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1.亳州職業(yè)技術學院，安徽 亳州 236800；2.畢節(jié)學院，貴州 畢節(jié) 551700

制何首烏顆粒的質量標準研究

王慶1薛天樂1*葉敏2

1.亳州職業(yè)技術學院，安徽 亳州 236800；2.畢節(jié)學院，貴州 畢節(jié) 551700

目的對制何首烏顆粒進行質量控制考察。方法采用TLC法對處方中的制何首烏進行定性鑒別, 用HPLC法測定制何首烏中二苯乙烯苷的含量。結果在TLC 圖譜中能檢出制何首烏，二苯乙烯苷在0.0296g/L-0.148g/L的范圍內(nèi)線性良好(r=0.9942), 平均加樣回收率為99.63%，RSD 為1.1%。結論所建立方法簡便可行, 重現(xiàn)性好, 可用于制何首烏顆粒的質量控制。

制何首烏顆粒； 薄層色譜法； 二苯乙烯苷； 高效液相色譜法

制何首烏為何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)的炮制加工品，具有補肝腎，益精血，烏須發(fā)，強筋骨，化濁降脂的作用[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明制何首烏及其所含的二苯乙烯苷具有提高免疫力、抗衰老、保肝及防治動脈硬化等作用，臨床上主要用于防治高脂血癥、高血壓病、慢性氣管炎、糖尿病等疾病，療效顯著[2]。本實驗采用醇提法提取制何首烏,配以適宜輔料制備制何首烏顆粒,并對其進行質量控制考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 WMK-02型電熱恒溫干燥箱，由天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)；HB-8數(shù)顯恒溫水浴鍋，由上海梅香儀器有限公司生產(chǎn)；SHZ-C型循環(huán)水式多用真空泵，由鞏義市予華儀器有限責任公司生產(chǎn)；RE-52A型旋轉蒸發(fā)儀，由上海雅榮生化設備儀器有限公司生產(chǎn)；FA1004型電子分析天平，由上海分析儀器總廠生產(chǎn)；751G型紫外可見分光光度計，由上海分析儀器總廠生產(chǎn)；Waters2695型高效液相色譜儀，由美國Waters公司生產(chǎn)。

1.2 試藥 制何首烏，購自亳州和義堂中藥材公司；二苯乙烯苷標準品，由中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結果

2.1 制首烏顆粒劑的制備 取制何首烏藥材，粉碎，加7倍重量40%的乙醇，于70℃的條件下，提取2次，每次80分鐘，過濾，合并濾液，濾液濃縮至相對密度為1.30的稠膏。按照重量份配比，取制何首烏稠膏10份、甘露醇10份、乳糖29.9份、安賽蜜0.1份混合均勻，加入95%的乙醇制軟材，軟材用16目篩網(wǎng)篩制粒，干燥，10目和65目網(wǎng)篩篩選，分裝即得。

2.2 定性鑒別 取制何首烏顆粒劑適量置燒瓶中，加乙醇20ml,加熱回流50min,濾過,濾液濃縮至1ml作為供試品溶液；處方除制何首烏外按制何首烏顆粒劑的工藝制備顆粒,按上述供試品溶液制備方法,制備陰性對照液；取何首烏對照藥材適量,置燒瓶中，加乙醇20ml,加熱回流50min,制成溶液,濾過,濾液濃縮至1ml作為對照藥材溶液。分別取上述3種溶液各5μL,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上,醋酸乙酯-丙酮-水-甲苯(6.5∶5.5∶1.2∶0.7)混合溶液的上層溶液為展開劑展開,取出,晾干。365nm紫外燈下檢識,供試品色譜中，與對照品色譜相應位置上出現(xiàn)相同顏色的斑點,陰性對照無干擾，結果見圖1。

1 缺制何首烏藥材的陰性對照；2 制何首烏對照藥材；3 制何首烏顆粒

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：HypersilC18(150mm ×4.6mm)；流動相：乙腈-水(25∶75)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：320nm；進樣量：10μl。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取二苯乙烯苷對照品5.92mg，置于10ml容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度，得對照品母液。精密吸取二苯乙烯苷對照品母液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，定容于10ml量瓶中，分別得到0.0296g/l、0.0592g/l、0.0888g/l、0.1184g/l、0.1480g/l的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱定何首烏顆粒劑1.16g，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.3.4 陰性對照品的制備 按制何首烏顆粒劑處方及制備工藝制備不含制何首烏的陰性樣品,精密稱取陰性對照品1.02克，按“2.3.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3.5 干擾實驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液10μl在“2.3.1”項條件下記錄色譜峰的流出曲線,結果見圖2、3、4,陰性對照溶液在與二苯乙烯苷保留時間相同位置無色譜峰出現(xiàn),表明對測定結果無影響。

