周方晴，曹陽(yáng)，韓雪蓮，許茜

(1.東南大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇 南京 210009； 2.海昌隱形眼鏡有限公司，江蘇 丹陽(yáng) 212331)

除作為外用制劑輔料使用外，薄荷醇(menthol)亦可作為清涼劑加入眼部制劑，以期減輕眼部刺激，緩解眼部干澀、灼熱感[1]。研究[2-3]顯示，薄荷醇可明顯增加外用制劑中藥物的透皮吸收率。若隱形眼鏡片護(hù)理液中加入薄荷醇，鏡片浸泡時(shí)則可能吸收其中的薄荷醇，而佩戴該鏡片時(shí)其可能會(huì)釋放至眼中。那么此時(shí)的薄荷醇是否會(huì)因其促吸收作用而帶來(lái)一定的使用安全問(wèn)題？國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)相關(guān)的研究報(bào)道。因此，基于對(duì)薄荷醇特性的全面考慮，有必要研究隱形眼鏡片對(duì)護(hù)理液中薄荷醇的吸收和釋放程度，以評(píng)估其導(dǎo)致的眼部刺激或致敏作用的可能性，保證使用安全。

本研究擬建立隱形眼鏡護(hù)理液和模擬眼內(nèi)環(huán)境的ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液(ISO10344)[4]中薄荷醇的檢測(cè)方法，并進(jìn)行隱形眼鏡片對(duì)護(hù)理液中薄荷醇的吸收情況(是否)及吸收程度(多少)，以及經(jīng)浸泡的隱形眼鏡片在模擬眼內(nèi)環(huán)境的ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液中薄荷醇的釋放情況(是否)及釋放程度(多少)的測(cè)試，為含薄荷醇的隱形眼鏡護(hù)理液的安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

受試樣品均由海昌隱形眼鏡有限公司提供，包括：J1102809隱形眼鏡片(非離子型，含水量38%)、G1105599隱形眼鏡片(離子型，含水量55%)；隱形眼鏡護(hù)理液(批號(hào)2120003)；陰性樣品液(除不含薄荷醇外，其他成分均按護(hù)理液配方配制的溶液)；ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液(pH 7.0等滲緩沖鹽水溶液)。薄荷醇標(biāo)準(zhǔn)品(供含量測(cè)定用)，面積歸一化法測(cè)得百分含量為99.80%(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；色譜純甲醇(德國(guó)默克公司)。

1.2 儀器和器材

氣相色譜儀(日本島津公司GC2010)；固相萃取儀(美國(guó)Supelco公司Visiprep-DL)；C18固相萃取小柱(50 μm，50 mg，迪馬公司)；精密分析天平(感量0.01 mg，瑞士梅特勒公司)；超聲清洗儀(濟(jì)南巴克超聲波科技有限公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細(xì)管氣相色譜柱(0.32 mm×30 m，固定液膜厚1.8 μm，美國(guó)Agilent公司)；檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器(flame ionization detector，F(xiàn)ID)；柱溫(程序升溫方式)：初溫80 ℃，3 min；溫度上升速率4 ℃·min-1；終溫150 ℃，3 min。進(jìn)樣口溫度250 ℃；檢測(cè)器溫度250 ℃；氮?dú)饬魉?.5 ml·min-1,氫氣流速40 ml·min-1,空氣流速400 ml·min-1,尾吹氣流速30 ml·min-1。

1.3.2 護(hù)理液中薄荷醇鑒別及濃度測(cè)定

精密量取質(zhì)量濃度為1 mg·ml-1的薄荷醇標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，加甲醇稀釋制得質(zhì)量濃度為50 μg·ml-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取5 ml護(hù)理液，以5 ml·min-1的速度經(jīng)過(guò)固相萃取小柱(事先以0.5 ml蒸餾水和0.5 ml甲醇依次活化2次)，0.5 ml甲醇洗脫，取1 μl洗脫液進(jìn)樣，按1.3.1之色譜條件行氣相色譜分析，與1 μl薄荷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析后所得的保留時(shí)間比較，以鑒別樣品中的薄荷醇，并記錄其峰面積，計(jì)算樣品中的薄荷醇質(zhì)量濃度(μg·ml-1)。

1.3.3 吸收試驗(yàn)

