鄭波，菅向東

（1.山東省交通醫(yī)院放射科，山東濟南650216；2.山東大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系，山東濟南250012）

丹參提取物預(yù)防大鼠放射性肺損傷的實驗研究

鄭波1，菅向東2

（1.山東省交通醫(yī)院放射科，山東濟南650216；2.山東大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系，山東濟南250012）

目的觀察丹參提取物對放射性肺損傷大鼠的預(yù)防及保護作用，探討其可能的作用機制。方法72只健康雌性SD大鼠隨機分為3組：空白對照組（A組）、單純照射組（B組）、照射加丹參提取物組（C組）。開始照射前1周，A組和B組灌胃生理鹽水，C組灌胃丹參提取物，至照射2周后結(jié)束給藥，共灌胃3周。給藥1周后，B、C 2組大鼠經(jīng)直線加速器以12Gy單次照射，分別于照射后第30、60、120天，隨機處死6只大鼠，檢測比較各組大鼠一般情況，ELISA檢測血清SOD含量，硫代巴比妥酸化學(xué)比色法測定MDA含量及右肺系數(shù)。結(jié)果B組大鼠照射后出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、對刺激的反應(yīng)性下降等癥狀，且隨時間的延長，癥狀不斷加重；C組大鼠較B組精神狀態(tài)有明顯改善；照射后第30、60、120天，C組大鼠血清SOD水平接近于A組，顯著高于B組（P＜0.05）；照射后第30、60天，C組大鼠右肺系數(shù)顯著低于B組，說明丹參提取物組可阻止放射性大鼠肺系數(shù)的增長；照射后第30、60、120天，C組大鼠MDA含量顯著低于B組（P＜0.05）。結(jié)論丹參提取物可明顯改善放射性肺損傷大鼠的生活精神癥狀，提高大鼠血清SOD水平，降低MDA含量和右肺系數(shù)，從而起到保護作用。

放射性肺損傷；丹參提取物；SOD含量；MDA含量；右肺系數(shù)

放射性治療常用來治療胸部腫瘤，隨著其廣泛應(yīng)用，副作用 也逐漸增多，放射性肺損傷便是其中之一。當(dāng)胸部照射劑量超過肺組織閾值時，會損傷肺組織，初期主要是炎癥發(fā)生，后期遷延加深會導(dǎo)致纖維化的發(fā)生［1］。部分患者因癥狀嚴(yán)重而終止治療，延緩疾病控制，嚴(yán)重者可致呼吸困難、肺功能下降而導(dǎo)致呼吸衰竭，直接影響了患者的預(yù)后及放療后的生存質(zhì)量［2］。放射性肺損傷是由多種因素綜合調(diào)控的復(fù)雜過程，西醫(yī)治療往往療效欠佳，有效預(yù)防及控制放射性肺損傷對控制患者病情至關(guān)重要。臨床研究證實，運用中醫(yī)藥提取物及方劑治療放射所導(dǎo)致的肺損傷具有一定的療效，其副作用小，同時兼具保護肺組織滋陰清肺的作用［3-5］。本實驗旨在通過觀察丹參提取物對放射性肺損傷大鼠的生活精神狀態(tài)、血清SOD水平、肺系數(shù)及MDA水平，探討其在預(yù)防及控制放射性肺損傷的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材：丹參藥材樣品來源于河南南陽、山東日照、及洛陽等地，采挖樣品后隨機抽取10株分為皮層和木質(zhì)部；或?qū)⑻J頭和須根剪下后，分為上下兩段后分別曬干，粉碎成粉末備用。

1.1.2 實驗動物：健康成年雌性SD大鼠72只，平均體質(zhì)量（180±30）g，由湖北省疾病預(yù)防控制中心提供。動物許可證編號：SCXK（鄂）2014-0010。標(biāo)準(zhǔn)詞料喂養(yǎng)4 d，飲食進水不限。本實驗遵循《實驗動物保護條例》。

1.1.3 主要試劑：ELISA試劑盒購自武漢培全化學(xué)試劑有限公司；丙二醛（MDA）測定試劑盒購自武漢培全化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水、二甲苯、多聚甲醛、無水乙醇、10%水合氯醛均由武漢培全化學(xué)試劑有限公司提供。

1.1.4 主要儀器：GWXJ70型60Co放射治療機由中國核動力研究設(shè)計院生產(chǎn)；直線加速器購自美國Varian2100CD。

1.2 方法

1.2.1 丹參提取物的制備：丹參藥材（切斷成片狀）用濃度為75%乙醇回流提取丹參，乙醇與丹參的質(zhì)量比為10∶1，重復(fù)提取3次，每次0.2 h，合并濾液，得提取液；減壓回收溶劑至無醇味浸膏；用水洗滌所述浸膏8～12次后噴霧干燥，得丹參提取物。

