穆占增，馬 寧(.渤海石油裝備制造有限公司第一機械廠醫(yī)院外科,河北 滄州 06658；.河北醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院社會醫(yī)學與衛(wèi)生事業(yè)管理學教研室，河北 石家莊 05007)

·臨床研究·

河北漢族人群IL6基因多態(tài)性與前列腺癌風險的關聯(lián)性研究

穆占增1，馬 寧2
(1.渤海石油裝備制造有限公司第一機械廠醫(yī)院外科,河北 滄州 062658；2.河北醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院社會醫(yī)學與衛(wèi)生事業(yè)管理學教研室，河北 石家莊 050017)

前列腺腫瘤；白細胞介素6 ；多態(tài)性，限制性片段長度

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.08.036

前列腺癌(prostate cancer,PCa)是世界男性第二大常見癌癥，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。近年來的證據(jù)從分子流行病學的角度提示遺傳因素可能是PCa發(fā)生發(fā)展的重要危險因素[2]?；蚨鄳B(tài)性是研究遺傳因素和疾病關系的重要手段，其主要形式是單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)，代表人類復雜疾病易感性的核心信息。有研究[3]證實，白細胞介素(interleukin,IL)基因啟動子區(qū)多態(tài)性通過調節(jié)血管形成途徑和(或)抗腫瘤免疫來影響PCa的發(fā)生。因此，我們對河北漢族人群中PCa患者IL-6基因啟動子區(qū)的-174G>C、-572C>G及-634C>G位點的SNPs進行分型,以探討IL-6基因SNPs與河北地區(qū)漢族人群PCa的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象：病例組為2009年9月—2013年10月在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院和第四醫(yī)院以及滄州市中心醫(yī)院、滄州青縣第一機械廠醫(yī)院泌尿外科確診的PCa患者186例。對照組為同期在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院及滄州市中心醫(yī)院健康體檢的非前列腺疾病、非腫瘤男性207例。調查對象均為長期居住河北地區(qū)的漢族人。病例組均經前列腺穿刺活檢或手術病理檢查確診，對照組均經病史、體征、臨床表現(xiàn)及其他輔助檢查排除前列腺疾病和腫瘤。研究對象簽署知情同意書后即利用“PCa危險因素調查表”收集基線資料，如年齡、身高、體質量、吸煙、飲酒、家族史等。同時抽取研究對象空腹靜脈血2mL,乙二胺四乙酸抗凝，置于-80℃冰箱。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提?。翰捎肎enomic DNA Purification Kit(Promega公司)提取基因組DNA，加入100μL DNA溶解液，4℃或室溫孵育過夜，2～8℃保存。紫外分光光度計定量DNA濃度及純度。

1.2.2 基因分型：利用美國SEQUENOM公司的基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜的實驗平臺對所選三位點進行分型。華大基因公司利用引物設計軟件MassARRAY?Assay Design 4.0 Software進行3個SNPs位點的引物設計，并進行PCR擴增分型，MassARRAY平臺檢測突變堿基。研究共采用3個分析模型，即共顯性模型、顯性模型以及隱性模型。假設一個突變位點的野生堿基為W，突變堿基為V。在共顯性模型中我們定義該位點可能出現(xiàn)的3種基因型WW、WV、VV分別為0、1、2；在顯性模型中我們定義該位點可能出現(xiàn)的3種基因型WW、WV、VV分別為0、1、1；在隱性模型中我們定義該位點可能出現(xiàn)的3種基因型WW、WV、VV分別為0、0、1。

1.3 統(tǒng)計學方法： 應用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析。單因素率的比較采用χ2檢驗，兩組單因素計量資料的比較采用獨立樣本的t檢驗，以非條件Logistic回歸校正混雜因素并計算比值比(OR)和95%置信區(qū)間(95%CI)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，統(tǒng)計檢驗均為雙側。

2 結 果

2.1 3個SNPs的哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg，H-W)平衡檢驗：完成對3個多態(tài)性位點的基因分型后，在對照組中對-572C>G及-634C>G位點基因型頻率進行H-W平衡檢驗(未檢測出-174G>C的突變堿基)，見表1。

-572C>G及-634C>G位點等位基因頻率符合H-W平衡定律(P>0.05)，說明研究對象具有群體代表性。

2.2 2組基線資料的比較：病例組平均年齡高于對照組(P<0.01)；病例組吸煙率(64.0%)高于對照組(51.7%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；2組飲酒率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；將體質量指數(shù)>24定義為超質量，則病例組超質量率(71.5%)高于對照組(58.9%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；病例組中有腫瘤家族史的頻率(24.2%)高于對照組(13.0%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

