柯 峰左可可顧 寧

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210001）

·研究報(bào)告·

冠心Ⅴ號(hào)合劑對(duì)急性心肌梗死模型大鼠心室重構(gòu)及炎癥因子的影響*

柯 峰1左可可1顧 寧2△

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210001）

目的 探討冠心Ⅴ號(hào)合劑干預(yù)急性心肌梗死后心室重構(gòu)的機(jī)制。方法 SD大鼠60只，選取7只作為空白對(duì)照組，其余均采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法，制成急性心肌梗死模型。造模成功后，隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、血脂康膠囊組（10 mg/kg）和冠心Ⅴ號(hào)合劑大（20 mg/kg）、中（10 mg/kg）、?。? mg/kg）劑量組，另設(shè)空白組，大鼠7只。各組大鼠于術(shù)后第3日開始灌胃，每日1次，連續(xù)28 d，其中模型組、假手術(shù)組、空白對(duì)照組均給予生理鹽水。28 d后，檢測(cè)各組大鼠超聲心動(dòng)圖指標(biāo)，并測(cè)定血清白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量。結(jié)果 與空白組相比，模型組大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)（EF）、左室短軸縮短率（FS）明顯下降（P＜0.05），左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）明顯增大（P＜0.05），血清白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α含量顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，各藥物干預(yù)組大鼠EF、FS顯著增加，LVMI顯著減小，血清IL-6、TNF-α含量顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與血脂康組比較，冠心Ⅴ號(hào)合劑大劑量組大鼠EF、FS明顯升高，LVMI明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＜0.05﹚，冠心Ⅴ號(hào)合劑大、中劑量組大鼠血清IL-6、TNF-α含量明顯下降（P＜0.05）。結(jié)論 冠心Ⅴ號(hào)合劑能改善急性心肌梗死模型大鼠心臟結(jié)構(gòu)及心功能，并減少血清炎癥因子的釋放，這可能是其干預(yù)急性心肌梗死后心室重構(gòu)的機(jī)制之一。

冠心Ⅴ號(hào)合劑 急性心肌梗死 心室重構(gòu) 白介素細(xì)胞-6 腫瘤壞死因子-α

急性心肌梗死（AMI）后心室重構(gòu)（VR）是心肌梗死后心肌組織結(jié)構(gòu)、心室大小、形態(tài)、功能發(fā)生變化的病理生理過程，是心肌梗死后心功能進(jìn)行性惡化的主要病理生理機(jī)制［1］。其主要涉及炎癥細(xì)胞因子過度表達(dá)、神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及氧化應(yīng)激的過度激活等。冠心Ⅴ號(hào)合劑是在臨床應(yīng)用多年，其能夠明顯改善心肌梗死后心室重構(gòu)，其作用可能是通過改善血流動(dòng)力學(xué)、影響RASS系統(tǒng)及AT1/AT2的調(diào)節(jié)等方面實(shí)現(xiàn)的［2-6］，但其多途徑的作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步闡明。因此，本研究基于AMI模型大鼠炎癥因子的表達(dá)，進(jìn)一步探討冠心V號(hào)合劑干預(yù)AMI后VR的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量180～200 g，購自南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SUXK（浙）20080033。

1.2 藥物 冠心Ⅴ號(hào)合劑，南京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科，批號(hào)：蘇藥制字Z04000781；血脂康膠囊，北京北大維信生物科技有限公司，批號(hào)：Z10950029。

1.3 儀器與試劑 ECG-6511型動(dòng)物心電圖機(jī) （上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司），ALC-V8型小動(dòng)物呼吸機(jī)（上海奧爾科特生物科技有限公司），KUBOTA-5420型離心機(jī)（KUBOTA Corporation），Vevo 2100型彩超儀（VisualSonics Inc），680型酶標(biāo)儀 （BIORAD Corporation），BD-166型海爾雪王子電冰箱（青島海爾股份有限公司），Kit 96T ELISA試劑盒（北京四正柏生物科技有限公司）。

1.4 模型制備 隨機(jī)選取7只大鼠作為空白組，其余大鼠依據(jù)文獻(xiàn)方法［7］改良后制作AMI大鼠模型：用10%水合氯醛溶液（4 mL/kg）將大鼠腹腔注射麻醉，氣管插管，接呼吸機(jī)及心電圖機(jī)，手術(shù)部位備皮、消毒，經(jīng)左側(cè)第4肋間剪開皮膚，于3～4肋間鈍性分離肌肉組織，開胸快速擠出心臟，于前降支下約2～3 mm處結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，觀察左室前壁部分心肌變白，局部收縮減弱，心電圖描記見Ⅱ?qū)?lián)ST段較術(shù)前抬高0.2 mV以上為造模成功。假手術(shù)組除不接扎外，其余操作同上。術(shù)后每日肌肉注射青霉素40000 U，連用3 d預(yù)防感染。

