姚傳山 馬磊 趙旭林 賀利民

·臨床醫(yī)學(xué)·

CD34、VEGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

姚傳山 馬磊 趙旭林 賀利民

目的 探討CD34及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)、關(guān)系及臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢32例肺癌組織和25例癌旁組織中VEGF表達(dá)及MVD值,觀察二者數(shù)值變化與組織學(xué)類型、分化程度和淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果 與瘤旁組織比較, 瘤組織中MVD值及VEGF表達(dá)陽性率高(P＜0.05)；VEGF表達(dá)陽性率及MVD值的升高大致與臨床Ⅰ～Ⅳ期的升高呈正相關(guān)；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較, 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者瘤組織中MVD值及VEGF表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與組織類型及分化程度病理特征因素之間的瘤組織的MVD值與VEGF表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 NSCLC組織中CD34和VEGF常常為高表達(dá),二者具有正相關(guān)性, 與腫瘤的TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

CD34；血管內(nèi)皮生長因子；非小細(xì)胞肺癌；表達(dá)

肺癌是目前常見惡性腫瘤之一, 其病死率居惡性腫瘤首位［1］, 其分為非小細(xì)胞肺癌及小細(xì)胞肺癌, 其中非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)大約占肺癌類型的80%。諸多研究已經(jīng)證實血管新生是促進(jìn)腫瘤生長的關(guān)鍵所在, 新生的血管不僅可以提供瘤體豐富的血液供應(yīng), 而且為腫瘤的血行轉(zhuǎn)移提供了良好的條件［2］。而且新生的血管基底膜呈節(jié)段性分布, 對腫瘤細(xì)胞具有高度親和性。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及CD34是調(diào)節(jié)腫瘤血管形成的關(guān)鍵因子及血管標(biāo)記物［3-5］, 但二者的關(guān)系目前還不明確。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測NSCLC腫癌組織的VEGF、CD34的表達(dá), 探討二者的關(guān)系及其臨床意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集南陽市第一人民醫(yī)院2011年1月～2012年6月行手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌患者32例, 其中男18例, 女14例, 年齡32～78歲, 平均年齡(58.7±6.9)歲, 所有患者術(shù)前均未接受放、化療及生物免疫治療。肺癌的組織學(xué)分類為：鱗癌11例, 腺癌15例, 細(xì)支氣管肺泡癌6例。分化程度為：高分化8例, 中分化10例, 低分化14例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例, 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例。TNM分期：Ⅰ期7例,Ⅱ期13例, Ⅲ～Ⅳ期12例。選擇同期25例癌旁組織(距癌組織5 cm以上)作為對照。所有標(biāo)本均用10%中性甲醛溶液固定, 石蠟包埋, 切片厚3 μm。

1.2 主要試劑 兔抗人VEGF及山羊抗兔Ig-HRP均由美國SANTA CRUZ公司生產(chǎn), 單克隆抗體即用型CD34與即用型DAB顯色液由北京中山公司生產(chǎn); CDEF試劑盒為8ESO公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)法檢測VEGF

1.3.1.1 按照免疫組織化學(xué)操作步驟依次進(jìn)行脫蠟、抗原修復(fù)(高壓修復(fù))、加一抗(濕盒37℃放置1 h或4℃放置24 h),加二抗(濕盒37℃放置1 h)、DAB顯色、顯微鏡觀察計數(shù)、拍片分析。

1.3.1.2 結(jié)果判定 胞漿染成棕黃或棕褐色為陽性細(xì)胞,陰性細(xì)胞不染色。陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果判斷參照 Senger方法［6］,著色細(xì)胞數(shù)＜10%為(-), 11% ～30%為(+),31% ～70%為(++),＞70%為(+++)。

1.3.2 CD34免疫組化染色

1.3.2.1 參照文獻(xiàn)介紹的方法, 采用6 M抗原修復(fù)CDEF免疫組織化學(xué)染色方法, 進(jìn)行CD34標(biāo)記。對照染色：每次用已知CD34陽性標(biāo)本切片作為陽性對照, 用PBS代替一抗或生物素標(biāo)記的橋抗 (二抗) 作為陰性對照。

1.3.2.2 結(jié)果判定、微血管計數(shù) 微血管計數(shù)方法(MVD計數(shù)法)參照Weidner校正方法。在低倍鏡下(×100)尋找組織內(nèi)微血管最多的區(qū)域染色, 即所謂的“熱點”, 之后換用高倍鏡(×400), 在高倍鏡下計數(shù)小靜脈和毛細(xì)血管的數(shù)目,排除腫瘤附近的的正常肺實質(zhì)內(nèi)的微血管以及有平滑肌壁及管腔直徑＞8個紅細(xì)胞直徑的血管。所有標(biāo)本由經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)生閱讀3次取平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

與瘤旁組織比較, 瘤組織中微血管數(shù)目明顯增多, VEGF表達(dá)陽性率明顯提高(t值、χ2值分別為6.791, 16.116, P＜0.05)；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較, 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者瘤組織中MVD值及VEGF表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t值、χ2值分別為3.457, 5.203, P＜0.01)；VEGF表達(dá)陽性率及MVD值的升高大致與臨床Ⅰ～Ⅳ期的升高呈正相關(guān)；與組織類型及分化程度病理特征因素之間的瘤組織的MVD值與VEGF表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 VEGF、CD34標(biāo)記微血管計數(shù)(MVD值)與NSCLC病理特征的關(guān)系(n, %, x-±s)