2.3 -572C>G及-634C>G位點多態(tài)性和PCa易感性關系的多因素Logistic回歸分析結果：利用非條件Logistic逐步回歸模型，調整年齡、吸煙、體質量指數(shù)、腫瘤家族史影響因素后，-572C>G及-634C>G位點的突變堿基均和PCa易感性有關聯(lián)。攜帶IL-6-572G堿基者患PCa的風險增加(在共顯性模型中，P=0.003，OR=1.813，95%CI=1.167～2.574;顯性模型中，攜帶GC/GG基因型的個體患PCa的風險是攜帶CC基因型的1.598倍；隱性模型中，攜帶GG基因型的個體患PCa的風險是攜帶GC/CC基因型的1.396倍)。攜帶IL6-634G堿基者患PCa的風險增加(在共顯性模型中，P=0.010，OR=1.410，95%CI=1.287～2.176;顯性模型中，攜帶GC/GG基因型的個體患PCa的風險是攜帶CC基因型的1.689倍)。見表3。

表1 IL-6 -572C>G、-634C>G在健康人群中的H-W平衡檢驗結果

表2 2組基線資料比較 (例數(shù)，%)

表3 2組基因型比較的Logistic回歸分析結果

a：經年齡、吸煙、體質量指數(shù)、腫瘤家族史調整后的結果

3 討 論

IL-6是一種多功能的促炎性細胞因子，主要由激活的單核/巨嗜細胞分泌，在炎癥反應、免疫調節(jié)過程中起到重要作用。在體內IL-6與其受體結合成六聚體，通過Ras-MAPK途徑和JAK-STAT途徑誘導靶基因的表達,從而實現(xiàn)其生物學功能[4]。人的IL-6基因啟動子區(qū)含有不同的調控元件,包括糖皮質激素受體、NF-IL-6、Fos/Jun和CRBP等轉錄因子[5]。轉錄因子結合于IL-6基因啟動子區(qū)相應序列后可在轉錄水平高度調控IL-6基因的表達，因此IL-6基因啟動子區(qū)的基因多態(tài)性可能會導致其個體基因轉錄與表達的差異,進而影響到個體對相關性疾病的易感性。目前，國內外[6-9]已發(fā)現(xiàn)IL-6基因-174G>C、-572C>G及-634C>G位點多態(tài)性與多種疾病的易感性和臨床表現(xiàn)有關，如冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、骨髓瘤、糖尿病、乳腺癌、肺癌。但是國內對于這幾個位點多態(tài)性和PCa易感性關聯(lián)的報道尚少，鑒于東西方人種的差異以及近幾年PCa發(fā)病率的顯著增加，我們在河北漢族人群中進行了IL-6基因多態(tài)性與PCa風險的關聯(lián)性研究。

本研究未檢測到IL6-174G>C位點的突變堿基，僅檢測到GG純合子，與Michaud及Jim等[10-11]的研究結果有明顯差異，他們的研究證實-174G>C位點多態(tài)性與歐美人群PCa易感性及愈后有關聯(lián)。在西方人群中，-174G>C突變堿基C的頻率20%～40%[12]。本研究結果與國內相關報道一致[13-14]。說明-174G>C位點突變率存在種族差異，這一遺傳差異有可能使同一種突變在不同人群產生不同的表型效應，這也從一方面解釋了不同種族之間PCa發(fā)病率及臨床表現(xiàn)差異較大的原因。由于本研究樣本量有限，未檢測到-174G>C位點的突變堿基，不能說明這些素材能否代表PCa危險因素。

本研究發(fā)現(xiàn)-572C>G位點突變堿基G能增加個體患PCa的風險，與盧曉明等[15]的結論一致。Gu等[16]從生物學功能進一步證實了該位點的突變堿基G能夠降低IL-6啟動子的轉錄活性，從而影響外周血中IL-6的表達。外源性IL-6能在短期內將PCa細胞阻滯于G0期，抑制細胞增殖的同時誘導細胞NE分化，從而抑制腫瘤生長。但時間過長，則促使細胞自分泌IL-6,促進PCa細胞的生長。此外，也有關于該突變位點和其他惡性腫瘤的關聯(lián)性研究，如Cozen等[7]發(fā)現(xiàn)該位點的C堿基是多發(fā)性骨髓瘤的風險堿基，而本研究證實突變堿基G是PCa的風險堿基。這一現(xiàn)象提示同一位點基因表型的分布在不同人種中存在遺傳差異性，在不同腫瘤中也可能存在差異。另外，也證實了-572C>G位點突變在不同腫瘤形成過程中起著不同的作用，需要進一步做生物學功能研究。