1.3.3.1 隱形眼鏡片準(zhǔn)備 以專(zhuān)用鑷子取出隱形眼鏡片，置吸水紙上將其表面水分輕輕拭干，之后精密稱(chēng)取并記錄100片隱形眼鏡片總質(zhì)量(m總，mg)。如此法平行準(zhǔn)備3份，共300片隱形眼鏡片。

1.3.3.2 吸收試驗(yàn)容器對(duì)薄荷醇的吸收試驗(yàn) 取干燥潔凈的1 000 ml廣口試劑瓶，準(zhǔn)確加入已測(cè)得薄荷醇的原始質(zhì)量濃度(ρ0 h，μg·ml-1)的500 ml護(hù)理液，加蓋密封，置于(25±2)℃的恒溫水浴中，在2、4、6、8、12、24 h分別以移液管精密量取5 ml護(hù)理液，依1.3.2項(xiàng)下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過(guò)固相萃取小柱”起操作，分別計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)護(hù)理液中薄荷醇的測(cè)得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h，μg·ml-1)，與ρ0 h比較，評(píng)價(jià)試驗(yàn)容器對(duì)薄荷醇的吸收情況和吸收程度。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣結(jié)束后，即補(bǔ)充5 ml同溫度[(25±2)℃]護(hù)理液，使護(hù)理液總體積不變。如法同時(shí)進(jìn)行3只試驗(yàn)容器的吸收試驗(yàn)，容器標(biāo)好序號(hào)。

取Opadry中藥薄膜包衣材料適量，加水制成濃度為12%的包衣液，采用流化床包衣機(jī)對(duì)羚黃寶兒未包衣素丸（投料量750 g）進(jìn)行包衣。

1.3.3.3 吸收試驗(yàn) 如1.3.3.1表面拭干并精密稱(chēng)重的100片隱形眼鏡片，將其放入序號(hào)與1.3.3.2一一對(duì)應(yīng)的容器中，準(zhǔn)確加入500 ml已準(zhǔn)確測(cè)得薄荷醇原始質(zhì)量濃度(ρ0 h，μg·ml-1)的護(hù)理液，加蓋密封，置于(25±2)℃的恒溫水浴中，在2、4、6、8、12、24 h分別精密量取5 ml護(hù)理液，依1.3.2項(xiàng)下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過(guò)固相萃取小柱”起操作，分別計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)護(hù)理液中薄荷醇的測(cè)得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h，μg·ml-1)，與ρ0 h比較，并結(jié)合1.3.3.2的測(cè)試結(jié)果，評(píng)價(jià)隱形眼鏡片對(duì)薄荷醇的吸收情況和吸收程度。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣結(jié)束后，即補(bǔ)充5 ml同溫度[(25±2)℃]護(hù)理液，使護(hù)理液總體積不變。如法平行進(jìn)行3份，共300片隱形眼鏡片的吸收試驗(yàn)。

1.3.3.4 吸收試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 單位質(zhì)量(mg)的干鏡片吸收薄荷醇的質(zhì)量(μg)設(shè)為m吸收，即m吸收=500×(ρ0 h-ρ吸收平衡)/m總，其中ρ吸收平衡為鏡片吸收薄荷醇達(dá)到平衡時(shí)的質(zhì)量濃度。

1.3.4 釋放試驗(yàn)

1.3.4.1 隱形眼鏡片準(zhǔn)備 以專(zhuān)用鑷子將1.3.3.3吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的隱形眼鏡片取出，置吸水紙上將其表面水分輕輕拭干。從每份100片隱形眼鏡片中隨機(jī)挑出50片分為5組，每組10片，進(jìn)行釋放試驗(yàn)。

1.3.4.2 釋放試驗(yàn)容器對(duì)薄荷醇的吸收試驗(yàn) 精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，加ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液稀釋制成每1 ml中含0.1 μg薄荷醇的模擬樣品溶液，原始質(zhì)量濃度準(zhǔn)確測(cè)定后記為ρ0 h(μg·ml-1)。