3 討論

腫瘤患者的早期診斷和治療是提高5年生存率的關(guān)鍵措施,如何實現(xiàn)對肺癌早期診斷并準(zhǔn)確估計其轉(zhuǎn)移能力一直是臨床研究的熱點問題。

研究證實惡性腫瘤的生長、局部浸潤及轉(zhuǎn)移等與新生血管關(guān)系密切。新生血管是指在某些因素的刺激作用下,由內(nèi)皮細(xì)胞分化而成的一些新生血管,其對于實體腫瘤的生長、發(fā)展非常重要,是影響腫瘤生物學(xué)行為和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的重要因素［2,3］。新生的腫瘤血管不僅是癌細(xì)胞增殖的內(nèi)部條件,也是癌細(xì)胞浸潤和血行轉(zhuǎn)移首要途徑。腫瘤在生長過程中需要新生血管不斷生成才能滿足其擴增和營養(yǎng)代謝的需要,當(dāng)腫瘤形成自身的血管系統(tǒng)后,才可以迅速生長,同時瘤細(xì)胞進(jìn)入血管或淋巴管發(fā)生轉(zhuǎn)移。

VEGF是一種多肽類細(xì)胞因子,與腫瘤血管生成密切相關(guān)。研究顯示VEGF在腫瘤組織內(nèi), 如肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤組織內(nèi)分泌增多, 并且與新生血管的生成有關(guān)。主要作用機制為：①促進(jìn)血管形成的功能：促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖, 并且誘導(dǎo)新生血管生成；②增加血管通透性：VEGF可以迅速增加血管通透性, 作用短暫而強大, 使血漿蛋白包括纖維蛋白外滲, 形成纖維素網(wǎng)絡(luò), 為毛細(xì)血管延伸生長提供良好基質(zhì)。③增加組織因子的產(chǎn)生：VEGF通過改變內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血漿纖溶酶原激活劑及血漿纖溶酶原激活物抑制劑, 有利于血管形成。在眾多誘導(dǎo)血管生成的因子中,VEGF被認(rèn)為是最重要的血管生成因子。VEGF對于淋巴管的新生也有著非常重要的作用, 尤其與淋巴侵犯和不良的預(yù)后結(jié)局有關(guān)。本研究結(jié)果顯示, 瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于瘤旁組織, 而且瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān), 表明VEGF表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)［2,3,6］。腫瘤組織的微血管密度(MVD)不僅可定量地反映腫瘤血管生長情況, 還能預(yù)示腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)趨勢［4,5］。CD34是血管內(nèi)皮標(biāo)記物之一, 應(yīng)用廣泛, 被認(rèn)為是重復(fù)性好、穩(wěn)定性高、較成熟的血管內(nèi)皮標(biāo)記物, 作為常規(guī)指標(biāo)應(yīng)用于多種

惡性腫瘤的免疫組化檢測。程繼榮等［5］研究證實CD34可作為最敏感肺癌微血管標(biāo)記物之一。本研究還顯示瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與微血管數(shù)目MVD值呈正相關(guān), 而且與VEGF一樣, 微血管數(shù)目MVD值與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差有關(guān), 上述結(jié)果表明VEGF表達(dá)與CD34存在相關(guān)性, VEGF表達(dá)越高, 誘導(dǎo)腫瘤血管生成越多, 血管內(nèi)皮細(xì)胞中CD34表達(dá)也越多, 從而也間接證實VEGF在腫瘤血管形成中的重要作用。這為臨床腫瘤的抗血管生成治療提供依據(jù)［2］。抗血管生成治療其基本原理是通過切斷腫瘤賴以生長和轉(zhuǎn)移的營養(yǎng)來源及遷移通道,間接發(fā)揮治療作用。目前抗血管生成治療已經(jīng)從實驗室走向臨床,為控制腫瘤的發(fā)展、預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)開辟了廣闊的前景。

綜上所述, NSCLC組織中存在CD34和VEGF過度表達(dá),二者均與腫瘤TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

［1］ Pollock RE, Doroshow JH, Khayat D.UICC臨床腫瘤學(xué)手冊.孫燕,湯釗猷,譯.第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2008:302.

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［4］ 汪國文,王祖義,劉學(xué)剛, 等.CD31與CD34顯示非小細(xì)胞肺癌微血管密度的對比分析.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2009, 34(3):185-187.

［5］ 程繼榮, 徐虓, 王淑琴.肺癌組織CD31、CD34及CD105標(biāo)記的微血管密度的臨床意義.中國癌癥雜志, 2010, 20(8):638-640.

［6］ Luo H, Chen Z, Jin H, et al.Cyclooxygenase-2 up-regulates vascular endothelial growth factor via a protein kinase C pathway in non-small cell lung cancer.J Exp Clin Cancer Res, 2011, doi:10.1186/1756-9966-30-6.

2014-09-12］

473012 河南省南陽市第一人民醫(yī)院腫瘤科