(guó)奶牛流產(chǎn)率增高的重要因素之一。采用疫苗接種進(jìn)行防控是現(xiàn)實(shí)之需。傳統(tǒng)的布病苗、鼻氣管炎苗、病毒性腹瀉苗等盡管免疫效果較好，但卻存在排菌（毒）、妊娠期間接種會(huì)感染胎兒等問題，而牛新孢子蟲速殖子蟲苗大多還停留在實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段，且現(xiàn)有的商品級(jí)新孢子蟲苗的實(shí)際免疫效果也還存在爭(zhēng)論。上述四種疾病的新型疫苗均處于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段，與生產(chǎn)推廣的距離還很大。為保障整個(gè)奶牛產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，迫切需要加大科研投入，在傳統(tǒng)疫苗的優(yōu)化、新型疫苗的研發(fā)等多方面開展大量工作，盡早開發(fā)出安全、高效的新型疫苗。

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