1.5 分組與給藥 將造模成功的42只SD大鼠隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、血脂康膠囊組（10 mg/kg）和冠心V號(hào)合劑大（20 mg/kg）、中（10 mg/kg）、小（5 mg/kg）劑量組，另設(shè)空白組，大鼠7只。各組大鼠于術(shù)后第3日開始灌胃，每日1次，連續(xù)28 d，其中模型組、假手術(shù)組、空白對(duì)照組均給予生理鹽水10 mL/kg。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 大鼠超聲心動(dòng)圖檢測(cè) 各組大鼠干預(yù)至28 d時(shí)，進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查，檢測(cè)左心室射血分?jǐn)?shù)（EF）、左室短軸縮短率（FS）及左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。

1.6.2 大鼠血清白細(xì)胞介素 （IL）-6與腫瘤壞死因子（TNF）-α測(cè)定 超聲心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)束后，于大鼠頸動(dòng)脈處取血3～5 mL，靜置2 h，3000 r/min離心10 min后取上清液，按照ELISA試劑盒說明書操作步驟檢測(cè)各組大鼠血清中IL-6和TNF-α含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)過程中大鼠先后死亡共計(jì)9只 （包括因灌胃死亡4只，其余5只均因AMI后相關(guān)并發(fā)癥），其中模型組、血脂康組、冠心Ⅴ號(hào)合劑小劑量組各2只，假手術(shù)組、冠心Ⅴ號(hào)合劑大劑量組、冠心Ⅴ號(hào)合劑中劑量組各1只。

2.1 各組大鼠EF、FS及LVMI的比較 見表1，圖1?？瞻捉M與假手術(shù)組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＞0.05﹚；模型組及各藥物干預(yù)組與空白組比較，大鼠EF、FS明顯下降，LVMI明顯增大，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＜0.05﹚，提示模型組及各藥物干預(yù)組大鼠發(fā)生了一定程度的左室重構(gòu)。各藥物干預(yù)組與模型組之間比較，大鼠EF、FS均有不同程度改善，LVMI均有不同程度減小﹙P＜0.05﹚；與血脂康組比較，冠心Ⅴ號(hào)合劑大劑量組大鼠EF、FS明顯升高，LVMI明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＜0.05﹚，而冠心Ⅴ號(hào)合劑中劑量組大鼠EF、FS無明顯升高，LVMI無明顯下降，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＞0.05﹚。

表1 各組大鼠EF、FS及LVMI檢測(cè)結(jié)果比較（s）

表1 各組大鼠EF、FS及LVMI檢測(cè)結(jié)果比較（s）

與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與血脂康組比較，▲P＜0.05。下同。

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圖1 各組大鼠心臟結(jié)構(gòu)圖

2.2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α的比較 見表2。空白組與假手術(shù)組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＞0.05﹚；模型組、各藥物干預(yù)組與空白組比較，大鼠血清IL-6、TNF-α含量顯著升高﹙P＜0.05﹚；各藥物干預(yù)組與模型組相比，大鼠血清IL-6、TNF-α含量顯著下降﹙P＜0.05﹚；冠心Ⅴ號(hào)合劑大、中劑量組與血脂康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＜0.05﹚。

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α比較（pg/mL，s）

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α比較（pg/mL，s）

組別 n空白組 7模型組 5假手術(shù)組 6 IL-6 TNF-α 4.69±0.75 26.31±2.48 32.10±6.18*120.24±13.11*6.45±0.66 29.88±4.23血脂康組 5 19.80±1.12*△74.52±4.10*△冠心V號(hào)合劑大劑量組 6 17.23±0.65*△▲69.47±2.54*△▲冠心V號(hào)合劑中劑量組 6 17.85±0.97*△▲72.37±2.43*△▲冠心V號(hào)合劑小劑量組 5 18.18±0.69*△78.00±3.04*△

3 討 論

AMI后VR指AMI后機(jī)體通過一系列的復(fù)雜機(jī)制，使心肌結(jié)構(gòu)、功能發(fā)生變化的動(dòng)態(tài)過程。其主要病理過程是發(fā)生心肌細(xì)胞的增粗、增長，心肌質(zhì)量的增加、間質(zhì)成分的增多、毛細(xì)血管相對(duì)減少，心壁的增厚、心腔容積的擴(kuò)大、心腔形狀的改變等一系列的變化，使心功能由代償轉(zhuǎn)向失代償最終導(dǎo)致慢性心力衰竭［8］。有研究表明［9-12］，AMI后炎癥反應(yīng)是發(fā)生VR的重要機(jī)制與環(huán)節(jié)，其通過級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，產(chǎn)生大量炎癥細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6、TNF-α、C反應(yīng)蛋白等。這些炎癥細(xì)胞因子不僅引起心肌細(xì)胞肥大、心肌組織空間結(jié)構(gòu)改變，而且還會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡等變化，導(dǎo)致VR的發(fā)生［13］。而在諸多炎癥因子中，又以IL-6和TNF-α為多見［14］。因此，通過抑制AMI后IL-6和TNF-α的釋放，成為干預(yù)AMI后VR的重要途徑之一。近年來已有眾多研究表明［15-18］，他汀類藥物可通過抑制AMI后炎癥因子的表達(dá)，從而具有一定程度干預(yù)VR的發(fā)生及改善心功能的作用。研究表明，血脂康膠囊（主要成分為紅曲、洛伐他汀等）能明顯降低急性冠脈綜合征患者炎癥因子的表達(dá)，發(fā)揮心血管保護(hù)及抑制VR的作用［19］，顯著抑制患者血清TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)，從而干預(yù)VR的發(fā)生［20-21］。