本研究同時得出-634C>G位點突變堿基G能增加個體患PCa的風險的結論，與Bao等[17]的結論一致。Kitamura等[8]進行體外單核細胞培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)攜帶該位點GG基因型的個體細胞自分泌大量IL-6，具有生長刺激作用，刺激腫瘤細胞的增殖。另外，Bai等[9]證實攜帶-634GG及CG基因型的個體患肺癌的風險增高。從另一個角度證實了-634C>G位點突變堿基G可能會增加個體患惡性腫瘤的風險。

通過檢測IL-6基因多態(tài)性位點，可以為研究PCa的發(fā)病機制以及對其開展基因治療提供新的思路。但是，PCa病因復雜，涉及到環(huán)境、基因甚至種族因素。那么對于PCa的基因病因來說，是否存在一個或幾個主效應基因或者單體型目前尚未肯定。仍需在更大樣本和其他人群中進行類似研究,也有必要通過家系連鎖不平衡研究尋找更多的證據(jù)來加以驗證。

[1] FERLAY J,PARKIN DM,STELIAROVA-FOUCHER E.Estimates of cancer incidence and mortality in Europe in 2008[J].Eur J Cancer,2010,46(4):765-781.

[2] 趙佳暉，姜永光，吳春婷，等.環(huán)氧化酶2在不同前列腺癌細胞系中的表達[J].中華男科學雜志,2010,16(8):689-692.

[3] MCCARRON SL,EDWARDS S,EVANS PR,et al.Influence of cytokine gene polymorphisms on the development of prostate cancer[J].Cancer Res,2002,62(12):3369-3372.

[4] SOMERS W,STAHL M,SEEHRA JS.A crystal structure of interleukin-6:implications for a novel mode of receptor dimerization and signaling[J].EMBO J,1997,16 (5):989-997.

[5] AKIRA S,TAGA T,KISHIMOTO T.Interleukin-6 in biology and medicine[J].Adv Immunol，1993,54(1):1-78.

[6] 韋葉生，藍艷，劉運廣，等.白細胞介素-6基因多態(tài)性與冠心病的相關性研究及其對血脂的影響[J].中國危重病急救醫(yī)學，2006，18(4)：233-236.

[7] COZEN W,GEBREGZIABHER M,CONTI DV,et al.Interleukin-6 related genotypes,body mass index,and risk of multiple myeloma and plasmacytoma[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(11):2285-2291.

[8] KITAMURA A,HASEGAWA G,OBAYASHI H,et al.Interleukin-6 polymorphism(-634C/G)in the promoter region and the progression of diabetic nephropathy in type 2 diabetes[J].Diabetic Med,2002,19(12):1000-1005.

[9] BAI L,YU H,WANG H,et al.Genetic single-nucleotide polymorphisms of inflammation-related factors associated with risk of lung cancer[J].Med Oncol,2013,30(1):414.

[10] MICHAUD DS,DAUGHERTY SE,BERNDT SI,et al.Genetic polymorphisms of interleukin-1β (IL-1β),IL-6,IL-8,and IL-10 and risk of prostate cancer[J].Cancer Res,2006,66(8):4525-4530.

[11] JIM HS,PARK JY,PERMUTH-WEY J，et al.Genetic predictors of fatigue in prostate cancer patients treated with androgen deprivation therapy:preliminary findings[J].Brain Behav Immun,2012,26(7):1030-1036.

[12] BOCA AN,TALAMONTI M,GALLUZZO M,et al.Genetic variations in IL6 and IL12β decreasing the risk for psoriasis[J].Immunol Lett,2013,156(1/2):127-131.

[13] 張美麗，倪培華，蔡昌枰,等.IL-6基因多態(tài)性與慢性鼻-鼻竇炎易感性的相關性研究[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2012,26(5):197-204.

[14] 劉培輝,楊躍萍,鄒嶸,等.IL-6基因多態(tài)性與小兒全身炎癥反應綜合征的相關性研究[J].中國微生態(tài)學雜志,2011,23(1):24-27.

[15] 盧曉明，華立新，王進峰.蘇皖地區(qū)漢族人群IL-6-572C>G多態(tài)性與前列腺癌易感性的關系[J].中華男科學雜志,2011,17(8):707-711.

[16] GU W,DU DY,HUANG J,et al.Identification of interleukin-6 promoter polymorphisms in the Chinese Han population and their function significance[J].Crit Care Med,2008,36(5):1437-1443.

[17] BAO S,YANG W,ZHOU S,et al.Relationship between single nucleotide polymorphisms in -174G/C and -634C/G promoter region of interleukin-6 and prostate cancer[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2008,28(6):693-696.

(本文編輯：劉斯靜)

2014-01-20；

2014-02-25

穆占增(1973-)，男，河北青縣人，渤海石油裝備制造有限公司第一機械廠醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學學士，從事普外科疾病診治研究。

R737.25

B

1007-3205(2014)08-0964-04