張紅巖，王中漢，韓大慶，唐 巖

(1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春130012;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙410013)

吉林省不同產(chǎn)地五味子中木質(zhì)素類成分含量的差異性

張紅巖1，王中漢2，韓大慶1，唐 巖1

(1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春130012;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙410013)

目的 比較不同產(chǎn)地五味子中木質(zhì)素類成分含量差異性，探討其與產(chǎn)地相關(guān)性，為確定我省五味子道地藥材的主產(chǎn)區(qū)及規(guī)范化種植基地的藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)提供依據(jù)。方法 采集吉林省不同產(chǎn)地五味子藥材，采用高效液相色譜法，色譜柱為Apollo-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈(A)-水(B)，梯度洗脫(0～15 min，50% ～60%A;15～50 min，60% ～75%A);檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm;流速為1.0 mL/min;柱溫為30℃，分別測(cè)定其中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量。結(jié)果 五味子藥材中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量在產(chǎn)地間差異性顯著。結(jié)論 初步選擇旺起鎮(zhèn)、萬(wàn)良鎮(zhèn)、松江鎮(zhèn)、長(zhǎng)白鎮(zhèn)、泉陽(yáng)鎮(zhèn)為五味子品質(zhì)優(yōu)良產(chǎn)地。

五味子;木質(zhì)素;質(zhì)量控制;高效液相色譜法

本實(shí)驗(yàn)以吉林省五味子藥材產(chǎn)地為研究重點(diǎn)，選擇9個(gè)不同產(chǎn)地藥材為研究對(duì)象，研究建立五味子藥材中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3種成分HPLC測(cè)定法，同時(shí)采用該方法測(cè)定不同產(chǎn)地五味子中3種木脂素成分的含量，并對(duì)不同產(chǎn)地間五味子木質(zhì)素類成分含量差異性進(jìn)行了分析研究，以期選出優(yōu)質(zhì)藥材產(chǎn)地及建立五味子藥材中木脂素類成分含量測(cè)定方法，為五味子藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)［1-4］。

1 儀器與試藥

LC-10AT型高效液相色譜儀(日本島津);SPD-10Avp紫外檢測(cè)器(日本島津);LC solution色譜工作站;XS-105梅特勒-托利多電子分析天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司);KQ-250超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。五味子甲素對(duì)照品(批號(hào):110764-200408)、五味子乙素對(duì)照品(批號(hào):110765-200609)、五味子醇甲對(duì)照品(批號(hào):110857-200709)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。五味子藥材(分別采自吉林省內(nèi)9個(gè)不同產(chǎn)地:二道白河鎮(zhèn)、松江鎮(zhèn)、旺起鎮(zhèn)、豐滿區(qū)勝利村、柳洞林場(chǎng)、長(zhǎng)白鎮(zhèn)、萬(wàn)良鎮(zhèn)、泉陽(yáng)鎮(zhèn)、囉江鄉(xiāng))。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱為Apollo-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈(A)-水(B)，梯度洗脫(0 ～15 min，50% ～60%A;15～50 min，60% ～75%A);波長(zhǎng)為 220 nm;流速為1.0 mL/min;柱溫為30℃;進(jìn)樣量為10 μL。在此條件下，樣品中五味子醇甲、甲素、乙素峰和其他組分色譜峰可達(dá)基線分離，理論塔板數(shù)按五味子醇甲計(jì)算不低于4 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 分別精密稱取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1 mL各含0.1，0.04，0.06 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液 取五味子藥材粉末0.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇20 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密稱取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1mL各含0.2，0.048，0.12 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液各1，2，3，4，5 mL，分別置5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液。精密吸取上述系列對(duì)照品溶液各10 μL。注入液相色譜儀，依法測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，峰面積(A)為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。五味子醇甲:Y=6 628 959.67X+220 612.7，r=0.999 6;五味子甲素:Y=6 419 208.96X+65 981.2，r=0.999 6;五味子乙素:Y=6 292 839.40X+95 274.0，r=0.999 6。結(jié)果表明:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分別在0.399 2～1.996 2，0.160 8 ～0.804 0，0.241 6 ～1.248 0 μg 范圍內(nèi)，對(duì)照品溶液進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液于室溫放置，精密吸取同一供試品溶液各 10 μL，分別于 0，2，4，8，16，24 h依法測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為0.3%、0.2%、0.6%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)均較穩(wěn)定。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積 RSD分別為0.35%、0.32%、1.19%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批次藥材粉末6分，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的RSD分別為1.2%、1.07%、1.74%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的五味子藥材粉末(二道白河鎮(zhèn)樣品，五味子醇甲含量4.1 mg/g、五味子甲素含量1.2 mg/g、五味子乙素含量2.1 mg/g)6分，每分0.25 g，精密稱定，分別加入上述3種對(duì)照品混合溶液(五味子醇甲含量0.997 mg/mL、五味子甲素含量0.31 mg/mL、五味子乙素含量0.531 mg/mL)1 mL，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率。結(jié)果，五味子醇甲平均回收率為99.19%，RSD為1.6%(n=9);五味子甲素的平均回收率為98.56%，RSD為1.5%(n=9);五味子乙素的平均回收率為99.31%，RSD為1.9%(n=9)。