1.2.2 實驗分組及模型制備：將實驗SD大鼠隨機分為3組，每組24只，A組：空白對照組，B組：單純照射組，C組：照射加丹參提取物組；A組大鼠不進行照射；B、C組大鼠進行照射。用10%水合氯醛麻醉腹腔后，取仰臥位。四肢固定于治療床上，充分曝露胸部，屏蔽頭部與腹部；調(diào)整照射機照射范圍于大鼠右側(cè)胸部，包括大鼠前肢兩腋窩中點連線至劍突水平。全肺單次照射劑量12 Gy。所有小鼠照射后無1只死亡。分別于照射開始第30、60、120天，各組隨機選取6只大鼠處死、取材。

1.2.3 給藥方式：A和B組大鼠以生理鹽水1.5mL／200 g體質(zhì)量灌胃，C組以每天1.5 mL／200 g體質(zhì)量灌胃丹參提取物（適量生理鹽水配置成懸浮液，制備成0.2 g／mL），連續(xù)灌胃1周，之后對B、C組大鼠進行射線照射。照射后繼續(xù)灌胃給藥2周，并每天觀察大鼠活動情況，每周測稱量體質(zhì)量以調(diào)整給藥劑量；A、B組同期每天給予生理鹽水。

1.2.4 測定指標(biāo)：觀察動物外觀形態(tài)、體毛生長狀況、活動能力、糞便顏色、體質(zhì)量變化等。

分別于照射后第30、60、120天每組各取6只大鼠，麻醉后剪開腹部肌肉層，清除胸肋骨，使胸腔完全暴露，迅速摘取肺組織，稱重后用組織勻漿機勻漿制備，取上清液備用檢測。采用ELISA法檢測血清SOD含量，硫代巴比妥酸化學(xué)比色法測定MDA含量（嚴(yán)格按ELISA試劑盒說明書操作）。計算右肺系數(shù)：肺濕重（mg）／體質(zhì)量（g）×100%，反映肺組織炎癥及纖維化程度，肺系數(shù)越高代表炎性物質(zhì)多、肺纖維化高。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS18.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，正態(tài)計量資料用“±s”表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠外觀形態(tài)比較 A組大鼠在試驗周期，各觀測項目均表現(xiàn)正常。B、C組大鼠在照射后開始出現(xiàn)精神萎靡、大便干硬、背部出現(xiàn)明顯脫毛帶等癥狀；B組大鼠隨照射時間延長相關(guān)癥狀加重，個別大鼠出現(xiàn)呼吸急促現(xiàn)象。與B組相比，C組大鼠精神狀態(tài)較好，精神狀態(tài)、活動量均有明顯改善，大便干硬、背部脫毛發(fā)生率低且持續(xù)時間短，至照射后60 d基本消失，無呼吸急促現(xiàn)象。

2.2 3組大鼠肺組織SOD活性變化比較 與A組相比，B組大鼠照射后肺組織中SOD活力逐步下降，照射后30 d下降最顯著（P＜0.05）；同期相比，C組大鼠SOD與A組相比無差異，顯著高于B組（P＜0.05，見表1）。

表1 各組肺組織中SOD活力變化Tab.1 Changes of SOD activity in lung tissue in each group

2.3 3組大鼠右肺系數(shù)比較 第30、60天，與B組相比，C組大鼠右肺系數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；第120天3組大鼠右肺系數(shù)組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（見表2）。

表2 3組大鼠右肺系數(shù)比較Tab.2 Comparison of the right lung coefficient among three groups

2.4 3組大鼠肺組織MDA含量比較 與A組相比，B組大鼠肺組織MDA活性處于較高水平，從第30天到第120天呈上升趨勢（P＜0.05）；與B組相比，C組大鼠MDA水平顯著降低（P＜0.05，見表3）。

表3 3組大鼠肺組織MDA活性比較Tab.3 Comparison of MDA activity in lung tissue among three groups