取干燥潔凈的50 ml廣口試劑瓶，準(zhǔn)確加入如上所述的模擬樣品溶液10 ml，加蓋密封，置于(37±2)℃的恒溫水浴中。在2、4、6、8、15 h分別精密量取5 ml護(hù)理液(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)從1只容器中取樣，下個(gè)時(shí)間點(diǎn)從另外的容器取樣)，依1.3.2項(xiàng)下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過(guò)固相萃取小柱”起操作，分別計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)護(hù)理液中薄荷醇的測(cè)得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h，μg·ml-1)，與ρ0 h比較，評(píng)價(jià)試驗(yàn)容器對(duì)薄荷醇的吸收情況和吸收程度。如法平行進(jìn)行15只試驗(yàn)容器(共分為3組，以便進(jìn)行3份釋放平行試驗(yàn)，每組5只)的吸收試驗(yàn)，每只容器按組別和考察時(shí)間點(diǎn)標(biāo)好序號(hào)。

1.3.4.3 釋放試驗(yàn) 取1.3.4.1處理的5組隱形眼鏡片，將其分別放入5只經(jīng)1.3.4.2吸收測(cè)試的50 ml廣口試劑瓶中，每只容器中準(zhǔn)確加入ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液10 ml，得5組釋放試驗(yàn)用樣本，加蓋密封，置于(37±2)℃的恒溫水浴中。在2、4、6、8、15 h分別精密量取ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液5 ml(注意容器序號(hào)與1.3.4.2一一對(duì)應(yīng)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)從考察吸收時(shí)間相同的容器中取樣，下個(gè)時(shí)間點(diǎn)從另外的經(jīng)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)考察吸收情況的容器中取樣)，依1.3.2項(xiàng)下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過(guò)固相萃取小柱”起操作，分別計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液中薄荷醇的測(cè)得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h，μg·ml-1)，并結(jié)合1.3.4.2的測(cè)試結(jié)果，評(píng)價(jià)隱形眼鏡片對(duì)其可能吸收的薄荷醇的釋放情況和釋放程度。如此法進(jìn)行3份平行試驗(yàn)。

1.3.4.4 釋放試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 單個(gè)鏡片釋放薄荷醇的質(zhì)量設(shè)為m釋放(μg)，即m釋放=10×ρ釋放平衡/m總，其中ρ釋放平衡為鏡片釋放達(dá)到平衡時(shí)的質(zhì)量濃度，ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液中的薄荷醇質(zhì)量濃度(μg·ml-1)。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收試驗(yàn)

2.1.1 吸收試驗(yàn)容器對(duì)薄荷醇的吸收試驗(yàn)

考察吸收試驗(yàn)所用容器時(shí)，各時(shí)間點(diǎn)護(hù)理液中薄荷醇的測(cè)得濃度見(jiàn)表1所示。護(hù)理液中薄荷醇原始濃度ρ0 h測(cè)得值為4.10 μg·ml-1。

每個(gè)容器在各時(shí)間點(diǎn)時(shí)護(hù)理液中薄荷醇的測(cè)得濃度，經(jīng)t檢驗(yàn)(置信度為95%)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與ρ0 h相比差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示，吸收試驗(yàn)所用各容器對(duì)薄荷醇無(wú)吸收或吸收可忽略不計(jì)。

表1容器吸收試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得護(hù)理液中薄荷醇的質(zhì)量濃度μg·ml-1

Tab1Containerabsorptionexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepointμg·ml-1

容器各時(shí)間點(diǎn)薄荷醇質(zhì)量濃度2 h4 h6 h8 h12 h24 h容器14.124.153.974.054.113.92容器24.093.974.144.094.014.12容器34.083.953.974.154.114.07

2.1.2 隱形眼鏡片對(duì)護(hù)理液中薄荷醇吸收試驗(yàn)

J1102809和G1105599隱形眼鏡片在吸收試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得護(hù)理液中薄荷醇的平均濃度(μg·ml-1)如表2所示。兩種隱形眼鏡片的測(cè)試結(jié)果經(jīng)t檢驗(yàn)(置信度為95%)，各時(shí)間點(diǎn)質(zhì)量濃度與起始的相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明兩種鏡片對(duì)護(hù)理液中的薄荷醇均吸收；而ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩種鏡片均在6.0 h對(duì)薄荷醇的吸收即達(dá)平衡。ρ吸收平衡則以ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h的平均值計(jì)，J1102809和G1105599隱形眼鏡片的ρ吸收平衡分別為3.65 μg·ml-1和3.74 μg·ml-1，表明100片浸泡于500 ml的護(hù)理液中共吸收薄荷醇分別為225 μg和180 μg。測(cè)得100片J1102809和G1105599干鏡片的總質(zhì)量分別為1 902.7 mg和1 493.4 mg，則計(jì)算得其單位質(zhì)量(mg)干鏡片吸收薄荷醇的質(zhì)量分別為0.118 2 μg和0.120 5 μg。