AMI在中醫(yī)學(xué)中可歸屬“胸痹”、“真心痛”等范疇，其基本病機(jī)總屬本虛標(biāo)實(shí)，本虛以氣虛、陰虛為主，標(biāo)實(shí)則以血瘀最為重要。氣陰兩虛、瘀血阻滯為AMI后特定階段的重要病機(jī)，故益氣養(yǎng)陰、活血化瘀為其主要治療原則之一。冠心Ⅴ號(hào)合劑組成為黨參、麥冬、丹參、赤芍、五味子（制）、地黃。方中黨參益氣生津?yàn)榫?，麥冬養(yǎng)陰潤燥，五味子酸斂生津、補(bǔ)腎寧心，三藥合用，一補(bǔ)一潤一斂，同舉益氣養(yǎng)陰之力；丹參活血化瘀、寧心安神止痛，赤芍化瘀止痛、涼血活血，地黃涼血生津，共助活血化瘀之效。諸藥配伍，齊奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀之功效。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，冠心Ⅴ號(hào)合劑在降低模型大鼠血清IL-6和TNF-α含量方面，與血脂康膠囊有部分相類似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。研究表明，冠心Ⅴ號(hào)合劑能顯著改善AMI模型大鼠心臟結(jié)構(gòu)及心功能，而影響大鼠血清炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α水平、抑制炎癥反應(yīng)可能是干預(yù)AMI后VR的機(jī)制之一，并呈現(xiàn)出冠心Ⅴ號(hào)合劑抑制炎癥反應(yīng)強(qiáng)度具有劑量依賴性的趨勢(shì)。這為冠心Ⅴ號(hào)合劑的臨床應(yīng)用，提供了更加充分的客觀依據(jù)。

本研究初步探索了冠心Ⅴ號(hào)合劑通過抑制炎癥反應(yīng)途徑從而干預(yù)AMI后VR的部分作用機(jī)制。但中藥制劑存在多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)的作用，因此，冠心Ⅴ號(hào)合劑干預(yù)AMI后VR的作用機(jī)制，尚需系統(tǒng)、全面、深入的藥學(xué)研究、藥理研究及隨機(jī)、對(duì)照、大樣本、多中心的臨床研究提供依據(jù)并加以證實(shí)。

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Effect of Guanxin MixtureⅤ on Ventricular Remodeling and Inflammatory Factor in Rats with Acute Myocardial Infarction

KE Feng1，ZUO Keke1，GU Ning2. 1 Nanjing University of Chinese Medical，Jiangsu，Nanjing 210029，China；2 The Third Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medical，Jiangsu，Nanjing 210001，China

Objective：To explore the mechanisms and the different effects of Guanxin Mixture V interfere VR after AMI from the perspective of inflammatory factor in rats with AMI.Methods：60 SD rats were slected，among which 7 rats were set as blank control group，and the others were made AMI models by ligating the left anterior desecending coronary arteries.42 successfully made models were randomized into the AMI group，sham operation group，Guanxin Mixture V 20 mg/kg group，Guanxin Mixture V 10 mg/kg group，Guanxin Mixture V 5 mg/kg group and Xuezhikang Granule group with 7 rats in each group.Guanxin mixture V of each doses group were given relevant doses drug including the blank control group，sham operation group.AMI model group were administered normal saline.28 days later，each group was detected echocardiography，IL-6 and TNF-α.Results：Comparing with the blank control group，the EF and the FS were decreased，the LVMI was increased significantly and the contents of IL-6 and TNF-α were increased significantly in the AMI model group（P＜0.05）.Comparing with the AMI model group，the EF and the FS were increased significantly（P＜0.05），while the LVMI and the contents of IL-6 and TNF-α were decreased significantlyin the Guanxin Mixture V of each doses group and Xuezhikang Granule group（P＜0.05）.Comparing with the Xuezhikang Granule group，the EF and the FS were increased significantly（P＜0.05），while the LVMI was decreased significantly（P＜0.05）in the Guanxin Mixture V large-doses group.The contents of IL-6 and TNF-α were decreased significantlyin the Guanxin Mixture V large-doses group and moderate-doses group（P＜0.05）.Conclusion：Guanxin Mixture V could improve cardiac structure and function in rats with AMI，and reduce the release of inflammatory factors in serum，which may be one of the mechanisms to improve VR after AMI.

Guanxin Mixture V；Acute myocardial infarction；Ventricular remodeling；Interleukin-6；Tumor necrosis factor-α

R285.5

A

1004-745X（2014）11-1997-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.11.013

2014-08-01）

江蘇省南京市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)科技發(fā)展項(xiàng)目（201108005）；江蘇省研究生創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目（CXZZ13_06）

△通信作者