3 討論

放射性肺損傷按照中醫(yī)學(xué)癥候?qū)W的特點，其病因病機為熱毒內(nèi)侵，灼傷肺絡(luò)，傷津耗氣，痰瘀互結(jié)，氣陰兩傷［3-4］，應(yīng)屬于肺痿、喘證的范疇，整體表現(xiàn)為骨髓抑制、免疫功能下降、肺組織纖維化，局部表現(xiàn)為喘息、咳嗽、呼吸苦難等癥狀［6］。放射性肺損傷由于胸部腫瘤患者肺組織接受放療照射的劑量超過一定的閾值，激活相關(guān)炎癥因子，導(dǎo)致肺部炎癥的發(fā)生，如不加以控制后期惡化轉(zhuǎn)化為肺纖維化。對于放射性肺損傷的發(fā)病機制目前沒有達成共識，臨床研究證實，中醫(yī)藥提取物及方劑治療放射導(dǎo)致的肺損傷的機理主要有：①保護血管內(nèi)皮細(xì)胞，改善血液循環(huán)，抑制NO活性，降低血管通透性，抑制血小板聚集作用增加水通道蛋白的表達，減輕肺水腫和纖維化的發(fā)生；②與調(diào)節(jié)Th1／Th2型細(xì)胞因子有關(guān)；或通過抑制TGF-β表達，使炎癥及纖維化病變減輕；降低肺組織組織膠原纖維的合成，降低血清TGF-β、TNF-α水平，縮短高峰時間，增加血清干擾素水平；③抗氧化和清除自由基作用，通過減少射線引起的過氧化損傷，增強肺組織抗氧化能力，抑制成纖維細(xì)胞增殖［6-9］。

SOD具有清除機體內(nèi)過多的超氧負(fù)離子自由基的能力，檢測組織中SOD的活力水平能夠了解機體組織對氧化物、自由基等的清除能力。通過檢測機體內(nèi)MDA的含量可間接反映體內(nèi)SOD活力，反映體內(nèi)脂質(zhì)氧化程度，了解機體氧化－抗氧化系統(tǒng)能力。大量研究證實丹參提取物能顯著地提高小鼠體內(nèi) SOD的活力［10-12］，提高小鼠肺組織中抗氧化活力。SOD水平高的大鼠不容易發(fā)生放射性損傷［13］。丹參類化合物含有隱丹酮，酚酸類化合物，其含有許多酚羥基，該類化合物具有顯著抗氧化特點［13］。本實驗研究顯示，丹參提取物能顯著改善大鼠放射性肺損傷大鼠的精神狀態(tài)，提高血清SOD水平，降低MDA含量和大鼠右肺系數(shù)，從而阻止肺組織相關(guān)炎癥的發(fā)生，預(yù)防肺部纖維化。對于丹參提取物治療放射性肺損傷在抗氧化作用方面的具體機制，還有待于進一步研究。

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（編校：吳茜，王冬梅）

Experimental study of prevention effect of Salvia M iltrorrhiza extracts on radiation-induced lung injury in rats

ZHENG Bo1，JIAN Xiang-dong2

（1.Department of Radiology，Shandong Province Traffic Hospital，Jinan 650216，China；2.Department of Clinical Medicine，Shandong University，Jinan 250012，China）

ObjectiveTo observe the effect of Salvia Miltrorrhiza extracts of preventing radiation-induced lung injury in rats and explore its feasibility and mechanism as a radiation-induced lung injury prevention measure.Methods72 healthy adult female Wistar rats were randomly divided into three groups；control group（A），the irradiation group（B），irradiation and Salvia Miltrorrhiza extracts group（C）.One week before irradiation，A and B group were treated with physiological saline by gavage，C group were treated with Chinesemedicine daily by gavage.The drugswere stopped after two weeks12Gy irradiation，and length ofmedication usewas threeweeks.Oneweek after administration，B and C group were treated with 12Gy irradiation by linear accelerator.，six ratswere randomly selected and killed after 30 days，60 days，120 days irradiation，and the general conditions of rats were detected and compared.SOD contentwas detected by ELISA，MDA contentand the right lung coefficientwere detected by thiobarbituric acid colorimetric method.ResultsThe rats in B group after irradiation appeared such symptoms as listlessness，loss of appetite，decreased response to stimulation，and the symptoms gotworse with the extension of time；themental state of rats in C group had more improvement than those in B group；after 30 days，60 days，120 days irradiation，the SOD levelsofC group was close to A group，and significantly higher than B group with significantdifference（P＜0.01）；after 30 days，60 days irradiation，the right lung coefficientof rats in C group was significantly lower than B group（P＜0.05），which showed that Salvia Miltrorrhiza extracts could prevent the growth of rat lung coefficient；after30 days，60 days，120 days irradiation，theMDA contentof rats in C group was higher than that in B group，and there was significant difference（P＜0.05）.ConclusionSalvia Miltrorrhiza extracts could significantly improve symptoms of ratswith radiation-induced lung injury，increase serum levels of SOD，and decrease MDA content and the right lung coefficient，which showed protective effects.

radiation-induced lung injury；Salvia Miltrorrhiza extracts；levels of SOD；MDA content；lung coefficient

R563.19

A

1005－1678（2014）09－0058－03

山東省自然科學(xué)基金（Y2008C123）

鄭波，男，本科學(xué)士，主治醫(yī)師，研究方向：醫(yī)學(xué)影像診斷、X線引導(dǎo)下介入治療，E-mail：qch1821460090＠163.com。