李連強(qiáng)　權(quán)紅　王莉莎等

摘要：為了確定喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限和采收時(shí)期，采用HPLC法研究了不同生長年限的喜馬拉雅紫茉莉營養(yǎng)器官的生物量、魚藤酮類化合物boeravinone C（R1）總量及其分布的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明：林芝地區(qū)喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限為2年，最佳采收時(shí)期是9月中旬；喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中都含有R1，從而在一定程度上擴(kuò)大了其藥源，可以在一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產(chǎn)量的不足。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉；營養(yǎng)器官；魚藤酮類化合物；HPLC；動(dòng)態(tài)變化

中圖分類號(hào)：S567.230.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0255-03

收稿日期：2013-10-26

基金項(xiàng)目：國家科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：2011BAI13B06）；第四次全國中藥資源普查項(xiàng)目（編號(hào)：20120716-540000）；西藏自治區(qū)科技廳重大專項(xiàng)（編號(hào)：2011-68-20）。

作者簡介：李連強(qiáng)（1981—），男，云南彌渡人，碩士，講師，主要從事生物技術(shù)、瀕危藏藥材人工種植與示范的研究。E-mail：tibetfred@163.com。

通信作者：蘭小中，副教授，主要從事藥用植物資源教學(xué)與研究工作。E-mail：lanxiaozhong@163.com。喜馬拉雅紫茉莉常指紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heimerl]的根[1]，藏語名為巴朱，具有溫腎、益腎滋補(bǔ)、生肌、利尿、排石等功效，臨床上主要用于治療胃寒、腎寒、下身寒、陽萎浮腫等[2]。喜馬拉雅紫茉莉是十余個(gè)具有國藥準(zhǔn)字號(hào)的藏藥產(chǎn)品的主要原料之一，年需求量約500 t左右[3]，隨著喜馬拉雅紫茉莉制劑品種的不斷增多，喜馬拉雅紫茉莉藥材的需求量急劇上升。筆者所在課題組通過近3年的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，野生的喜馬拉雅紫茉莉基本上以雜草的形式零星分布于西藏林芝、昌都、山南地區(qū)和拉薩市的田間地頭，嚴(yán)重限制了以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)樵系牟厮幃a(chǎn)業(yè)的發(fā)展。經(jīng)過近6年的不斷摸索，筆者所在課題組已經(jīng)系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。但是喜馬拉雅紫茉莉的傳統(tǒng)藥用部位是根，其莖葉通常被人們棄之不用，若將其地上部位全部入藥，其藥源將明顯擴(kuò)大。

范海霞綜合應(yīng)用硅膠柱層析、凝膠柱層析和半制備HPLC 等技術(shù)，從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了一種魚藤酮類化合物（rotenoids）-boeravinone C（以下簡稱R1），并證實(shí)R1對(duì)多種癌細(xì)胞株都有較強(qiáng)的抑制作用[4]，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。本研究表明，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中均含有R1；本研究用HPLC法對(duì)筆者所在課題組在西藏林芝地區(qū)的西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)習(xí)基地人工種植的1年生、2年生、3年生喜馬拉雅紫茉莉根、莖、葉中的R1總量及其所占比例的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行研究，以期為擴(kuò)大藏藥巴朱的藥源提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

島津LC-20高效液相色譜儀（A泵：LC-20AD、B泵：LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器）；Mettler toledo PL203分析天平；Mettler toledo B-S天平；BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；KQ5200型超聲波清洗儀；BL-200型高速多功能粉碎機(jī)。

R1對(duì)照品由西南大學(xué)藥學(xué)院的陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制，用HPLC色譜歸一法測定純度> 98%；甲醇為色譜純；試驗(yàn)用水為“娃哈哈”純凈水，均經(jīng)0.45 μm濾膜濾過。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品的采集與處理1、2、3年生喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉樣品采自西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院的實(shí)習(xí)基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[M.himalaica （Edgew.）Heimerl]，鑒定后保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。采樣時(shí)間為2012年7至10月，每月15日左右采樣，共采樣4次。1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉分別平行采樣4株。將喜馬拉雅紫茉莉植株采挖后帶回分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，洗凈泥沙后分成根、莖、葉3個(gè)部分，置于105 ℃烘箱中殺青15 min后，60 ℃烘干至恒重。將同一次采收的1、2、3年生的根、莖、葉樣品粉碎后分別混合，過100目篩，備用。