2.3.6 樣品含量測(cè)定 取“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液和供試品溶液依法測(cè)定，結(jié)果:吉林省不同產(chǎn)地五味子藥材3種木質(zhì)素類成分含量，以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3種成分總和作為總木質(zhì)素含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 吉林省不同產(chǎn)地五味子藥材中木質(zhì)素含量測(cè)定結(jié)果%

3 小結(jié)

3.1 色譜條件篩選 文獻(xiàn)記載檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm或220 nm，筆者分別在上述2個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)下進(jìn)行了色譜條件篩選:在檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm下，分別采用Agilent-ZORBAX SB(150 × 4.6 mm，5 μm)、Diamonsil-C18柱(250 ×4.6 mm，5 μm)和 Apollo-C18柱(250 ×4.6 mm，5 μm)色譜柱和甲醇-水、甲醇-乙腈(3∶2)-水和乙腈-水梯度洗脫系統(tǒng)來(lái)分離測(cè)定3種成分，結(jié)果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3種成分的分離度和重復(fù)性均不理想;在檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm下，采用 Apollo-C18(250×4.6 mm，5 μm)色譜柱和甲醇-乙腈(3∶2)-水及乙腈-水梯度洗脫系統(tǒng)來(lái)分離測(cè)定3種成分，結(jié)果表明，與250 nm比較，采用乙腈-水流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，靈敏度提高2～3倍，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3種成分均達(dá)到基線分離，重復(fù)性好。

3.2 提取溶劑的選擇 選擇甲醇、乙醇及80%甲醇3種不同溶劑，分別采用超聲提取法提取，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量。結(jié)果:以甲醇作為提取溶劑，樣品中3種成分含量為最高，故最終選用甲醇作為提取溶劑。

3.3 提取方法的選擇 分別比較了超聲提取40 min、放置30 min超聲提取40 min及回流提取40 min 3種提取方法，結(jié)果3種提取方法提取五味子藥材中木脂素類成分含量相近，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致，故采用甲醇超聲制備供試品溶液，方法最簡(jiǎn)便易行。

3.4 不同產(chǎn)地五味子藥材中木質(zhì)素類成分含量差異性及與產(chǎn)地相關(guān)性 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，吉林省9個(gè)不同產(chǎn)地五味子藥材中3種木質(zhì)素成分含量存在很大差異性，并且無(wú)相關(guān)性，五味子醇甲含量0.4～0.63%，旺起鎮(zhèn)含量最高0.63%，二道白河鎮(zhèn)含量最低0.4%，變異值 57%;五味子甲素含量 0.07% ～0.16%，旺起鎮(zhèn)含量最高0.16%，囉江鄉(xiāng)含量最低0.07%，變異值128%;五味子乙素含量0.2% ～0.27%，旺起鎮(zhèn)、豐滿區(qū)勝利村含量最高0.27%，二道白河鎮(zhèn)含量最低0.2%，變異值29%;木質(zhì)素總和含量0.72% ～1.06%，旺起鎮(zhèn)含量最高1.06%，二道白河鎮(zhèn)含量最低0.72%，變異值45%，差異性大小順序?yàn)?五味子甲素＞五味子醇甲＞五味子乙素，其中含量差異性最大的五味子甲素高低相差1倍以上。

本試驗(yàn)建立了五味子藥材中3種木質(zhì)素類有效成分的高效液相色譜測(cè)定方法，即在同一供試品條件下同時(shí)測(cè)定3種成分，具有準(zhǔn)確、重復(fù)性好等特點(diǎn)，可用于五味子藥材的質(zhì)量控制［5-9］。

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Differences of the contents of lignans inSchisandra chinesisfrom different habitats in Jilin

ZHANG Hongyan1，WANG Zhonghan2，HAN Daqing1，TANG Yan1
(1.Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical Sciences，Changchun 130012，China;2.Xiangya School of Medicine，Central South University，Changsha 410013，China)

Abstract:ObjectiveComparative studies on differences of the contents of lignans inSchisandra chinesisfrom different habitats，and exploring the correlation among habitats in order to provide the basis for determining the main producing areas of famous-region drug ofSchisandra chinesisand the quality evaluation of medicinal materials of the normalized planting base in our province.MethodsThe contents of schisandrin，deoxyschizandrin and schisandrin B inSchisandra chinesiscollected from different habitats in Jilin were determined by RP-HPLC，respectively.Using Apollo-C18column(250 ×4.6 mm，5 μm);Acetonitrile(A)-water(B)was used as gradient mobile phase(0 ～15 min，50%-60%A;15 ～50min，60%-75%A).The detection wavelength was 220 nm，the flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was 30 ℃.ResultsThe contents of schisandrin，deoxyschizandrin and schisandrin B inSchisandra chinesiswere different significantly among habitats.ConclusionsPreliminary experiments showed that the town of Wangqi，Wanliang，Songjiang，Changbai and Quanyang were selected as the good quality habitats ofSchisandra chinesis.

Key words:Schisandra chinesis;Lignans;quality control;HPLC

R284.1

A

2095－6258(2014)04－0606－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.016

吉林省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(2011-zd13)。

張紅巖(1964－)，男，主任藥師。研究方向:中藥化學(xué)成分、質(zhì)量及中藥新藥開發(fā)。

(

2014－04－30)