圖2 對照品溶液的高效液相色譜圖

圖3 供試品溶液的高效液相色譜圖

圖4 陰性對照溶液的高效液相色譜圖

2.3.6 線性關系考察 精密吸0.0296g/L、0.0592g/L、0.0888g/L、0.1184g/L、0.1480g/L的對照品溶液各10μl，按“2.3.1”項下色譜條件測定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標,對照品溶液濃度(X)為橫坐標進行線性回歸,結果如下。

圖5 對照品溶液的線性回歸

2.3.7 精密度試驗 精密吸取0.0888g/L的對照品溶10μl，按上述色譜條件重復進樣6次，測定峰面積，結果見表1，RSD=1.1%(n=6),表明精密度良好。

表1 精密度實驗

2.3.8 穩(wěn)定性試驗 取0.0592g/L的對照品溶液,分別于0、2、4、6、8、12、24、48 h按上述色譜條件進樣10μl,測定峰面積。結果見表2，RSD=0.92%(n=8)，表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9 重現(xiàn)性試驗 精密稱取同一批何首烏顆粒劑,按“2.3.3”項下方法平行制備6份供試品溶液,按上述色譜條件進樣測算。結果見表3，RSD=1.7%，表明重現(xiàn)性良好。

表2 穩(wěn)定性實驗

表3 重現(xiàn)性實驗

2.3.10 加樣回收率試驗 精取已知含量的樣品溶液6份,每份10ml,精密稱定,分別精密加入二苯乙烯苷對照品適量,照“2.3.3”項下方法制成供試品溶液,按上述色譜條件,計算加樣回收率,結果見表4，RSD%=1.1%(n=6)，表明加樣回收率良好。

2.3.11 樣品含量測定 按制首烏顆粒的處方及制備工藝制備5批制首烏顆粒，分別按“2.3.3”項下方法制成供試品溶液，進樣量10μl，按上述色譜條件,測算二苯乙烯苷的含量，結果見表5。

表4 加樣回收率試驗

表5 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 筆者曾以二苯乙烯苷的含量為指標對制何首烏進行了提取方法的考察，結果發(fā)現(xiàn)其最佳提取工藝為：7倍量40%的乙醇，70℃，提取2次，每次80min[3]。筆者也曾通過實驗對制何首烏顆粒劑的輔料及其配比進行篩選，結果表明：何首烏稠膏∶甘露醇∶乳糖∶安賽蜜=10份∶10份∶29.9份∶0.1份為最優(yōu)的輔料篩選方案。

3.2 采用上述方法對制何首烏顆粒劑進行薄層色譜鑒別, 重現(xiàn)性好, 陰性實驗無干擾, 經(jīng)多批樣品鑒別, 均能檢出與對照相同的斑點，可以作為制何首烏顆粒的定性鑒別標準。HPLC 法測定制何首烏顆粒中二苯乙烯苷的含量, 無雜質峰干擾,方法準確、重現(xiàn)性好,可用于制何首烏顆粒劑的含量測定。

[1]國家藥典委員會. 中國藥典[S]. 中國醫(yī)藥科技出版社. 2010年版(一部).

[2]吳曉青. 何首烏化學成分與藥理活性的研究進展[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2009(01):146-147.

[3]薛天樂，王慶，葉敏.何首烏二苯乙烯苷的提取工藝研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，22(213)：39-41.

TheQualityStandardofPreparedfleeceflowerrootgranule

WANG Qing1XUE Tian-le1*YE Min2

1.Bozhou Vocational and Technical College,Anhui Province,Haozhou 236800,China;2.Bijie University,Guizhou Province,Bijie 551700,China

ObjectiveInvestigate Prepared fleeceflower root granule quality.MethodsPrepared fleeceflower root was identified by TLC, and content of 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was determined by HPLC.ResultsPrepared fleeceflower root could be identified by TLC. 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside showed a good linear relationship at a range of 0.0296g/L-0.148g/L (r=0.9942), the average recovery was 99.63%, and RSD was 1.1%.ConclusionThe established method is simple, feasible and reproducible and it can be used as the quality standards for Prepared fleeceflower root granule.

Prepared fleeceflower root Granule; TLC; 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilb-ene-2-O-β-D-glucoside; H PLC

安徽省教育廳自然科學基金項目，編號：KJ2012B112。

王慶(1982-)，女，講師，安徽亳州人，碩士，研究方向: 天然藥物活性成分分離純化。

薛天樂(1981-)，男，講師，安徽亳州人，碩士， 研究方向: 中藥活性成分提取分離，E-mail: 84181713@ qq.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)08-0027-03

2014.02.10)