1.2.2色譜條件Kromosil 100-5 C18柱（150×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（70 ∶30）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.2.3對(duì)照品及樣品溶液的制備

1.2.3.1對(duì)照品溶液的制備精確稱取4.05 mg烘干至恒重的R1對(duì)照品，用色譜純甲醇定容至25 mL即得濃度為0162 mg/mL的R1對(duì)照品母液。取1 mL R1對(duì)照品母液，用色譜純甲醇定容至5 mL即得濃度為0.0324 mg/mL的R1對(duì)照品溶液。

1.2.3.2R1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取濃度為0.032 4 mg/mL的R1對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1、3、5、7、9、12、15 μL（n=3），測定其峰面積。

1.2.3.3樣品溶液的制備精確稱取1.000 g左右樣品，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，濾過；合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，濾液作為樣品溶液。

1.2.4樣品中R1含量測定取5 μL上述樣品溶液，測定其峰面積。根據(jù)峰面積，由線性回歸方程計(jì)算R1的含量。

3結(jié)論

R1對(duì)多種癌細(xì)胞株都有較強(qiáng)的抑制作用，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。喜馬拉雅紫茉莉的傳統(tǒng)藥用部位是根，其莖葉可棄之不用，本研究采用HPLC法初步證實(shí)，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中都含有R1，其藥源將明顯擴(kuò)大，可以從一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產(chǎn)量的不足。在此基礎(chǔ)上，本研究以1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)椴牧?，采用HPLC法研究了不同采收期對(duì)喜馬拉雅紫茉莉營養(yǎng)器官中R1的總量和所占比例的動(dòng)態(tài)變化，根據(jù)藥用植物適宜采收期的確定原則[5-7]，認(rèn)為西藏林芝地區(qū)1年生喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收時(shí)期是9月中旬，最佳采收年限為2年。筆者建議在9月中旬采收喜馬拉雅紫茉莉的根，并對(duì)喜馬拉雅紫茉莉的莖和葉加以利用，這不僅提高了生產(chǎn)效益，也使喜馬拉雅紫茉莉的藥用資源得到更充分的利用。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì). 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：藏藥第一冊[S]. 1995：104.

[2]中國科學(xué)院西北高原生物研究所. 藏藥志[M]. 西寧：青海人民出版社，1991：14-16.

[3]松桂花. 淺析高海拔地區(qū)人工種植喜瑪拉雅紫茉莉技術(shù)市場推廣前景[J]. 中國民族醫(yī)藥雜志，2011，17（9）：85-86.

[4]范海霞. 喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D]. 重慶：西南大學(xué)，2012.

[5]陳榮，楊躍生，吳鴻. 不同采收期紫錐菊產(chǎn)量及菊苣酸動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 中草藥，2012，43（6）：1186-1190.

[6]漆小雪，韋 霄，陳宗游，等. 黃花蒿干物質(zhì)的積累及青蒿素與N、P、K量的動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 中草藥，2011，42（12）：2541-2544.

[7]王德立，張興翠，孫瀅. 野葛主要成分積累動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 中國藥學(xué)雜志，2008，43（13）：974-977.endprint

摘要：為了確定喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限和采收時(shí)期，采用HPLC法研究了不同生長年限的喜馬拉雅紫茉莉營養(yǎng)器官的生物量、魚藤酮類化合物boeravinone C（R1）總量及其分布的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明：林芝地區(qū)喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限為2年，最佳采收時(shí)期是9月中旬；喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中都含有R1，從而在一定程度上擴(kuò)大了其藥源，可以在一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產(chǎn)量的不足。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉；營養(yǎng)器官；魚藤酮類化合物；HPLC；動(dòng)態(tài)變化

中圖分類號(hào)：S567.230.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0255-03

收稿日期：2013-10-26

基金項(xiàng)目：國家科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：2011BAI13B06）；第四次全國中藥資源普查項(xiàng)目（編號(hào)：20120716-540000）；西藏自治區(qū)科技廳重大專項(xiàng)（編號(hào)：2011-68-20）。

作者簡介：李連強(qiáng)（1981—），男，云南彌渡人，碩士，講師，主要從事生物技術(shù)、瀕危藏藥材人工種植與示范的研究。E-mail：tibetfred@163.com。