表2隱形眼鏡片吸收試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得護(hù)理液中薄荷醇的平均質(zhì)量濃度(n=3)μg·ml-1

Tab2Contactlensabsorptionexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepoint(n=3)μg·ml-1

時(shí)間點(diǎn)/h兩種鏡片所在護(hù)理液中薄荷醇質(zhì)量濃度J1102809鏡片G1105599鏡片2.03.873.924.03.753.836.03.673.748.03.653.7312.03.633.7224.03.663.76

2.2 釋放試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 釋放試驗(yàn)容器對(duì)薄荷醇的吸收試驗(yàn)

考察釋放試驗(yàn)所用容器時(shí)，各時(shí)間點(diǎn)ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液加標(biāo)制成的模擬樣品溶液中薄荷醇的測(cè)得濃度如表3所示。ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液加標(biāo)模擬樣品溶液中薄荷醇原始質(zhì)量濃度ρ0 h測(cè)得值為0.095 μg·ml-1。

表3容器釋放試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得護(hù)理液中薄荷醇的質(zhì)量濃度

μg·ml-1

Tab3Containerreleaseexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepoint

μg·ml-1

每個(gè)容器在各自時(shí)間點(diǎn)時(shí)ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液加標(biāo)模擬樣品溶液中薄荷醇的測(cè)得濃度，經(jīng)t檢驗(yàn)(置信度為95%)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與ρ0 h亦無(wú)顯著差異。結(jié)果提示，釋放試驗(yàn)所用各容器對(duì)薄荷醇無(wú)吸收或吸收可忽略不計(jì)。

2.2.2 隱形眼鏡片吸收薄荷醇的釋放試驗(yàn)

J1102809和G1105599隱形眼鏡片在釋放試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得薄荷醇的平均質(zhì)量濃度(μg·ml-1)如表4所示。結(jié)果表明，兩種鏡片在ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液中均會(huì)釋放之前在護(hù)理液中浸泡時(shí)吸收的薄荷醇。其檢測(cè)結(jié)果經(jīng)t檢驗(yàn)(置信度為95%)，ρ2 h、ρ4 h與ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩種鏡片在6.0 h對(duì)薄荷醇的釋放均即達(dá)平衡。ρ釋放平衡則以ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h的平均值計(jì)，J1102809和G1105599鏡片的ρ釋放平衡分別為0.082 μg·ml-1和0.084 μg·ml-1，則單個(gè)J1102809和G1105599鏡片釋放薄荷醇的質(zhì)量分別為0.082 μg和0.084 μg，計(jì)算得單位質(zhì)量(mg)的J1102809和G1105599干鏡片釋放薄荷醇分別為0.004 3 μg和0.005 6 μg。

表4隱形眼鏡片釋放試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得薄荷醇的平均濃度值(n=3) 兩組孕鼠的平均攝食μg·ml-1

Tab4Contactlensreleaseexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepoint(n=3)μg·ml-1

時(shí)間點(diǎn)/h兩種鏡片所在ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液中薄荷醇質(zhì)量濃度J1102809鏡片G1105599鏡片2.00.0550.0564.00.0720.0756.00.0810.0868.00.0820.08315.00.0830.083

3 總 結(jié)

本研究的兩種隱形眼鏡片分別為高含水離子型和低含水非離子型，是具有一定代表性的試驗(yàn)樣本。研究結(jié)果表明,兩種鏡片對(duì)護(hù)理液中的薄荷醇雖有少量的吸收，在模擬眼內(nèi)環(huán)境的ISO標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液中均只有微量的釋放，提示含薄荷醇護(hù)理液的使用具有安全性。

[1] 胡士高，俞佳，寧黎麗，等.眼用制劑中添加清涼劑的思考[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010，27(1)：38-39．

[2] 程闊菊，王暉，陳墾.薄荷醇的安全性研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37(2)：377-380．

[3] 齊紅藝，李莉，吳純潔.薄荷醇促滲透作用的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(9)：1176-1178．

[4] ISO10344:1996《光學(xué)和光學(xué)儀器接觸鏡測(cè)試用鹽溶液》[S].