通信作者：蘭小中，副教授，主要從事藥用植物資源教學(xué)與研究工作。E-mail：lanxiaozhong@163.com。喜馬拉雅紫茉莉常指紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heimerl]的根[1]，藏語名為巴朱，具有溫腎、益腎滋補(bǔ)、生肌、利尿、排石等功效，臨床上主要用于治療胃寒、腎寒、下身寒、陽萎浮腫等[2]。喜馬拉雅紫茉莉是十余個(gè)具有國藥準(zhǔn)字號(hào)的藏藥產(chǎn)品的主要原料之一，年需求量約500 t左右[3]，隨著喜馬拉雅紫茉莉制劑品種的不斷增多，喜馬拉雅紫茉莉藥材的需求量急劇上升。筆者所在課題組通過近3年的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，野生的喜馬拉雅紫茉莉基本上以雜草的形式零星分布于西藏林芝、昌都、山南地區(qū)和拉薩市的田間地頭，嚴(yán)重限制了以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)樵系牟厮幃a(chǎn)業(yè)的發(fā)展。經(jīng)過近6年的不斷摸索，筆者所在課題組已經(jīng)系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。但是喜馬拉雅紫茉莉的傳統(tǒng)藥用部位是根，其莖葉通常被人們棄之不用，若將其地上部位全部入藥，其藥源將明顯擴(kuò)大。

范海霞綜合應(yīng)用硅膠柱層析、凝膠柱層析和半制備HPLC 等技術(shù)，從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了一種魚藤酮類化合物（rotenoids）-boeravinone C（以下簡稱R1），并證實(shí)R1對(duì)多種癌細(xì)胞株都有較強(qiáng)的抑制作用[4]，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。本研究表明，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中均含有R1；本研究用HPLC法對(duì)筆者所在課題組在西藏林芝地區(qū)的西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)習(xí)基地人工種植的1年生、2年生、3年生喜馬拉雅紫茉莉根、莖、葉中的R1總量及其所占比例的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行研究，以期為擴(kuò)大藏藥巴朱的藥源提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

島津LC-20高效液相色譜儀（A泵：LC-20AD、B泵：LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器）；Mettler toledo PL203分析天平；Mettler toledo B-S天平；BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；KQ5200型超聲波清洗儀；BL-200型高速多功能粉碎機(jī)。

R1對(duì)照品由西南大學(xué)藥學(xué)院的陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制，用HPLC色譜歸一法測定純度> 98%；甲醇為色譜純；試驗(yàn)用水為“娃哈哈”純凈水，均經(jīng)0.45 μm濾膜濾過。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品的采集與處理1、2、3年生喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉樣品采自西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院的實(shí)習(xí)基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[M.himalaica （Edgew.）Heimerl]，鑒定后保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。采樣時(shí)間為2012年7至10月，每月15日左右采樣，共采樣4次。1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉分別平行采樣4株。將喜馬拉雅紫茉莉植株采挖后帶回分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，洗凈泥沙后分成根、莖、葉3個(gè)部分，置于105 ℃烘箱中殺青15 min后，60 ℃烘干至恒重。將同一次采收的1、2、3年生的根、莖、葉樣品粉碎后分別混合，過100目篩，備用。

1.2.2色譜條件Kromosil 100-5 C18柱（150×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（70 ∶30）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.2.3對(duì)照品及樣品溶液的制備

1.2.3.1對(duì)照品溶液的制備精確稱取4.05 mg烘干至恒重的R1對(duì)照品，用色譜純甲醇定容至25 mL即得濃度為0162 mg/mL的R1對(duì)照品母液。取1 mL R1對(duì)照品母液，用色譜純甲醇定容至5 mL即得濃度為0.0324 mg/mL的R1對(duì)照品溶液。

1.2.3.2R1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取濃度為0.032 4 mg/mL的R1對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1、3、5、7、9、12、15 μL（n=3），測定其峰面積。

1.2.3.3樣品溶液的制備精確稱取1.000 g左右樣品，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，濾過；合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，濾液作為樣品溶液。

1.2.4樣品中R1含量測定取5 μL上述樣品溶液，測定其峰面積。根據(jù)峰面積，由線性回歸方程計(jì)算R1的含量。

3結(jié)論

R1對(duì)多種癌細(xì)胞株都有較強(qiáng)的抑制作用，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。喜馬拉雅紫茉莉的傳統(tǒng)藥用部位是根，其莖葉可棄之不用，本研究采用HPLC法初步證實(shí)，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中都含有R1，其藥源將明顯擴(kuò)大，可以從一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產(chǎn)量的不足。在此基礎(chǔ)上，本研究以1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)椴牧?，采用HPLC法研究了不同采收期對(duì)喜馬拉雅紫茉莉營養(yǎng)器官中R1的總量和所占比例的動(dòng)態(tài)變化，根據(jù)藥用植物適宜采收期的確定原則[5-7]，認(rèn)為西藏林芝地區(qū)1年生喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收時(shí)期是9月中旬，最佳采收年限為2年。筆者建議在9月中旬采收喜馬拉雅紫茉莉的根，并對(duì)喜馬拉雅紫茉莉的莖和葉加以利用，這不僅提高了生產(chǎn)效益，也使喜馬拉雅紫茉莉的藥用資源得到更充分的利用。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì). 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：藏藥第一冊[S]. 1995：104.

[2]中國科學(xué)院西北高原生物研究所. 藏藥志[M]. 西寧：青海人民出版社，1991：14-16.

[3]松桂花. 淺析高海拔地區(qū)人工種植喜瑪拉雅紫茉莉技術(shù)市場推廣前景[J]. 中國民族醫(yī)藥雜志，2011，17（9）：85-86.

[4]范海霞. 喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D]. 重慶：西南大學(xué)，2012.

[5]陳榮，楊躍生，吳鴻. 不同采收期紫錐菊產(chǎn)量及菊苣酸動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 中草藥，2012，43（6）：1186-1190.

[6]漆小雪，韋 霄，陳宗游，等. 黃花蒿干物質(zhì)的積累及青蒿素與N、P、K量的動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 中草藥，2011，42（12）：2541-2544.

[7]王德立，張興翠，孫瀅. 野葛主要成分積累動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 中國藥學(xué)雜志，2008，43（13）：974-977.endprint

摘要：為了確定喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限和采收時(shí)期，采用HPLC法研究了不同生長年限的喜馬拉雅紫茉莉營養(yǎng)器官的生物量、魚藤酮類化合物boeravinone C（R1）總量及其分布的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明：林芝地區(qū)喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限為2年，最佳采收時(shí)期是9月中旬；喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中都含有R1，從而在一定程度上擴(kuò)大了其藥源，可以在一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產(chǎn)量的不足。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉；營養(yǎng)器官；魚藤酮類化合物；HPLC；動(dòng)態(tài)變化

中圖分類號(hào)：S567.230.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0255-03

收稿日期：2013-10-26

基金項(xiàng)目：國家科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：2011BAI13B06）；第四次全國中藥資源普查項(xiàng)目（編號(hào)：20120716-540000）；西藏自治區(qū)科技廳重大專項(xiàng)（編號(hào)：2011-68-20）。

作者簡介：李連強(qiáng)（1981—），男，云南彌渡人，碩士，講師，主要從事生物技術(shù)、瀕危藏藥材人工種植與示范的研究。E-mail：tibetfred@163.com。

通信作者：蘭小中，副教授，主要從事藥用植物資源教學(xué)與研究工作。E-mail：lanxiaozhong@163.com。喜馬拉雅紫茉莉常指紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heimerl]的根[1]，藏語名為巴朱，具有溫腎、益腎滋補(bǔ)、生肌、利尿、排石等功效，臨床上主要用于治療胃寒、腎寒、下身寒、陽萎浮腫等[2]。喜馬拉雅紫茉莉是十余個(gè)具有國藥準(zhǔn)字號(hào)的藏藥產(chǎn)品的主要原料之一，年需求量約500 t左右[3]，隨著喜馬拉雅紫茉莉制劑品種的不斷增多，喜馬拉雅紫茉莉藥材的需求量急劇上升。筆者所在課題組通過近3年的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，野生的喜馬拉雅紫茉莉基本上以雜草的形式零星分布于西藏林芝、昌都、山南地區(qū)和拉薩市的田間地頭，嚴(yán)重限制了以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)樵系牟厮幃a(chǎn)業(yè)的發(fā)展。經(jīng)過近6年的不斷摸索，筆者所在課題組已經(jīng)系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。但是喜馬拉雅紫茉莉的傳統(tǒng)藥用部位是根，其莖葉通常被人們棄之不用，若將其地上部位全部入藥，其藥源將明顯擴(kuò)大。

范海霞綜合應(yīng)用硅膠柱層析、凝膠柱層析和半制備HPLC 等技術(shù)，從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了一種魚藤酮類化合物（rotenoids）-boeravinone C（以下簡稱R1），并證實(shí)R1對(duì)多種癌細(xì)胞株都有較強(qiáng)的抑制作用[4]，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。本研究表明，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中均含有R1；本研究用HPLC法對(duì)筆者所在課題組在西藏林芝地區(qū)的西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)習(xí)基地人工種植的1年生、2年生、3年生喜馬拉雅紫茉莉根、莖、葉中的R1總量及其所占比例的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行研究，以期為擴(kuò)大藏藥巴朱的藥源提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

島津LC-20高效液相色譜儀（A泵：LC-20AD、B泵：LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器）；Mettler toledo PL203分析天平；Mettler toledo B-S天平；BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；KQ5200型超聲波清洗儀；BL-200型高速多功能粉碎機(jī)。

R1對(duì)照品由西南大學(xué)藥學(xué)院的陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制，用HPLC色譜歸一法測定純度> 98%；甲醇為色譜純；試驗(yàn)用水為“娃哈哈”純凈水，均經(jīng)0.45 μm濾膜濾過。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品的采集與處理1、2、3年生喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉樣品采自西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院的實(shí)習(xí)基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[M.himalaica （Edgew.）Heimerl]，鑒定后保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。采樣時(shí)間為2012年7至10月，每月15日左右采樣，共采樣4次。1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉分別平行采樣4株。將喜馬拉雅紫茉莉植株采挖后帶回分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，洗凈泥沙后分成根、莖、葉3個(gè)部分，置于105 ℃烘箱中殺青15 min后，60 ℃烘干至恒重。將同一次采收的1、2、3年生的根、莖、葉樣品粉碎后分別混合，過100目篩，備用。

1.2.2色譜條件Kromosil 100-5 C18柱（150×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（70 ∶30）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.2.3對(duì)照品及樣品溶液的制備

1.2.3.1對(duì)照品溶液的制備精確稱取4.05 mg烘干至恒重的R1對(duì)照品，用色譜純甲醇定容至25 mL即得濃度為0162 mg/mL的R1對(duì)照品母液。取1 mL R1對(duì)照品母液，用色譜純甲醇定容至5 mL即得濃度為0.0324 mg/mL的R1對(duì)照品溶液。

1.2.3.2R1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取濃度為0.032 4 mg/mL的R1對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1、3、5、7、9、12、15 μL（n=3），測定其峰面積。

1.2.3.3樣品溶液的制備精確稱取1.000 g左右樣品，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，濾過；合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，濾液作為樣品溶液。

1.2.4樣品中R1含量測定取5 μL上述樣品溶液，測定其峰面積。根據(jù)峰面積，由線性回歸方程計(jì)算R1的含量。

3結(jié)論

R1對(duì)多種癌細(xì)胞株都有較強(qiáng)的抑制作用，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。喜馬拉雅紫茉莉的傳統(tǒng)藥用部位是根，其莖葉可棄之不用，本研究采用HPLC法初步證實(shí)，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養(yǎng)器官中都含有R1，其藥源將明顯擴(kuò)大，可以從一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產(chǎn)量的不足。在此基礎(chǔ)上，本研究以1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)椴牧?，采用HPLC法研究了不同采收期對(duì)喜馬拉雅紫茉莉營養(yǎng)器官中R1的總量和所占比例的動(dòng)態(tài)變化，根據(jù)藥用植物適宜采收期的確定原則[5-7]，認(rèn)為西藏林芝地區(qū)1年生喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收時(shí)期是9月中旬，最佳采收年限為2年。筆者建議在9月中旬采收喜馬拉雅紫茉莉的根，并對(duì)喜馬拉雅紫茉莉的莖和葉加以利用，這不僅提高了生產(chǎn)效益，也使喜馬拉雅紫茉莉的藥用資源得到更充分的利用。

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